血球计数板的构造和使用方法简介
人教版生物教材(稳态与环境)培养液中酵母菌种群数量的变化的实验中用到了血球计数板,学生对它感到十分陌生,现对其构造和使用方法作简要介绍：
一．血球计数板的构造
血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台。

中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面刻有一个方格网。

方格网上刻有9个大方格（见图C）,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用。

计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为25个中方格（中方格之间用双线分开，见图D），每一中方格又分为16个小方格；另一种是大方格内分为16个中方格,每一中方格又分为25个小方格，但是不管计数室是哪一种构造,它们都有一个共同的特点：即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成（见图D）。

血球计数板的构造
(A．俯视图B．侧视图C．放大后的网格D．放大后的计数室)
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计数室边长为1mm，面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400 mm2。

盖上盖玻片后，计数室的高度为0. 1mm，所以其体积为0.1mm3，每个小方格的体积为
1/4000mm3。

二．血球计数板的使用（以计数酵母菌为例）
(1)视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释。

样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可。

(2)将血球计数板用擦镜纸擦净, 在计数室上盖上一块盖玻片。

(3) 将稀释后的酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数室，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。

也可以将菌悬液直接滴加在计数室上，不要使计数室两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数室深度的升高。

然后加盖盖玻片（勿使气泡产生）。

(4)静置片刻,待酵母菌全部沉降到计数室低部，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察并计数。

由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。

(5) 计数时若计数室是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小方格）的菌数。

如果是由25个中方格组成的计数室，除数上述四个中方格外，还需数中央l个中方格（即80个方小格）的菌数（见图D）。

若菌体位于中方格线上,一般只计数中方格的上方和右方线上的酵母细胞（如下图用红圈标出），以减少误差。

计数时应不时调节细准焦螺旋，才能观察到不同深度的菌体。

(6) 每个样品计数应重复3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），取其平均值,求出每一个小格中细胞平均数，按下列公式计算出每ml菌悬液所含酵母菌细胞数量。

16格×25格的血球计数板计算公式：
酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数
25格×16格的血球计数板计算公式：
酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数
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(7)测数完毕，取下盖玻片，用清水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。

洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。

附：为熟悉血球计数板的构造，便于清楚的观察方格网和计数室，可用棕色水彩笔对其染色，线条染色后呈不透明状，非常容易辨认。

用棕色水彩笔涂布时，用力要轻，以免磨损平台上的线条，涂布后放置2-3分钟，再用擦镜纸轻轻擦去表面上的染料颜色，并反复擦几次，此时只有方格网上的线条被染成棕色，便于观察。

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