时珍国医国药 2007 年第 18 卷第 10 期
LISH IZHEN M ED I CI N E AND MA TER I A M ED ICA R ESEARCH 2007 VO L. 18 N O. 10
超声波提取甘草黄酮及其抑菌活性研究
曾超珍, 刘志祥, 吴耀辉, 王晓玲
( 中南林业科技大学生命科学与技术学院, 湖南 长沙 410004) 摘要: 目的 研究甘草中的黄酮提取方法和抗 菌活性。 方法 利用超 声波技 术通过 正交试 验提取 甘草中 的黄酮, 杯碟 法
2. 4
最低抑菌浓度和最小杀菌浓度的确定 结果见表 5 。
表 2 正交实验结果 试号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 k1 k2 k3 R A 1 1 1 2 2 2 3 3 3 4 . 28 4. 47 5. 47 1. 19 B 1 2 3 1 2 3 1 2 3 4 . 68 4 . 81 4 . 70 0 . 12 C 1 2 3 2 3 1 3 1 2 4 . 63 5 . 07 4 . 49 0 . 58 D 1 2 3 3 1 2 2 3 1 4 . 84 4 . 67 4 . 68 0 . 18 提取率 ( % ) 4. 24 4. 63 3. 96 4. 71 4. 42 4. 28 5. 10 5. 37 5. 87
表 1 因素水平表 水平 1 2 3 A 超声功率 /W 185 285 385 B C 料液比 ( W /V ) 乙醇浓度 ( % ) 1B 10 1B 15 1B 20 70 80 90 D 提取时间 /m in 8 10 12
甘草是豆科甘草 属植物干燥的根和根茎 , 是临床上最常用的 中药材之一 [ 1] 。近年 来 , 对甘 草黄 酮化 合物 的研 究引 起了 人们 的关 注。据报道 , 甘草黄 酮是一类生 物活性较 强的天然产 物 , 具 有抗菌、 抗氧化、 抗心 率失 常、 抗肿 瘤、 降血 脂、 保肝 等作 用 [ 2, 3] , 超声波具有加速药材 中有效成分 溶解、 缩短 提取时 间、 提 高有效 成分的提取率等优点 [ 4] , 因此 , 本 文通过 正交实 验探讨超 声波提 取甘草黄酮的最佳提 取条件 , 为大规模高效生产甘草黄酮提供了 有力的理论依据。甘草黄酮的体外抗菌 的研究较少 , 本实验对最 佳提取条件下的黄酮 提取液对一些细菌和真菌进行了抑菌试验 , 旨在能开发一种天然 的抑菌剂 , 并为临床用药提供理论依据。 1 材料与方法 1. 1 材 料 甘 草 : 购 于湖 南长 沙 康尔 佳 药店 , 粉 碎过 40 目 筛 , 80e 烘干备用。 芦丁标准品 : 购于中国上海医药化学试剂公司 供试菌种 : 金色葡萄球菌、 枯草杆菌、 大肠杆菌、 黑曲霉、 青霉 由本实验室保存并培 养。 1. 2 方法 1. 2 . 1 超声波提取法 称取 甘草粉 10 g , 采用 L9 ( 34 ) 按表 1 方 法进行超 声波提取 , 提取液 过滤 , 合并滤液 , 定容 至 100 m ,l 摇匀 备用。 1. 2 . 2 对比实验 煎煮法 : 称取甘草粉 10g , 加 水 200 m , l 浸 泡 30 m in, 煮 沸后 , 文火煎 60 m in, 过滤 , 共煎煮两次 , 合并滤液 , 定容至 100 m , l 摇匀
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LISH IZH EN M ED IC I NE AN D M ATER I A M ED I CA RESEAR CH 2007 VOL. 18 NO. 10
时珍 国医国药 2007 年第 18 卷第 10 期
养基 , 混匀后 , 倒入平板 , 凝固 后加入 100 L l 106 ~ 107 CFU /m l的 菌液 , 涂布均匀 , 放 至 37e /28e 培 养 24 h 后观 察结果。 菌落被 完全 抑制的最 高稀释 度提取 物浓度 即 M I C。培养 48 h 后 , 菌落 被完全抑制的最高稀 释度提取物浓度为 M BC。 2 结果与分析 2. 1 超声波提取法条件的优化 利用 L9 ( 34 ) 正交试验法优化甘 草黄酮提取条件结果 见表 2, 各因素对试 验结果影 响顺序 为 A > C> D > B, 即超声波功率 对黄酮 提取率 的影响 效果最 为显 著 , 其 次是 超 声 波 时 间。 最 佳 提 取 条 件 为 A3 B 2 C 2 D1 , 即 在 功 率 为 385 W, 80% 乙醇 , 料液比为 1B 15, 提取时间为 8 m in 条件下甘草 提取液黄酮含量最高。以该最佳提取条 件进行验证实验 , 甘草黄 酮提取率为 6. 23% , RSD = 0. 862% ( n = 6), 因此该最佳提取条件 是可行的。
对其进行抗菌活性的研 究 。结果 超声波最佳的提取条件为功率 385W, 80% 乙醇 , 料液比为 1B 15, 提取时间 为 8 m in, 黄 酮提取率为 6. 23% 。 该提取液对金色葡萄球菌 、 枯草杆菌 、 大 肠杆菌 、 黑曲霉 、 青霉 都有明 显的抑 菌效果 , 最低 抑菌浓 度 分别为 : 0. 062 5, 0. 062 5, 0. 031 3, 0 . 15, 0 . 25 m g /m ;l 最小杀菌浓度为 0. 25, 0. 125, 0. 031 3, 0. 5, 0 . 25 m g /m 。 l 结论 超 声 波技术是提取甘草黄酮 的高效方法 , 甘草具有较强的抗菌活性 。 关键词 : 超声波提取; 甘草; 黄酮; 抑菌活性
son ic techno logy , flavono ids were extracted for m Glycy rrhiza by o rthogona l experi m ent , and the ir bacter iostatic activ ity were stud ied by cy linder p la te m ethod. Re su lts The op ti m um ex tractiv e cond itions for flavono ids were ultrasonic powe r 385W, ethano l 80% , ratio o f so lid to liqu id 1B 15, ex tracting ti m e 8 m in. U ltrason ic technology had the h ighest extraction rate 6. 23 % . T he substance ex tracted showed som e antib io tic activ ity aga inst Staphy lococcus aureus , Bacillus subtil, E scherich ia coli, A sp ergillu s ni ger, p enicillium, the m in i m um inh ib ito ry concentration (M IC) w as 0 . 0625, 0. 0625, 0. 0313, 0. 125, 0. 25 m g /m , l and m ini mum bacter ic ida l concentrations ( M BC ) w as 0. 25, 0 . 125, 0. 0313, 0 . 25 , 0. 5 m g /m l respective ly . Con clusion U ltrasonic techno logy is an effective m ethod for extracting flavono ids fro m G lycyrrhiza, w hich showed strong antibio tic ac tiv ity .
ZENG C hao - zhen , L IU Z hi x iang , WU Y ao -hu,i WANG X
iao - ling (C ollege of L if e S cience and T echnology, C en tral South University of Forestry and T echnology, Chang sha, 410004 , China) Abstract : O bjective T o study on flavono ids ex traction from Glycy rrhiza and their bac teriostatic activ ity. M ethod s U s ing u ltra
1. 2. 3 标准曲 线的制作 称取 在 105e 下 干燥恒重 的芦丁对 照 品 10 m g , 用 95 % 的乙醇溶解 , 摇匀 , 定容至 10 m l使之 成为浓 度 为 1 mg /m l的芦丁标准品溶液 , 作为储备液备用。 量 取上述溶液 0 , 0. 1, 0. 2, 0 . 3 , 0. 4, 0. 5, 0. 6 m , l 分别加水 至 3 m ,l 加 5% 的亚硝酸钠溶液 0 . 5m, l 放置 6 m in , 加 10% 的硝酸铝 溶液 0. 5 m , l 摇匀 , 放置 6 m in, 后加 5% 的氢氧 化钠溶液 2. 5 m ,l 混匀 , 放置 15 m in 后蒸馏水 定容 10 m ,l 用紫外分光光度计在 510 nm 处测其吸光度 , 得到回归方程 为 : A = 9. 933 9C - 0. 001 73( R 2 = 0. 997 5) 1. 2. 4 甘草黄酮的 抑菌实验 采用杯碟法测定其抑菌 作用 , 取 浓 度 106 ~ 107 CFU /m l 的各种待试 菌悬液 0. 2 m ,l 与相 应灭菌培 养 基 15 m l混合制成混菌平 板 , 凝固 后 , 在平板 上等 距离放 入 4 个 灭菌牛 津杯 , 每个菌设置 3 个重复 , 一个无菌生理盐水为对照 , 取 0. 1 m l黄酮提取液加入牛津杯中 , 细菌 37e 、 真菌 28e 培养 18~ 收稿日期 : 2007-02 -15 ; 修订日期 : 2007-04 -27 24 h 后 , 移去 牛津杯 , 量取抑菌圈直径 , 直径越大抗菌活性越强。 基金项目 : 湖南省教育厅面上资助项目 ( N o. 06C891) 1. 2. 5 最低抑菌 浓度 (M IC) 和最小杀菌浓度 (M BC) 的测定 用 作者简介 : 曾超珍 ( 1978 -), 女 (汉族 ), 广西岑溪人 , 现任中南林业科技大学 无菌水 将甘 草 黄 酮 提 取 液 稀 释 , 终 浓 度 分 别 为 1 , 0. 5, 0. 25, 生命科学与技术学院讲师 , 硕士学位 , 主要从事药用植物的教学 、 科研工作 . 0. 062 5, 0. 031 3 , 0 . 007 8 m g /m 。取 l 2 m l提取稀释液至 15 m l培