之为快繁
3、生产无病毒种苗，防止品种退化
受病毒危害严重的作物： 大田作物：马铃薯、甘薯、甘蔗、烟草 蔬菜：白菜、大蒜、葱、番茄、箩卜
果树：柑橘、苹果、草莓、香蕉
花卉：香石竹、各种菊花、天竺葵、紫罗兰
4、节约耕地，提高农产品的商品率
块根、块茎、鳞茎为繁殖器官的作物， 每年产品用留作种的比例：
◆大蒜：留种量占产量的五到八分之一 ◆马铃薯：留种量占产量的十分之一 ◆贝母：留种量占产量的三分之一
其效果
• 香石竹（康乃馨）在38℃～40℃下经两个 月处理可除去全部病毒。
马铃薯在37℃下处理10～20天能除去卷叶 病毒。
2.组织培养脱毒法 包括微茎尖培养脱毒、愈伤组织培养脱 毒、珠心组织培养脱毒。
（1）微茎尖培养脱毒法 脱毒效果好 后代遗传稳定 使用最广泛的一种方法
1）原理及依据 病毒在植物体内分布不均，茎尖处含量最 少 病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争
黄瓜病毒病
辣椒病毒病
黄瓜病毒病
一串红病毒病
菜豆细菌性病害
危害一些植物的病毒数目
物种
菊花 康乃馨 水仙 唐菖蒲
感染病毒 种类 19
11 4 5
物种
矮牵牛 百合 马铃薯 大蒜
感染病毒 种类 5
6 17 24
物种
苹果 柑橘 葡萄 草莓
感染病毒 种类 36
23 26 24
风信子 月季
3 10
豌豆 樱桃
微体嫁接法(micrografting)
脱除病毒的关键：
①要求剥离技术很高； ②需要考虑砧木和接穗对营养 组成的不同要求； ③与接穗的取材季节有密切关 系（苹果4~6月取材嫁接成 活率较高。）
四、植物脱毒苗的鉴定
1、视觉观察法 (直接检测法) 看植株的茎叶是否有该病毒所有可见症状。
番 茄 无 菌 小 苗
脱毒后的马铃薯苗
一.病毒在植物体内的危害及分布
1.危害: 由于危害通过营养 绝大多数植物都可以无性繁殖的 , 容易受到多种病 体传给后代，病毒 原菌的侵染, 体内积累浓度相当高的病毒。 对寄主可造成毁灭 性危害，导致大幅 组织和细胞病变 度减产，甚至全株 新陈代谢等生理机能受到干扰 死亡。世界作物生 外观表现不正常状态 产中，病毒危害程 度仅次于真菌。

定义:将一些对病毒敏感、症状特征显著的植 物作为指示植物(又叫鉴别寄主),利用病毒在其 他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法 . 优点:方法简单\灵敏\准确\擦方便,仍为一种经济有 效的方法 缺点:枯斑法不能测出病毒总的核蛋白浓度,而只能 测出相对的感染力
部分病毒的木本指示植物及相应症状
病毒种类 苹果褪绿叶斑病毒 苹果茎痘病毒 苹果茎沟病毒 木本指示植物 苏俄苹果 司派227或光辉 弗吉尼亚小苹果 兰蓬王、红玉和金 冠 表现症状 叶片出现褪绿斑点，叶小，植株矮化， 长势弱 叶片反卷，植株矮化，皮层坏死 植株矮小，接合部内有深褐色坏死环 纹，木质部产生深褐色纵向条沟 叶片上产生黄斑、沿叶脉条斑
2）操作程序 外植体经表面消毒灭菌后，在解剖镜下，
经无菌操作切取小茎尖，接种到备用培养基上，
放入培养室内进行培养，并及时观察和记录培
养结果。
茎尖培养

1）茎尖大小：一般以带1-2片叶原基为好，大小为0.20.3毫米为宜，超过0.5毫米时，脱毒效果差。（外植体过 小茎尖存活率低） 2）培养基：能使茎尖快速生长、分化的培养基均适于脱 毒。 3）前处理：切取茎尖之前，植物材料如经过预处理，如 热水或热空气处理、低温处理、药物处理，均可大大提高 脱毒效率。 4）培养条件：同一般茎尖培养 5）外植体生理状态：由活跃生长的芽上切取
二、植物脱毒的意义
1、能够有效地保持优良品种的特性
任何一种优良品种均需有一个稳 定地保存其遗传性状的繁殖方法。
离体无性繁殖可以很好地保持品 种的优良特性，是无性繁殖品种繁 育的理想途径。
2、快速繁殖品种，使优良品种迅速应用
◆离体繁殖周期短
◆不受季节限制
◆繁殖系数高
◆繁殖速度是任何其他方法所不能比的，又称


2、生物鉴定法 (指示植物indicating Plant法)
由于采用汁液接种法比较困难，所以通常采用 嫁接接种的方法, 利用嫁接法接种，把待测的植物 接种在敏感植物上，然后视其有无病斑，来判断是否 脱除了病毒。
指 示 植 物
接 穗
嫁接后 的植物
指示植物indicating Plant法
厚 叶 莲 花 掌
植物病毒的症状


植物病毒引起植株的症状是各异的，在观赏植物 上由病毒引起外部症状主要有以下几种：
（1）变色：褪绿、黄化、花叶、斑驳、红叶等，常见病毒有；香石 竹斑驳病毒、黄瓜花叶病毒、芋花叶病毒等。 （2）坏死：常见的坏死是病斑或斑点。有轮斑、环斑、条斑‘条纹 等。如香石竹坏死斑点病毒、，凤仙花坏死斑点病毒草等。 （3）畸形：植株可出现矮缩、矮化或叶片皱缩、卷叶、蕨叶等病状。 （4）萎蔫 ：主要是指植物根或茎的维管束组织受到破坏而发生供水 不足所出现的凋萎现象。
(贝母：多年生草本植物,其鳞茎供药用,有止咳化痰、清热 散结之功。产于四川、云南、陕西秦巴山区，甘肃等地)
5、便于运输
常规的块根、块茎等，体细胞大、 含水量高，包装、运输十分不便。 离体繁殖的种苗体积小，易携带， 运输十分方便。
以马铃薯为例：
按一亩地4000株计算，常规薯4000个重 200kg（每个50g），若用试管薯4000个则只有 2kg（每个0.5g）。
缺点：
会有20%~30%左右的变异率，同时无毒苗 苗期较长。柑橘要6~8年才能结果。
3.微体嫁接离体培养脱毒法
应用微体嫁接的原因： 木本植物茎尖培养难以生根形成植株。 具体做法： 将极小的茎尖（0.14mm~1.0mm）作为接穗嫁接到 不带病毒的种子实生苗砧木上，然后将砧木、接穗一 起在培养基上培养。 优点：接穗在砧木上易成活，故可用很小的茎尖来培 养，去除病毒几率大，获得无病毒苗的可能性大。 微嫁接要求的剥离技术高，嫁接成活率与接穗大小 呈正相关，而脱毒率与接穗大小呈负相关
15 44
桃 梨
23 11
病毒的特性及侵染

有性生殖退化、仅用无性繁殖方法繁殖的植物， 极易受病毒病的侵染。 大多植物病毒不经种子传播（专化性强的病毒 除外）。


病毒在生长旺盛的部位繁殖速度慢。
所谓脱毒就是采用一定的方法除去植物体
内病毒的技术。
无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病 毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表 现阴性反应的苗木。
（2）技术关键 诱导再生植株的愈伤组织 （3）操作程序 植物各种器官或组织诱导产生出愈伤组织， 愈伤组织多次继代，然后从愈伤组织再诱导分 化芽，长成植株。 愈伤组织培养脱毒法脱毒效果不定，常出 现一些变异。
（3）珠心组织培养脱毒法 病毒是通过维管组织传播，而珠心组织和 维管束系统无直接联系，故可以通过珠心组织 离体培养获得无病毒植株。 目前已用该方法去除了柑橘银屑病、叶脉 突出病、柑橘裂皮病、速衰病等病毒。
一.病毒在植物体内的危害及分布


2.分布
在植物体内的分布具有不均匀性，随植株不同部位 和年龄而异。 – 老叶和成熟组织及器官中病毒含量较高 – 根尖、茎尖生长点约0.1~1mm区域内，几乎不含病 毒。（原因？） (原因：分生组织细胞分裂和生长速度快，而病毒 在植物体细胞内繁殖速度相对较慢；另外，病毒 是通过筛管组织或胞间联丝传播至其他组织细胞 的，而茎尖分生组织无分化，没有维管组织。)
康乃馨 各种病毒 大丽花 大蒜 甘蔗 草莓 花叶病 花叶病毒 花叶病 各种病毒
技能提示
• 脱毒时，最好找出茎原
基所带叶原基的数目与
生长点（茎尖）大小的
相关性，这样在取材时
就方便多了
• 茎尖越小对培养基的要
求越高，剥离技术要求
越高，成功率越低。
2、愈伤组织培养脱毒法
（1）原理及依据 a、病毒在植物体内分布不均匀 b、病毒复制的能力衰退或丢失 c、继代培养的愈伤组织产生抗性变异
小茎尖：顶端分生组织+叶原基（1—2个），大小 为0.1mm-1mm。
热处理结合茎尖脱毒培养
用于脱毒的适宜茎尖大小
植物 病毒名称 马铃薯卷叶病毒 马铃薯Y病毒 马铃薯 马铃薯X病毒 马铃薯G病毒 马铃薯S病毒 斑纹花叶病毒 甘薯 缩叶花叶病毒 羽毛状花叶病毒 剥离茎尖大 小 （mm） 1.0～3.0 1.0～3.0 0.2～0.5 0.2～0.3 0.2以下 1.0～2.0 1.0～2.0 0.3～1.0 植物 百合 鸢尾 菊花 剥离茎尖大 病毒名称 小 （mm） 花叶病 花叶病 各种病毒 0.2～1.0 0.2～0.5 0.2～1.0 0.2～0.8 0.6 0.3～1.0 0.7～3.0 0.2～1.0



病毒对寄主植物可造成毁灭性危害，导致大幅 度减产，甚至全株死亡。 潜隐性病毒侵染植物造成症状不明显的慢性危 害，不易被发现，尤其危险。 国内外解决作物病虫害的有效途径是培育无病 毒苗，实施农作物无病毒化栽培。
无病毒苗
是指不含该种植物的 主要危害病毒，即经检测 主要病毒在植物内的存在 表现阴性反应的苗木。



2、茎尖剥离和接种
将已消毒的芽放在带滤纸的培养皿上
解剖镜下剥去幼叶
切下带1～2个叶原基的生长点（0.3～0.5mm）
切下的茎尖转至培养基上（顶部向上）。
优缺点：
茎尖越小，去病毒 机会越大，脱毒效果就 越好，但同时因为其含 营养及水量太低，故培 养时对培养基的要求就 越高，对剥离技术要求 也越高。
植物组织培养
第四章 脱毒苗的培育
Good Morning
教学内容
一.病毒在植物体内的分布及危害； 二.植物脱毒的意义 三.植物脱毒的原理和方法； 四.植物脱毒苗的鉴定； 五.植物脱毒苗保存、应用与繁殖