动物的肌肉、心脏、肝、肾、脾等器官组织都是 DNA的良好来源,其中肝脏的DNA虽然产量最大,但肝脏中 丰富的基因组DNA酶对提取的DNA降解比较严重,相对来 说，肌肉组织则由于具有相对少量的DNA酶而使得提取的 DNA质量较好,尤其是新鲜组织的DNA产量高,质量好 。 肌肉DNA的提取一般有两种方法：SDS法和异硫氰酸 胍法，但我们一般采用前一种，即SDS法。 DNA是一切生物细胞的重要组成成分，主要存在于细 胞核中。通过研磨和SDS作用破碎细胞；苯酚和氯仿可 使蛋白质变性，用其混合液（酚：氯仿：异戊醇）重复抽 提，使蛋白质变性，然后离心除去变性蛋白质；RNase降 解RNA，从而得到纯净的DNA分子。
实验步骤
• 1. 取新鲜或冰冻动物肌肉组织块0.1g，用冷生理盐水洗3 次，置于培养皿中剪碎（动作要快），将碎肌肉组织转入 玻璃匀浆器中，加入1mL的匀浆液， 匀浆至不见组织块 （低温操作） • 2、将匀浆液倒入1.5mL 离心管中（转前先静置一会，防 止未碎的组织进入离心管）， 5000rpm离心2min； • 3、弃上清，沉淀加0.25 mL灭菌水，用微量移液器吸嘴 吹散悬浮沉淀，再加0.25 mL 2×细 胞裂解缓冲液，盖上 离心管盖子，颠倒混匀； • 4、将离心管插入泡沫浮板中，置于55℃恒温水浴锅中水 浴2-3h，可间歇性颠倒混匀离心 管数次；
实验步骤
• 5、加入等体积酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)，缓慢颠倒混匀， 冰上静置10min，12000 rpm离心 10min； • 6、用钝化的黄吸嘴吸取上清水相（含DNA，粘稠）入另 一新1.5mL 离心管中（注意不可 吸取两相间的蛋白质）； • 7、估算上清体积，加入等体氯仿/异戊醇(24:1)，缓慢 颠倒混匀，12000 rpm离心10min；
器材和试剂
• 1、仪器设备 恒温水浴锅、台式离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、 吸嘴 • 2、试剂 （1）组织匀浆液：100mM NaCl，10 mM 三羟甲基氨基 甲烷(Tris)-HCl (pH8.0)，25mM乙二胺四乙酸（ EDTA pH 8.0)。（2) 2×细胞裂解缓冲液：200mM NaCl，20 mM Tris-HCl (pH8.0)，50 mM EDTA (pH 8.0)，蛋白酶K (200 μg/mL)，1%SDS (十二烷基硫酸钠）（3）蛋白酶K：双蒸 水配制10mg/mL，-20℃保存 （4）TE缓冲液：10 mM Tris-HCl (pH8.0)，1 mM EDTA (pH 8.0)，室温贮存 （5） 平衡酚(pH8.0)/氯仿/异戊醇（25:24:1） （6）3 M NaAc、 冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水、生理盐水 • 3、材料 新鲜动物（兔子）肌肉组织
注意事项
• 1．动物肌肉应新鲜，处理应迅速，细胞破碎应完 全。 • 2．抽提每一步用力要柔和，防止机械剪切力对DNA 的损伤。 • 3．取上层清液时，注意不要使其浑浊吸起中间的蛋 白质层。
• 4．离心后，不要晃动离心管，拿管要稳，斜面朝外。
• 5. 在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散， 以减少DNA团块形成。
肌肉组织中DNA的提取
主讲内容
1 .实验目的 2 .实验原理 3 .实验器材与试剂 4 .实验步骤 5 .注意事项
实验目的
• 1. 学习并掌握动物组织中DNA的提取方法 及其原理 • 2. 熟悉肌肉中提取DNA的基本操作以及使 用各个器材的基本方法。
• 3. 了解现今从组织中提取DNA的方法
实验原理
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8、 用钝化的黄吸嘴吸取上清水相入另一新1.5 mL离心管 中，并加1/10体积的3 M NaAc 和两倍体积的无水乙醇， 盖上离心管盖子， 缓慢颠倒混匀， 冰浴30 min后10000 rpm离心5min；
实验步骤
• 9、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将管口 的残余液滴除掉； • 10、用1mL 预冷的70%乙醇洗涤沉淀物，10000 rpm离心 1min； • 11、小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上吸去管口 的液滴，短暂离心，用吸嘴将附 于管壁的残余液滴除掉， 室温干燥； • 12、加100μL TE缓冲液重新溶解沉淀物，然后置于4℃ 或-20℃保存备用。