参考文献：
1、关松荫等，编著. 土壤酶及其研究法[M].农业出版社，1986.
2、周礼凯，编著. 土壤酶学[M].科学出版社
关松荫等，1986
蔗糖酶：比色法(1) P274-276
脲酶：比色法P294-297
蛋白酶：比色法9(1) P302-304
磷酸酶：磷酸苯二钠法(2) P312-313
过氧化氢酶：容量法P323
蔗糖酶
比色法
1、试剂
(1) 苯甲酸溶液0.25%
(2) 3,5-二硝基水杨酸
(3) pH5.5磷酸缓冲液
(4) 8%蔗糖溶液
(5) 甲苯
2、操作步骤
5克风干土→50mL三角瓶→15mL 8%蔗糖溶液→5mL pH5.5磷酸缓冲液→5滴甲苯
→摇匀放入恒温箱→37℃培养24h →取出迅速过滤→吸取滤液1mL →流水冷却3min →蒸馏水稀释至50mL →508nm比色
3、结果计算
蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。

葡糖糖（毫克）= a×4
式中a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数
4——换算成1g土的系数
标准曲线：以光密度为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标。

Y=0.229×（－0.0209）R２=0.9961
注意：
Y值为吸光度值，相当于表中的A平均
X值为根据上述公式计算的结果，相当于a值
葡萄糖含量为a* 4 （毫克）
蛋白酶
比色法（1）
1.试剂
（1）1%酪素溶液
（2）0.1N硫酸
（3）20%硫酸钠
（4）2%茚三酮液
（5）甲苯
（6）甘氨酸标准溶液
2.操作步骤
4g风干土→50ml三角瓶→20ml1%酪素液→1ml甲苯→30℃恒温箱24h→
2ml0.1N硫酸→12ml20%硫酸钠液→15min(6000转/min)离心→上清液2ml 50ml容量瓶→1ml茚三酮→沸水浴10min→蒸馏水稀释至刻度→500nm比色
3.结果计算
蛋白酶活性，以24h后1g土壤中氨基氮的毫克数表示。

NH2-N(mg)=a*5
式中 a——从标准曲线查得氨基氮毫克数
b——换算成1g土的系数
标准曲线：以光密度为纵坐标，以氨基氮浓度为横坐标。

Y=2.8236x+0.011R²=0.9968
X=（y - 0.011）/2.8236
过氧化氢酶
容量法
1.试剂
（1）0.3%的过氧化氢溶液
（2）3N硫酸
（3）0.1N高锰酸钾溶液
2. 操作步骤
2 g 风干土→100 ml 三角瓶→40 ml 蒸馏水→5 ml 0.3%过氧化氢溶液→复式
震荡机震荡20min→5ml 3N硫酸→过滤→去25ml 滤液→0.1N高锰酸钾滴定至
淡粉红色
3. 计算
土壤过氧化氢酶活力以及所消耗的高锰酸钾的ml 数来表示。

脲酶
比色法
1.试剂
（1）PH6.7柠檬酸盐缓冲液
（2）苯酚钠溶液
（3）次氯酸钠溶液
（4）10%尿素液
（5）甲苯
（6）硫酸铵
2.操作步骤
5g风干土→50ml三脚瓶→1ml甲苯→10ml 10%尿素液→20ml PH6.7柠檬酸盐
缓冲液→37℃恒温箱24h→过滤取3ml滤液→50ml容量瓶→加蒸馏水至20ml 4ml苯酚钠→3ml次氯酸钠液→20min后显色定容→1h内578nm比色
3.计算
脲酶活性以24h后1g土壤中NH3-N的毫克数表示。

NH3-N( mg ) = a×2
式中a——从标准曲线查得的NH3-N毫克数
z——换算成1g土的系数
磷酸酶
磷酸苯二钠比色法（2）
1、原理：
在碱性条件下，当存在氧化剂铁氰化钾时，酚被氧化成醌，醌又与4—氨基氨替比林络合成玫瑰色，颜色深度与酚量相关，通过比色测定游离酚量。

2、试剂
（1）PH9.8氯化铵—氢氧化铵缓冲液
（2）8%铁氰化钾液体
（3）3% 4—氨基氨替比林液
（4）0.5%磷酸苯二钠溶液
（5）酚的标准溶液
（6）甲苯
3、操作步骤
称5g风干土→50ml三角瓶→5滴甲苯→20ml0.5%磷酸苯二钠→37度恒温箱2h →滤液5ml →50ml容量瓶→20ml蒸馏水→0.25ml缓冲液→0.5ml4—氨基氨替比液→0.5ml铁氰化钾液→定容→15min内于510nm比色
4、结果计算
磷酸酶的活性，以2h后100g土壤中P2O5的毫克数表示。

P2O5(mg)=a*80*0.32*2.29
式中a——5ml滤液中酚的毫克数80——换算为100g土壤的系数
0.32——磷单位表示结果的系数 2.29——将P换算P2O5的系数标准曲线：以光密度为纵坐标，以浓度为横坐标。

y =2.2036x-0.0008 R²=0.994。