B tR ，B Dg
Dg
T
或Dg
T M
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2、 HPLC：H He Hs u （忽略纵向扩散项后）
Hd Cd Dm
Dm
T
柱温T 低，流动相 大 B相忽略
讨论：
1）流动相流速对HPLC板高的影响（与GC对比）
u 1cm / s时，H u u H ，n 柱效 ，但tR
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HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用 力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起正向 作用。且流动相种类较多，选择余地广，改变流动相 极性和pH值也对分离起到调控作用，当选用不同比例 的两种或两种以上液体作为流动相也可以增大分离选 择性。 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）
)2
W1 2
k
t
' R
t0
neff
n理
( 1
k
k
)
2
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二、速率理论（与GC对比）
1、 GC：H A B / u C u （填充柱）
或 H B / u C u （毛细管柱）
A 2 dp
A dp
B 2 Dm 2 Dg
利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面。 （1）分离机制：分配 + 吸附（以LLC为基础）
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（2）特点： 不易流失 热稳定性好 化学性能好 载样量大 适于梯度洗脱
2、液固吸附色谱法（LSC） 流动相为液体，固定相为固体吸附剂。
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2）涡流扩散项及其影响
He 2 dp He dp
，dp A H ，n 柱效
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3）纵向扩散项
Hd
Cd Dm u
分子在液相中的扩散系数比气相中要小4-5个数量
级，当流动相的线速度大于 0.5 cm/s时，此项可以忽
略。
4）传质阻力项及其影响
（1）固定相传质阻力项
Hs
Cs
d
2 f
Ds
u
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（2）流动相传质阻力项 ①流动的流动相传质阻力项
Hm
Cmd
2 p
Dm
u
②滞留的流动相传质阻力项
H sm
Csm
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（1）分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附 活性中心能力的差异
S
tR
t0 (1
K
Vm
)
kK S Vm
分离前提：K不等或k不等
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3-3 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理
1.液液分配色谱法（LLC）及化学键合固定相色谱
（CBC） （1）分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异 （2）固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法）
缺点：系统内部压力大，易流失，不实用 固定液——极性
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3-2 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 理论与气相色谱一致。
一、塔板理论
H理 L / n理
n理
(tR
)2
5.54( tR W1 2
)2
16(tR W
)2
Heff L / neff
neff
16( t
' R
)
2
W
5.54(
t
' R
第3章 高效液相色谱分析法 HPLC
（High Pertormance Liquid Chromatography）
3-1 高效液相色谱法的特点
一、高效液相色谱法特点
高效液相色谱法特指一种用液体为流动相的色谱 分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上，采用了 高压泵、化学键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检 测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。
固定液——非极性
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（3）正相色谱——固定液极性 > 流动相极性 极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱适于
分离极性组分。 反相色谱——固定液极性 < 流动相极性 极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱适于
分离非极性组分。 （一）常规化学键合相
T Dm Ht ，但易产生气泡
T Dm ， ，柱阻
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结论： 1、提高柱效，必须提高柱内填料装填的均匀性 和减小粒度以加快传质速率。 2、液相色谱的柱效比气相高的多，且流速比 GC流速小近一个数量级。 3、HPLC还要主意柱外展宽，包括柱前扩展和 柱后扩展，前者主要是由进样所引起，后者主 要是由连接管、检测器流通池体积所引起。
d
2 p
Dm
u
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化学化工学院HtHmFra bibliotekHsm
Hs
Hm
H
（忽略固定相传质阻抗）
sm
HPLC：H He Cm u Csm u
dp 2 H m H sm Dm
H dp2 Dm
Dm
T
dp Ht H ，n 柱效
Dm H ，n 柱效
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高压：150-350×105 Pa
高速：一般在1h内完成 高效：大于30000塔板/米 高灵敏：10-9g （紫外检测）、10-11g （荧光检测） 二、HPLC与GC差别 1．分析对象的区别
GC：适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样 品；但对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及 高聚物的样品，尤其对大多数生化样品不可检测占有 机物的20%。
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HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品（包括有 机介质溶液），不受样品挥发性和热稳定性的限制， 对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分 子和离子型样品均可检测。用途广泛，占有机物的 80%。 2．流动相差别的区别
GC：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用 力，只与固定相有相互作用。