Ⅰ 单向琼脂扩散实验:
琼脂中含抗体
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
1:80
1:40 1:20
1:10
未知
沉淀环直径平方
抗原浓度
Ⅱ 双向琼脂扩散实验:
方法：
1. 微波炉中彻底融化1% 琼脂
2. 取5ml 琼脂均匀铺在载玻片上
凝固
3. 在琼脂板上打5个孔
4. 在孔中加入相应样品 5. 37℃, 孵育24h
Ag1 Ag2
4. 预期结果
上清 清亮 轻度混浊 中等混浊 混浊 与对照相同
沉淀 大的凝集块 大多凝集管底 小、部分凝集块 很小的凝集颗粒 无凝集现象
凝集程度 ++++ +++ ++ + -
管底沉淀 凝集程度
最高稀释比例
待测血清的滴度
Test 2 沉淀反应
——琼脂扩散实验
沉淀反应:
➢ 经典抗原抗体反应的一种。
抗体滴度：
能产生明显凝集反应的、抗体最高 稀释度的倒数。
1. 实验材料：
灭活的伤寒菌液 (7×108/ml), 待测血清
2. 方法：
1
② 待测血清
0.1
① 生理盐水
(ml)
00.5.9ml
③ 灭活的伤 寒菌液 0.5ml
2
0.5 00.5.5ml
0.5ml
3
0.5 00.5.5ml
0.5ml
4
0.5 00.5.5ml
制备绵羊红细胞溶液20%、 25%、30%、40%
取0.1ml 皮下注射 免疫小鼠
31、只有永远躺在泥坑里的人，才不会再掉进坑里。——黑格尔 32、希望的灯一旦熄灭，生活刹那间变成了一片黑暗。——普列姆昌德 33、希望是人生的乳母。——科策布 34、形成天才的决定因素应该是勤奋。——郭沫若 35、学到很多东西的诀窍，就是一下子不要学很多。——洛克
实验二抗体制备和凝集反应沉淀反应
•
6、黄金时代是在我们的前面，而不在 我们的 后面。
•
7、心急吃不了热汤圆。
•
8、你可以很有个性，但某些时候请收 敛。
•
9、只为成功找方法，不为失败找借口 (蹩脚 的工人 总是说 工具不 好)。
•
10、只要下定决心克服恐惧，便几乎 能克服 任何恐 惧。因 为，请 记住， 除了在 脑海中 ，恐惧 无处藏 身。-- 戴尔． 卡耐基 。
➢
+
可溶性抗原
➢ 分类:
✓ 琼脂扩散 ✓ 环状沉淀反应 ✓ 絮状沉淀反应 ✓ 免疫电泳
相应抗体
沉淀线或沉淀环
Байду номын сангаас
➢ 琼脂扩散实验:
✓ 可溶性抗原和抗体在琼脂中扩散，相遇，在适当比例 下形成沉淀线或沉淀环。
✓ 分类:
单向琼脂扩散实验: 仅抗原或抗体扩散 —— 定量实验
双向琼脂扩散实验: 抗原和抗体同时扩散 —— 定性实验
实验二 抗体制备和凝集反应 (2) &沉淀反应
实验二 抗体制备和凝集反应 (2) &沉淀反应
1. 原理:
抗原抗体反应
直接凝集反应
玻片凝集
试管凝集
定性
半定量
1) 玻片凝集反应:
? 已知抗原 + 未知抗体
凝集团块 混浊
2) 试管凝集反应：
定量抗原
+
系列稀释抗体
不同程度的凝集反应 确定抗体的滴度
YES NO
Ag2 Ag1
Ab
注意：
✓ 琼脂板一定平整、光滑 (无气泡). ✓ 琼脂不可过厚 ✓ 孔中液体不可过满
Test 3 再次免疫
2. 方法: 脱纤维绵羊红细胞（SRBC） 加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min 弃上清 加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min 弃上清
0.5ml
5
0.5 00.5.5ml
0.5ml
弃掉 0.5
6
0.5
0.5ml
抗体稀释度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 对照管
彻底混匀
④
56℃, 1h
3. 注意事项
➢ 标记试管 ➢ 正确使用滴管 ➢ 彻底混匀 ➢ 温度: 56℃ ➢ 记录时间 ➢ 轻拿试管，观察结果，首先观察对照管