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激光诱导荧光技术1讲解


毛细管电泳协会的创始人之一。在激光诱导荧光检测方面 主要从事紫外激光诱导荧光检测。
Sweedler J. V. 领导Biotechnology Center,同时是Beckman Institute客座教 授。主要研究波长分辨激光诱导荧光检测技术。
Mathies R. A. 毛细管电泳装置的先驱,发明了“fluorescent energytransfer labels used to sequence the human geno前灵敏度最高的检 测技术,在生物、化学、医学等领域应用广泛。 激光光束的高汇聚性使其非常适合于微区检测, LIF 成为微型化仪器和电泳芯片中应用最普遍的 检测手段。另外,许多能发自然荧光环境样品和 生物样品,通过衍生技术进行荧光检测,因而LIF 成为检测的首选技术。
(通常波长比入射光的的波长长,在可见光波
段);而且一旦停止入射光,发光现象也随之
立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为
荧光。
平面激光诱导荧光技术
可见光波长的红绿蓝激光 (635nm,532nm,445nm)
长颈瓶中不同尺寸的硒化镉(CdSe) 量子点在紫外线的照射下发出荧光
平面激光诱导荧光技术
PLIF介绍
平面激光诱导荧光技术
LIF检测系统
LIF 检测系统主要包括激光器、检测光路、光电探测器、 信号处理模块。
目前常用的激光器是气体激光器,该类激光器结构简单、 价格低廉,对应于这些激光器的发射波长,有很多商品化 的荧光探针。
激光诱导荧光检测器为正交型,即入射光、流动池和荧光 检测三者相互垂直。
平面激光诱导荧光技术
关亚风
主要研究以固体激光器为激发光源的LIFD。
平面激光诱导荧光技术
LIFD主要生产厂家
Picometrics Beckman
ABI
Unimicro
用于高效液相 色谱、毛细管 用于毛细管 电泳、微流动 电泳;
分析系统等领
域;
光源为气体
激光器
光源为固态二 极管激光器
用于毛细管 电泳、微流 控系统;
光源为气体 激光器
测量物质
平面激光诱导荧光技术
举例:示踪平面LIF技术
采用YAG激光器的倍频532nm
激光作为激发源。由于自然界
中只有某些特殊的高分子有机
染料分子可以被532nm激光激
发而发出荧光,人们就用这种
有机染料分子作为示踪物质加 入到所要研究的流场中,观察
液体混合中的高分辨激 光诱导荧光成像测量
并测量荧光信号的性质。
(Excited spectroscopy)。
平面激光诱导荧光技术
PLIF原理
荧光光谱的作用
从荧光的分布,可以探测样品粒子的种类;从荧光的强弱, 可得知粒子的浓度以及温度;利用其空间分辨性还可以测 量粒子的空间浓度/温度分布。
与普通的荧光光谱技术相比,具有更高的灵敏度、信噪比 和光谱分辨率等优点,而且测量样品时无需进行复杂的预 处理,便于在线分析。
平面激光诱导荧光技术
PLIF检测原理图
平面激光诱导荧光技术
PLIF优点
高空间分辨:可达到微米量级。
快速时间响应:时间分辨最高可达纳秒量级,可对自由基 等瞬态物质寿命进行检测。
高灵敏度:探测下限最高可达106个粒子/cm3。
干扰小:通过激光激发,而不涉及接触式的探针等器件, 对等离子体,燃烧等干扰相对较小。
平面激光诱导荧光技术
激光光源来照明流场,流场中的荧光示踪剂会吸 收激光能量并辐射出更长波长的光。在图像采集 系统(如PIV相机)的镜头前放置截止滤光片,就 可以得到荧光的强度信息。而荧光的强度是与激 光能量及示踪剂浓度/温度相关的函数,因此我们 可以由该函数计算得到定量浓度/温度信息。
平面激光诱导荧光技术
Optical configuration of
Zetalif 2000 LIFD (Picometrics,
France)
平面激光诱导荧光技术
LIF分类
浓度测量 温Te度xt测量 测Te量xt目的
Text
LIF分类
示踪LIF 产物T分ex析t LIF
Text
测量手段
Text
液体LIF
气体LIF 燃烧LIF
研究LIF主要课题组
研究课题组
主要研究领域及成就
Dovichi N. J. 发明了壳流检测池,随后的LIFD单分子检测都是在此基 础上完成的,对LIFD的应用作出了卓越贡献。
Soper S. A.
主要研究领域包括:荧光探针、分子生物学、微分析仪器 等,较多采用近红外激光诱导荧光监测器。
Issaq H. J.
PLIF(Planar Laser Induced Fluorescence)即所谓的“平面激光诱 导荧光”。所有应用片状光源照明,对 被测对象所发出的由这种片状光源所激 发(诱导)的荧光信号进行探测的实验 技术都可以称作PLIF。
平面激光诱导荧光技术
PLIF原理
激光诱导荧光光谱
利用一束脉冲激光将特定分子(或离子)由电子基态激发 至激发态,稍后测量分子由电子激发态驰豫放出的光子, 扫描激发激光的波长使它通过分子的吸收谱带,就可以把 荧光强度描绘成激发激光波长的函数,得到激发光谱
光源为固体 激光器;
具有极佳的 灵敏度和超 强的稳定性 能
平面激光诱导荧光技术
ZETALIF of Picometrics
以固态二极管激光器为激发光源,其光路系统采用共线型设计, 所生产LIFD的激发波长范围300~900nm,可用于高效液相色谱、 毛细管电泳、微流动分析系统等分离领域。
平面激光诱导荧光技术
Planar Laser Induced Fluorescence
平面激光诱导荧光技术
目录
1
PLIF的介绍
2
PLIF的原理
3
PLIF的检测系统
4
PLIF的应用及展望
平面激光诱导荧光技术
PLIF介绍
激光(Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation,缩写为laser)是指窄幅频率的光辐射线, 通过受激辐射放大和必要的反馈共振,产生准直、单 色、相干的光束的过程及仪器。
激光是20世纪以来,继原子能、计算机、半导体后, 人类的又一重大发明,被称为“最快的刀”、“最准 的尺”、“最亮的光”。它的亮度约为太阳光的100 亿倍。
平面激光诱导荧光技术
PLIF介绍
荧光:当某种常温物质经某种波长的入射光
(通常是紫外线或X射线)照射,吸收光能后
进入激发态,并且立即退激发并发出出射光
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