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离子交换HPLC检测原理
A:患者红细胞裂解物被注入到带有 负电荷的分析柱中
B, C:因为与带负电荷树脂间的离 子相互作用，带正电荷的血红蛋白 分子的移动速度比带负电荷的慢
D:因为HbA1c比HbA0所带负电荷强， 所以首先被洗脱.
E:离子交换HPLC方法能分离并鉴 定其他种类Hb及一些血红蛋白变 异体，在色谱图上将出现相应的分 离峰
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HbA1c 的主要检测方法
基于电荷 • 离子交换高压液相色谱法（HPLC） • 电泳法 • 毛细管电泳
基于结构
• 硼酸亲和层析法 • 酶法 • 免疫法
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各检测方法的分析物HbA (2b2)HbA1HbA0
HbA1a HbA1b
HbA1c
离子交换色谱和免疫法检测物
非糖化成分 糖化成分
硼酸亲和色谱检测物
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1969年Rahbar 使用琼脂电泳， 报告糖尿病患 者的这些小血 红蛋白组升高
1970年代中期， 弄清楚了是葡 萄糖对血红蛋 白HbA的非遗 传修饰，产生 了HbA1c
1980年中期， GHb(糖化血红 蛋白）检测被 广泛应用，但 当时结果可比 性很差
DCCT研究发 表后，1996年 起，美国正式 启动了NGSP 项目，推动糖 化血红蛋白检 测的标准化。 2010年达成了 全球标准化共 识
▪ 全国总代理-广州执信 ▪ 价格： 30元/测试（到代理商） ▪ 今年在全国主要地区推广力度强，特别在南方两广地区是该公司传
统重要市场
MiniCAP
Capillary 2
Capillary2 with Flex Piercing
*(Capillary2 with Flex Piercing 为Capillary2 的升级版，只多了可采原始样本管，其他参数一致) with Flex
次是中性物质，最后由带负电荷的血红蛋白组份。电泳图谱显示 HbA1c与HBA0分离。
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Pathology Consultation on HbA1c Methods and Interferences, Am J Clin Pathol 2014;141:5-16
Sebia 糖化产品概览
▪ Capillarys 2 with Flex Piercing 是Sebia糖化系统中的唯一有 CFDA证的，8个通道同时使用时，1.6分钟/检测。
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Pathology Consultation on HbA1c Methods and Interferences, Am J Clin Pathol 2014;141:5-16
国内上市的IE-HPLC方法的主要厂家平台
厂家 Bio-Rad
Tosoh
Arkray 上海惠中
仪器 VARIANT II Turbo HbA1c Kit-1.0/2.0 VARIANT II HbA1c Program D-10 Hemoglobin A1c Program G7 G8 GX 8160 8180 MQ2000 MQ2000PT
糖化血红蛋白实验室检测及 标准化新进展
Hannah Yao
Sep 10, 2014 青岛
HbA1c实验室检测
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糖化血红蛋白的发展历史概述
1958年，Allen 报告，在离子 交换层析上的 的人血红蛋白 可以分离出三 个小组分，他 们较HbA的负 电荷更强，被 命名为 HbA1a,HbA1b,H bA1c。
糖化和非糖化的血红蛋白
Hb 血红蛋白
成人血红蛋白分三种， HbA为主要成人Hb
HbA (ßß)
HbA2 ()
HbF ()
95%
1-3.5%
<2%
非糖化Hb HbA0
HbA1
糖化Hb
87-89%
6-8%
HbA1a
<1%
HbA1b
<1%
HbA1c
4%-6%
HbA1a: ß链NH2端与其它糖成 分结合的产物 HbA1b: HbA1c进一步代谢的产 物
HbA1c: ß链NH2端与葡萄糖结 合的产物
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胎儿血红蛋白HbF在胎儿及出生6个月以内的新生儿体内为高浓度，6
个月后基本降为成人水平
HbA1c是血红蛋白HbA的糖基化产物
1. 葡萄糖与血红蛋白HbA 发生糖化反应
2. 两步反应： 先快速生成不稳定A1c, 后缓慢生成稳定的A1c。
3. 血红蛋白HbA糖化后，负 电荷会增加
▪ 图E是一种简化的色谱图（蓝线），显示了非糖化和糖 化血红蛋白组分的分离。
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Pathology Consultation on HbA1c Methods and Interferences, Am J Clin Pathol 2014;141:5-16
硼酸亲和色谱法特点
▪ 硼酸亲和色谱法直接检测的是总糖化血红蛋白，报告结果是 计算出来的 HbA1c。
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厂家 深圳普门 Drew Scientific
江苏奥迪康
仪器 GH-900 HbA1c Analyzer Drew DS5 Diastat AC660
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毛细管电泳法的检测原理
▪ 毛细管电泳分离血红蛋白组分是基于电荷等决定的电泳迁移率 ▪ 一种高压电源产生电场，使分子通过毛细管从阳极迁移到阴极。 ▪ 患者红细胞裂解液中带正电荷的血红蛋白组分将首先被检测到，其
▪ 硼酸亲和色谱法不能分离出血红蛋白变异体
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国内上市的硼酸亲和色谱法的主要厂家平台
厂家
Primus
Bio-Rad Alere
仪器
Hb9210 PDQ Plus Ultra2 In2it Afinion NycoCard
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免疫分析法检测原理-抗原抗体反应
▪ A: 在没有HbA1c时，polyhaptens（包含多个HbA1c表位的合成分 子）与绑定在微粒上的抗HbA1c抗体反应，形成不溶性抗体polyhapten复合物。这导致显著的光散射（浊度增加）
▪ B: 患者红细胞裂解液中的HbA1c与抗HbA1c抗体结合，形成可溶 性抗原抗体复合物，从而减少光散射（浊度降低）。通过比浊测定可 检测出该样本中的HbA1c的量
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硼酸亲和色谱法的原理
▪ A：患者的红细胞裂解液注入到含有结合了硼酸基团 的树脂的分析柱中。
▪ B：在pH高于8.0时，血红蛋白被糖化后产生一个特殊 的顺式二糖醇基团与硼酸基团发生反应
▪ C：糖化的血红蛋白被绑定在分析柱中，而非糖化的血 红蛋白组分直接流出
▪ D酸性缓冲液被使用，使得糖化的血红蛋白从分析柱 内释放出来