3.脱水。

乙醇是常用的脱水剂，用乙醇脱水的过程中，以低浓度逐渐过渡到高浓度乙醇（70%、80%、95%、无水乙醇），来除去材料块中的水分。

脱水时间跟材料块的大小而定（70% 1.5h，85% 1.5h，95% 2h(可以过夜)，100% 1.5h ，100% 1.5h）
4.透明。

透明剂为二甲苯。

透明剂的作用是置换乙醇，让材料透明，有利于石蜡向材料内部的渗透。

从1/2无水乙醇+1/2二甲苯（1.5h,若脱水不彻底，会出现乳白色浑浊）→二甲苯(1.5h)→二甲苯(1.5h)
5.低温浸蜡。

目的是慢慢除去材料中的二甲苯，而代之以石蜡。

将已透明的材料和二甲苯（约5ml）一起倒入包埋用的小烧杯中，把事先切碎的石蜡放入小烧杯中，使二甲苯正好浸没石蜡，盖上盖子，放入40℃的恒温箱中14h。

6.高温浸蜡。

将小烧杯中的石蜡和二甲苯混合液全部倒干净，注意不要把材料倒掉，马上倒入提前溶解好的熔点为54-56℃的纯石蜡，不要盖盖子，再把恒温箱的温度调到58℃，时间为4h-5h。

在两小时时换一次石蜡。

7.包埋。

即用纯石蜡将渗透好的材料封埋成蜡块，便于切片。

将溶解好的54-56℃的石蜡倒入事先准备好的蜡船中，用镊子将材料放入蜡船中，每隔1.5-2.0cm放一个材料，用镊子将材料扶正，动作要迅速，不能产生气泡。

然后放入装有冷水的脸盆中，使蜡迅速凝固。

待石蜡完全凝固后，取出蜡船阴干。

8.切片。

切片是用石蜡切片机把蜡块连同材料切成薄片。

具体步骤：
①蜡块的修正与粘附。

将材料用解剖刀修成宝塔形，材料在中央。

将宝塔粘附到载物块上，并用石蜡烫牢。

②安装切片刀和调节切片厚度。

装上切片刀，使刀身与材料切面平行（若不平行再将材料重新修平行），并略向内倾斜（约15°）调节切片的厚度为14微米。

③切片室4手摇切片机摇柄，左手持毛笔接蜡带，摇转速度要均匀，以没分钟40-50片为宜。

9.粘片。

肉眼观察或镜检，将看上去完整的切片进行粘片。

方法：
取干净的载玻片，滴三滴粘片剂（明胶1g+水100ml+碳酸2g+甘油15ml）与载玻片中央，加一滴蒸馏水，用手涂匀，用镊子将切片平铺在载玻片上，将多余的粘片剂用吸水纸吸干，然后将载玻片放在展片台（35℃）上，约1-1.5h，至蜡片全部展开为止。

然后将片子放在干净，通风的地方干燥3-4天。

10.脱蜡染色。

步骤：
①脱蜡。

即染色前用二甲苯将石蜡溶去。

将切片放入染色缸中，加入二甲苯，将染色缸放入45℃的恒温箱中45分钟，每15分钟换一次二甲苯。

②复水。

将切片依次经过1/2二甲苯+1/2无水乙醇→无水乙醇→无水乙醇→95%乙醇→80%乙醇→70%乙醇，各级5-10分钟，
③番红-固绿重染。

番红用71%乙醇溶解（0.5g+100ml70%乙醇），固绿用95%乙醇溶解（0.1g固绿+100ml95%乙醇）。

将切片放入番红染液中3-4h，然后取出切片，依次经过 70%（20s）
→85%(20s)→95%(20s)→固绿(20s)→95%(将固绿冲洗干净，3-4s)→无水乙醇(5-10min)→无水乙醇
(5-10min)→1/2二甲苯+1/2无水乙醇(5-10min)→二甲苯(5-10min)→二甲苯(5-10min)
11.封片。

光学树胶（光学中性树胶+二甲苯比例为1：1）。

将切片从二甲苯中取出后迅速滴一滴光学树胶，盖上盖玻片，（注意不要产生气泡，树胶也不要太多。

）放在干净，通风处，自然干燥。

12.贴标签。

最后在做好的切片的左边贴上标签，注明材料的名称，日期和制作者。

注意事项1.无水乙醇有硬化组织的作用，所以在无水乙醇中不宜浸得过久。

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2. 透明时，材料在二甲苯中不要放的太久，二甲苯易使材料变硬变脆。

3 所采用的石蜡熔点不宜太高，否则材料块会高度收缩变形，且高温浸蜡时间不要过长。

4.如果包埋处理失败，包埋块全部呈乳白色，并凹凸不平时，应该把它再度投入恒温箱内第3杯石蜡中，待其熔化后重新移入新的石蜡溶液中包埋。

5.展片时温度不要太高，时间不要太久，否则石蜡会溶解粘到载玻片上，不利于脱蜡。

6.蜡块要修齐，四个面要平行，否则会卷曲或弯曲。

7.固绿着色深，因此固绿染色时间不要太久。

分析和讨论5
在制作切片标本的许多操作步骤中，脱水、透明最为重要。

脱水总是逐渐进行的，必须彻底，务使组织内部一点残余的水分都不留。

如果脱水不彻底，石蜡渗透不佳，就无法制出满意的切片。

透明的目的是使材料块中的乙醇完全提出，并能顺利地渗入石蜡、透明剂（如二甲苯等），这是关键的一步。

此外固定的方法不当也同样达不到观察的目的，因此在操作时必须加倍小心。