１．１
每天测量体温观察体表变化，收集粪便。感染后０
ｄ、３ ｄ、７ ｄ、７
ｄ和３０ ｄ采集血液，分离血清。感染后３
ｄ和３０ ｄ，分别处死高剂量组和低剂量组雌性
和雄性小鼠各一只，取心脏、肝脏、脾脏、胃、肾脏、食 管、小肠、大肠和肠系膜淋巴结等器官冻存于液氮 中，研究ＭＮＶ－ＣＷｌ的主要感染部位。解剖小鼠十 二指肠放人４％多聚甲醛中，用于病理切片研究。 对照组小鼠于感染后３０ ｄ处死。 １．５病毒ＲＮＡ检测
立的ＭＮＶ—ＣＷｌ感染Ｃ５７ＢＬ／６小鼠模型为ＭＮＶ感染小鼠致病机制进一步研究提供实验信息和技术
支撑。
【主题词】
鼠诺如病毒；小鼠；实验感染
基金项目：中国博士后科学基金（２０１５Ｍ５８０１４２）
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃ５７ＢＬ／６ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｓｔｒａｉｎ
ＣＷＩ
ｏｆ
拷贝。
２．４小鼠组织中病毒分布情况感染后３
３０
ｄ、７ ｄ和
本研究选用的小鼠品系是Ｃ５７
ＢＬ／６。Ｃ５７ ＢＬ／
ｄ，分别处死高剂量组和低剂量组雌性和雄性小
６小鼠基因敲除后，广泛用于病原体致病机制研究。 对人类传染性疾病的研究经常借助于实验动物模 型。对鼠诺如病毒ＭＮＶ．ＣＷｌ感染Ｃ５７ＢＬ／６小鼠 的研究有利于对ＭＮＶ．ＣＷｌ致病机制进行深入 研究。 ４参考文献
２ ａｆｔｅｒ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ
ｓｐｌｅｅｎ ａｎｄ ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ｉｔ
ｍｉｃｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ
ｆｕｒｔｈｅｒ
ａｎｉｍａｌ
ｍｏｄｅｌ ｏｆ ＭＮＶ．ＣＷｌ
ｗａｓ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ａｎｄ
ｗｉｌｌ ｐｒｏｖｉｄｅ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ．Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｏｈｈｏｔ ０１０１１０，Ｃｈｉｎａ（Ｗａｎｇ ＨＭ，Ｗａｎｇ Ｙ） Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｇａｏ Ｇｅｏｒｇｅ Ｆ．，Ｅｍａｉｌ：ｇａｏｆ＠ｉｍ．ａｃ．ｃｎ；Ｄｕａｎ Ｚｈａｏｊｕｎ，Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｏｊｕｎｄ＠１ ２６．ｃｏｒｎ
诺如病毒（Ｎｏｒｏｖｉｒｕｓｅｓ，ＮｏＶｓ）属于杯状病毒科
（Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ ｆａｍｉｌｙ），是全球急性胃肠炎散发病例
细菌感染的帮助下成功用Ｂ细胞培养成功…。缺 少成熟的体外复制体系和合适的小动物感染模型， 严重阻碍了ＮｏＶ致病机理等方面的研究。 根据基因特征，诺如病毒可分为６个基因群 （Ｇｅｎｏｇｒｏｕｐ，ＧＩ－ＧＶＩ），ＧＩ和ＧＩＩ是引起人类急性小肠。我们的研究表明主要在消化道和脾脏检 测到ＭＮＶ．ＣＷｌ。下一步研究还需要在小鼠感染 ＭＮＶ．ＣＷｌ病毒后第１天和第２天进行解剖，检测 病毒基因组负链ＲＮＡ在组织中的分布，以确定病毒 复制部位。
ｄ小鼠血清中的核酸，利用Ｒｅａｌ．ｔｉｍｅ ＰＣＲ检测
ＭＮＶ．ＣＷｌ病毒ＲＮＡ，只有在第３天检测到一只雌 性小鼠血清中ＭＮＶ—ＣＷｌ阳性，含量为１．０４×１０４
［１］
Ｃｒｅｍｏｎ Ｃ，Ｄｅ Ｇｉｏｒｇｉｏ Ｒ，Ｂａｒｂａｒａ Ｇ．Ｎｏｒｏｖｉｒｎｓ ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ
鼠各一只，取心脏、肝脏、脾脏、胃、肾脏、食管、小肠、 大肠和肠系膜淋巴结等器官，提取ＲＮＡ，检测ＭＮＶ． ＣＷｌ病毒ＲＮＡ，研究ＭＮＶ．ＣＷｌ的主要感染部位。 结果表明ＭＮＶ—ＣＷｌ主要感染部位为肝脏、脾脏、 胃、食管、小肠和肠系膜淋巴结等器官。 ２．５小鼠十二指肠病理分析感染后３ ｄ处死的 小鼠，解剖十二指肠，用于病理切片分析。结果分析 与正常小鼠十二指肠组织切片相比，感染小鼠十二 指肠组织切片没有明显的病理改变。 ３讨论 ＮｏＶｓ是严重危害人类健康的重要食源性病毒， 可导致不同年龄段人群的急性病毒性腹泻。对 ＮｏＶｓ的致病机制尚不是很明确。但是ＮｏＶｓ在体外 不能增值，而ＭＮＶ却可以在传代细胞小鼠巨噬细 胞系ＲＡＷ２６４．７细胞上生长并产生细胞病变，因此 ＭＮＶ成为了ＮｏＶｓ的替代病毒进行研究。ＭＮＶ在 实验动物中广泛传播，几乎所有的实验小鼠对此病 毒易感‘６１。本研究利用ＭＮＶ—ＣＷｌ感染Ｃ５７
ｏｒａｌｌｙ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＭＮＶ－ＣＷｌ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｓ ｏｆ
ｃａｎｎｏｔ
ＰＦＵ ｐｅｒ ｍｏｕｓｅ．Ａｆｔｅｒ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌ．ｗｅ
ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ ＲＮＡ ｉｎ ｆｅｃｅｓ．ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｏｒｇａｎｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｉ．ｉｓｓｎ．１００３－９２７９．２０１６．０３．００２
【摘要】
目的
探讨鼠诺如病毒（Ｍｕｒｉｎｅ ｎｏｒｏｖｉｕｒｓ，ＭＮＶ）感染Ｃ５７ＢＬ／６小鼠后Ｉ临床及生物学 将ＭＮＶ—ＣＷＩ毒株以高剂量（１０４ＰＦＵ／只）和低剂量（１０２ＰＦＵ／
特征，了解ＭＮＶ的感染特点。方法
（Ｖｉｒａｌ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ
使用病毒核酸提取试剂盒
Ｋｉｔ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ＩＩ，Ｇｅｎｅａｉｄ）提取
粪便和血清中的病毒ＲＮＡ。利用匀浆机破碎组织， 使用试剂盒（ＲＮｅａｓｙ
Ｍｉｎｉ
实验动物７只７周龄ＳＰＦ级Ｃ５７ＢＬ／６雌性
Ｋｉｔ，ＱＩＡＧＥＮ）提取组织中
小鼠和７只８周龄雄性Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，购自北京维 通利华实验动物技术有限公司［ＳＣＸＫ（京）２０１２— ０００１］。动物实验在中国疾病预防控制中心实验动 物中心生物安全二级实验室中进行。并通过了中国 疾病预防控制中心病毒病预防控制所实验动物伦理 委员会的审查（批准号：２０１５１１０４００３１）。 １．２病毒 ＭＮＶ－ＣＷｌ病毒由美国华盛顿大学医 ＩＶ教授馈赠。并在
和暴发疫情的主要致病原…。ＮｏＶ变异快，环境抵 抗力强，传播途径多样，全人群普遍易感，疾病负担 严重。ＮｏＶ很难在体外复制分离，仅有文献报道在
万方数据
肠炎的两个主要基因群，ＧＩＶ也可感染人，但很少被 检出。ＧＩＩＩ、ＧＶ和ＧＶｌ分别感染牛、鼠和狗。２００３ 年Ｋａｒｓｔ等人首次从免疫缺陷小鼠（ＲＡＧ／ＳＴＡＴ一／－） 体内分离得到鼠诺如病毒（Ｍｕｒｉｎｅ
ｍｕｒｉｎｅ ｎｏｒｏｖｉｒｕｓ
Ｐａｎｇ
Ｌｉｌｉ，Ｊｉｎ Ｍｉａｏ。
Ｗａｎｇ Ｈｕｉｍｉｎ，Ｗａｎｇ Ｙｉｎｇ，Ｃｈｅｎ Ａｉｊｕｎ，Ｌｉ Ｈｕｉｙｉｎｇ，Ｚｈａｎｇ Ｑｉｎｇ，Ｇａｏ Ｇｅｏｒｇｅ Ｆ．，Ｄｕａｎ Ｚｈａ巧ｕｎ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ
ｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１０１，Ｃｈｉｎａ［Ｐａｎｇ ＬＬ（ｐｏｓｔ ｄｏｃｔｏｒ），Ｇａｏ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ
ＧＦ］：Ｎａｔｉｏｎａｌ
ｆｏｒ Ｖｉｒａｌ
Ｄｉｓｅａｓｅ
Ｃｏｎｔｒｏｆ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｅｎｔｅｒ／ｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ
Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０２２０６，Ｃｈｉｎａ（Ｐａｎｇ ＬＬ，Ｊｉｎ Ｍ，Ｃｈｅｎ Ａ．，，ＬｉⅣｙ，Ｚｈａｎｇ Ｑ，Ｄｕａｎ ＺＪ）；Ｂａｓｉｃ
ｎｏｒｏｖｉｒｕｓ，
鼠（包括６只雄性小鼠和６只雌性小鼠）分成两组： 高剂量组和低剂量组。将ＭＮＶ．ＣＷｌ毒株以高剂量 （１０４ＰＦＵ／只）和低剂量（１０２ＰＦＵ／只）分别灌胃到小 鼠体内；另外同等体积的ＰＢＳ灌胃到一只雄性和一 只雌性小鼠体内作为正常对照。 １．４样本处理 高剂量组和低剂量组小鼠感染后
Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ
ＲＡＷ２６４．７细胞中传代增殖，细胞病变显著，病毒经 反复冻融３次，低速离心后取上清，病毒滴度为
１０４ＴＣＩＤ５０／ｍｌ。
ＰＣＲ检
１．３动物分组和感染途径将１２只Ｃ５７ＢＬ／６小
测结果表明，高剂量组感染率达１００％，在感染后第
（
孟
图１
Ｆｉｇ．１
高剂量组 Ｈｉｇｈ ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ
低剂量组
Ｌｏｗ ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ
小鼠粪便检测ＭＮＶ．ＣＷｌ ＲＮＡ水平
ｄｐｉ：ｄａｙｓ
ｐｏｓｔ
ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ｉｎ
ＲＮＡ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＭＮＶ・ＣＷｌ
ｆｅｃｅｓ ｏｆ Ｃ５７ ＢＬ／６
ｍｉ（‘ｅ
万方数据
空堡塞墅塑！鳖鏖题耋堂盘查！！！！生！旦箜垫鲞笙！塑
璺！ｉ！！！！！兰！Ｅ！！ｉ！！ｉ竺！：！！些！！！！：！！！：！！！盟！：１
主堡塞堕塑堕鏖瘟耋堂盘查垫！！生！旦箜ｉ！鲞筮！塑ｇ！也！！！』垦登！丛∑ｉ！！！！』！竖！！！！！∑！！：垫：塑！：！
・２６３・
．论著
鼠诺如病毒ＭＮＶ．ＣＷｌ感染Ｃ５７ ＢＬ／６小鼠的
特点
庞立丽
靳淼
王慧敏
王莹
陈爱琚
李慧颖
章青
高福
段招军
１００１０１北京，中国科学院微生物研究所［庞立丽（博士后）、高福］；１０２２０６北京，中国疾 病预防控制中心病毒病预防控制所（庞立丽、靳淼、陈爱琚、李慧颖、章青、段招军）； ０１０１１０呼和浩特，内蒙古医科大学（王慧敏、王莹） 通信作者：高福，Ｅｍａｉｌ：ｇａｏｆ＠ｉｍ．ａｃ．ｅｎ；段招军，Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｏｊｕｎｄ＠１２６．ｃｏｎ
只）分别灌胃到Ｃ５７ＢＬ／６小鼠体内，建立ＭＮＶ感染小鼠模型。对感染小鼠进行体征观察和体温检 测，检测粪便和血液排毒情况、组织中病毒的分布情况以及十二指肠病理切片检查。结果 感染的
小鼠没有明显的体表变化，没有腹泻、发热等临床症状和病理改变。粪便检测感染后１—２ ｄ排毒。 在感染后第３天部分血液中检测到ＭＮＶ ＲＮＡ。主要感染部位为消化系统和脾脏。结论 本研究建
献报道１２９和ＣＤｌ小鼠感染ＭＮＶ一１
ｌ
ｄ后肝脏、脾
脏和小肠中检测到病毒ＲＮＡ，２～７ ｄ被清除¨’８｜。 这与我们的实验结果相符。ＮｏＶｓ病毒一般也是造 成急性自限性感染，以轻症为主，最常见的症状是腹 泻和呕吐，症状持续时间平均为２—３ ｄ，但高龄人群 和基础性疾病患者恢复较慢［９ ３。ＮｏＶｓ病毒复制主