甘蔗糖蜜酒精废液中总黄酮含量的测定D eterm inati on of the to tal con ten t of flavono id s in w asteliqu id of alcoho l p roducti on from sugarcane m o lasses张　吉,周文红,刘慧霞Z hang J i,Z hou W enhong and L iu H u ix ia(广西大学轻工与食品工程学院,广西南宁市　530004)(L igh t Indu stry and Food Engineering In stitu te,Guangx iU n iversity,N ann ing,530004)摘　要:以芦丁为标准物质,用分光光度法测定了甘蔗糖蜜酒精废液中黄酮类化合物的含量。

此法排除了废液中其他物质的干扰,重现性好,平均回收率达97123%,是一种较为快速的测定废液中总黄酮含量的新方法。

为废液中黄酮类化合物的提取和开发利用提供了理论依据。

关键词:糖蜜酒精废液;黄酮类化合物;分光光度法中图分类号:T S26212Abstract:T he con ten t of flavono ids in w aste liqu id of alcoho l p roducti on from sugarcane m o lasses w as determ ined by sp ectrop ho tom etry u sing ru tin as standard sub stance.T h is is a new m ethod fo r relatively rap id determ inati on of the to tal con ten t of flavono ids in w aste liqu id since it can eli m inate the in terfere of o ther com pounds,it has h igh rep etiti on rate,and the average recovery w as97. 23%.It p rovides the theo retical basis fo r the ex tracti on and exp lo itati on of flavono ids in w aste liqu id.Key words:W aste liqu id of alcoho l p roducti on from sugarcane m o lasses,F lavono ids,Sp ectrop ho tom e2 try1　引言 甘蔗糖蜜酒精废液中的色素一般是大分子有机化合物,在溶液中呈现胶体状态。

难以被微生物所降解,耐温、耐光照,放置时间延长其色值不减[1]。

目前对甘蔗糖蜜酒精废液中色素的研究报导较少。

这些色素主要来自糖蜜原料本身,其中最重要的色素是多酚类色素,其主要成份即是黄酮类化合物。

黄酮类化合物是自然界存在的酚类化合物中最大的类别之一[2],有较强的抗氧化能力。

由于其几乎存在于所有的绿色植物中,因此在涉及到植物提取的所有工作中都会遇到它们。

甘蔗中含有大量黄酮类化合物,它们在澄清过程中有部分被除去,还有一部分仍留在糖汁中,并一直留存至最终产物废蜜和酒精废液中。

如果能从废液中将黄酮类化合物提取出来,必定可获取良好的经济效益。

据资料显示,对黄酮类化合物的化学分析测量研究,在水果,蔬菜的储藏和加工方面有广泛应用。

但糖蜜酒精废液中黄酮类化合物的分析和分离方面的研究未见有报导,因此,探索研究用化学方法分析测定黄酮类化合物的含量,并试验研究将废液中的黄酮类提取出来,不仅有利于治理糖蜜酒精废液,还可以提高糖蜜酒精废液的资源利用附加值,具有重要的研究意义。

本研究采用分光光度法,对几种典型的糖蜜酒精废液中的黄酮类物质进行化学分析方法的探索比较实验,旨在找到简便的方法测定废液中的黄酮类物质的含量,为进一步的分离回收色素有价资源提供参考依据。

2　实验过程[3,4]211　实验原理 黄酮类化合物的母核由A、B两个芳香环组成,在母核某些位置上含有羟基时能与金属离子形成稳定络合物,在B环上任何有相邻的两个羟基存在时同样也能产生络合物。

利用三价铝离子与黄酮发生反应,生成黄色络合物。

该络合物在一定的吸收光波长下有一吸收峰值,不同浓度试样吸光度随浓度81广西轻工业　(2005年第2期　总第87期)G UAN GX I　JOU RNAL　O F　L IGH T I N DU STR Y收稿日期:2005202228的增加而增加,通过准确的测定数据,作出标准曲线的回归方程,找出其一般规律,再以同样的方法处理样液,测得吸光度后,代入回归方程便可计算出废液中的黄酮含量。

通过加标实验可验证方法的可行性。

212　实验设备仪器及试剂配制 设备仪器:722型可见光光度计、电子天平; 药品:芦丁、无水乙醇、甲醇、硝酸铝; 芦丁标准溶液:将芦丁在100℃下,烘干1h,用电子天平准确称取10m g,用甲醇溶液定容至100m l,即011m g m l。

5%硝酸铝甲醇溶液(显色剂):用电子天平准确称取5g硝酸铝,用95g甲醇溶液将其溶解。

213　最大吸收光波长的确定 吸取芦丁标准溶液215m l,显色剂1m l,加入615m l甲醇,放置5m in,以甲醇及显色剂作空白,在400～500nm波长范围测定其吸光度,发现在434nm 处有最大吸收,因此选择434nm为测定波长。

214　标准曲线的绘制 吸取芦丁标准溶液0、015、110、115、210、215m l,分别加入10m l容量瓶中,加入显色剂1m l,用甲醇稀释到刻度,放置5m in,于434nm处测定吸光度,作得曲线如图1所示。

其回归方程为:y= 316274x-010031215　样品测定21511　步骤 (1)取样液2m l,加无水乙醇定容至20m l,离心分离10m in。

(2)取离心液215m l,加入显色剂1m l,加甲醇溶液定容至10m l,以甲醇及显色剂作空白,于434nm 处测定吸光度为A。

(3)取离心液215m l,加甲醇溶液定容至10m l,以甲醇及显色剂溶液作空白,于434nm处测定吸光度为B。

21512　测定干扰的排除 (1)由于废液中含有大量蛋白质,加入乙醇溶液将其沉淀,可消除蛋白质对样液吸光度测定的影响。

(2)因为废液本身为棕红色,在434nm下也有一定的吸光度,故必须排除废液本身颜色的影响。

通过设置空白样检测废液中黄酮类所产生的吸光度= A-B,代入回归方程便可计算出废液中的黄酮含量。

测定结果如表 所示。

216　加标回收实验 为了检验本分析方法的准确性,进行了回收试验。

在样液中加入一定量的芦丁标准溶液,再以同样的方法处理样液,然后测定其吸光度。

比较测得的量与实际加入量,便可确定该实验方法的可行性。

图1　标准曲线表 不同废液试样中黄酮含量的测定结果 项目 试样样液量(m l)取离心液量(m l)稀释倍数吸光度废液中黄酮含量(m g m l)废液色素浓液 22154010470105524提取色素后清液 2215401035010420废液色素浓液 2215401105011192提取色素后清液 2215401043010508废液色素浓浆121540128501603691广西轻工业　(2005年第2期　总第87期)G UAN GX I　JOU RNAL　O F　L IGH T I N DU STR Y21611　测定步骤 (1)取样液2m l,加入芦丁标准溶液5m l,加无水乙醇定容至20m l,然后离心分离10m in。

(2)取离心液215m l,加入显色剂1m l,加甲醇溶液定容至10m l,以甲醇及显色剂溶液作空白,于434nm处测定吸光度为C。

加标部分产生的吸光度=C-A,代入回归方程便可计算出测定量,与实际加入量相比较,即可计算得加标回收率。

21612　测定结果 加标回收试验表明,本测定法结果准确可靠,平均回收率为971228%。

结果如表 所示。

表 回收试验结果汇总表 样液 项目加入量(m g)测得量(m g)回收率(%)平均回收率(%)废液色素浓液 0106250106258100113提取色素后清液 010625010606597104废液色素浓液 01062501059895168971228提取色素后清液 0106250105909414废液色素浓浆01065790106506981893　讨论[5,6] 芦丁是比较典型的黄酮类化合物,本实验参考了国内的一些研究资料,应用二甘醇代替乙醇测定、水浴法等几种实验方法进行了试验比较,发现用芦丁作标准物质所制得的标准曲线,经无水乙醇处理样液后,排除了废液中的杂质干扰,且重现性好。

测定结果证明用芦丁作为标准物质用分光光度法测定废液中黄酮类含量是可行的,其操作方法比较简便,容易掌握,实验条件较温和,安全性高,用分光光度法测定结果准确可靠,可为废液中黄酮类化合物的分离和利用提供依据。

从实验结果可知,废液经浓缩处理后,其中的黄酮含量显著提高,可以作进一步的分离提纯而提取产品。

黄酮类化合物在人体不能直接合成,只能从食品中获得[7],它们是良好的保健品和食品添加剂。

随着食品业的发展和消费水平的不断提高,人们越来越注重强身健体,黄酮类保健品以其天然性,食效性等特点必然会受到人们的欢迎。

4　结论411　以芦丁为标准物质,采用分光光度法测定糖液酒精废液中黄酮类的含量,其操作方法比较简便,测定结果准确可靠。

是一种较为快速的测定糖蜜酒精废液中黄酮含量的新方法。

412　通过加标回收实验可知,平均回收率达971228%。

413　金光糖厂酒精废液中的黄酮含量(m g m l)为0105524,废液色素浓浆中的黄酮含量为016036。

从糖蜜酒精废液中提取黄酮类化合物将有较好的应用前景。

□参考文献[1]　吴振强,等1甘蔗糖蜜酒精废液色素特性及脱除的研究[J]1环境污染及防治,1997,(1):39～431 [2]　裴凌鹏,等1黄酮类化合物的生理活性及其制备技术研究进展[J]1食品科学,2004,(2):203～2071 [3]　欧阳平,等1吸光光度法测量苦荞麦中总黄酮[J]1粮油加工与食品机械,2003,(11):57～591[4]　张　琪,等1苦荞麦中总黄酮和芦丁的含量测定方法的研究[J]1食品科学,2003,(7):113～1161 [5]　刘世民1洋葱中黄酮类物质的提取与研究[J]1食品研究与开发,2004,(2):43～451[6]　艾志录,等1功能性成分异黄酮的来源与生理功能[J]1中国食品添加剂,2004,(1):48～531[7]　塔　娜,等1桔皮中黄酮类化合物抗氧化活性的研究[J]1内蒙古农业大学学报(自然科学版),2003,24(2):96～98102广西轻工业　(2005年第2期　总第87期)G UAN GX I　JOU RNAL　O F　L IGH T I N DU STR Y。