10.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃ 或–20℃保存备用。
11.吸取适量样品于GeneQuant上检测浓度和纯度。
【注意事项】
标本必须新鲜，提取前细胞应保持完整。
所用EP管、吸嘴等器物及ddH2O、试剂 等应高压灭菌，操作尽量在4℃以下进行。 混匀试剂、吸取上清等操作时应避免动 作剧烈。 弃异丙醇时动作应轻，切忌甩干，以免 DNA丢失。
动物细胞基因组DNA的 提取及定量
真核细胞基因组DNA的分离纯化
核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中
都以与蛋白质结合的状态存在。
真核生物的染色体DNA为双链线性分子.
大多数生物体内RNA分子为单链线性分子
分离纯化核酸总的原则：
应保证核酸一级结构的完整性 排除蛋白质、脂类、糖类等其他分子的污染 无其他核酸分子的体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝 状物，用100ul 吸头挑出，凉干，用200ul TE 重新溶解。
4.加等量的酚·氯仿·异戊醇振荡混匀，
离心12000 rpm，5min。
5.取上层溶液至另一管，加入等体积的氯仿·异戊
醇，振荡混匀，离心12000 rpm，5min。
6. 取上层溶液至另一管，加入1/2体积的7.5mol/L
3. 对于很稀的核酸溶液，可用荧光光度法进行测 定。核酸经凝胶电泳后，在ＥＢ（溴化乙锭）中 浸染，核酸分子与溴化乙锭结合后， 能吸收300360nm波长的紫外光，同时诱发出波长为590nm 的红橙色荧光，从而可通过照像机摄影，凝胶成 像系统记录实验结果。此方法灵敏度高，10ng或 更少的DNA即可检出。
一、实验目的
掌握DNA定量的原理 掌握紫外分光光度仪的正确使用。
二、实验原理
1.
核酸分子（DNA或RNA）由于含有嘌吟环 和嘧啶环的共轭双键，在260 nm波长处有 特异的紫外吸收峰，其吸收强度与核酸的 浓度成正比，这个物理特性为测定核酸溶 液浓度提供了基础。
2. 紫外分光光度法还可通过测定260nm和 280nm的紫外线吸收值的比值（A260/A280） 估计核酸的纯度，纯的DNA制品的比值为1.8， RNA的比值为2.0, 若DNA高于1.8,则可能有 RNA污染，低于1.8则有蛋白质污染。 OD230/OD260的比值应在0.4-0.5之间，若比 值较高说明有残余的盐存在。
应去除RNA分子）。
分离核酸 应注意以下几点：
减少化学因素对核酸的降解
减少物理因素对核酸的降解
防止核酸的生物降解：
核酸提取的主要步骤：
破碎细胞，去除与核酸结合的蛋白质以及
多糖、脂类等生物大分子，去除其他不需 要的核酸分子，沉淀核酸以去除盐、有机 溶剂等杂质，最后得到纯化的核酸。
实验步骤
1.
2.
取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3）， 尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中，加入1ml的 细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入 1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （50ug/ml） 20μl，混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴 30min。 匀浆后的液体700ul，离心12000rpm, 5min， 取上清液入另一离心管中
乙酸氨加入2倍体积的无水乙醇，混匀后室温沉淀 2min ，离心12000 rpm ,10min。
7.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上， 将附于管壁的残余液滴除掉。
8.用1ml 70%乙醇洗涤沉淀物1次，离心12000 rpm ， 5min。 9.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上， 将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥。