（1）外植体大小：0.5~1cm-2左右大小 （2）接种数量：每瓶3~4块 9、培养和观察记录 （1）培养条件：25~28℃ ；16hr光照，8hr黑暗； 光照强度为4000 lux （2）观察：每3~5天观察一次。
（3）记录： 1）愈伤组织出现时间，不定芽和不定根出 现时间。 2）统计愈伤组织诱导率，不定芽和不定芽 诱导率。 3）组培苗高度，根长度。 4）其他生长现象。
4、配制培养基
（1）按比例吸取培养基贮存液（各组设计不同浓度的BA 和NAA组合2个）
（2）称取琼脂（0.7%）、蔗糖（3%）
（3）加入蒸馏水到一定体积 （4）调节pH到5.6~5.8 （5）煮沸后分装到三角瓶中，封口膜封口。 5、高压灭菌 （1）培养基
（2）培养皿（带滤纸），5个；烧杯：200ml和500ml各2个。
实验十六 烟草叶片愈伤组织诱导和器官发生
1、实验目的
2、实验原理 3、配制MS培养基贮存液
（1）大量元素（10）
（2）铁元素（100 ） （3）微量元素（100 ） （4）有机营养（100 ） （5）植物生长调节剂（mg/ml）
100ml/L；50ml/500ml
10ml/L； 5ml/500ml 10ml/L； 5ml/500ml 10ml/L； 5ml/500ml
（3）蒸馏水：500~1000ml
6、实验材料
（1）取样：取完全展开的幼叶，自来水洗净 晾干。
（2） 整理
7、外植体的表面消毒（在超净工作台内）
（1）消毒剂：70%或75%乙醇；10%次氯酸钠 （2）步骤： 70%乙醇 30s 10%次氯酸钠 3~5次，每次间隔3~5min
5-8min
无菌水清洗

8、接种
准备下次实验
1、配制D2原生质体培养基（D2大量元素+MS的 铁+MS的微量元素+MS的有机营养+0.5mg/L 2,4D+0.05mg/L BA+0.2mol/L葡萄糖+0.1mol/L甘露醇 +1%蔗糖，pH5.6），各组50ml，过滤灭菌。
2、CPW培养基+0.4mol/L甘露醇，pH 5.4，各组 50ml，分装成10ml和20ml，高压灭菌。 3、其他高压灭菌的用具：过滤器（2），注射筒 （1），不锈钢网筛（=54m）（1），漏斗 （1），三角瓶（5），滴管（10支），10ml刻度 离心管（2支）。