cho细胞表达系统及筛选原理
Cho细胞表达系统及筛选原理
一、引言
Cho细胞表达系统是一种常用的哺乳动物细胞表达系统,被广泛应用于重组蛋白的生产。
本文将介绍Cho细胞表达系统的原理以及其在蛋白质筛选中的应用。
二、Cho细胞表达系统的原理
Cho细胞是一种中国仓鼠卵巢细胞系,具有较高的生长速度和蛋白质表达能力。
Cho细胞表达系统主要包括以下几个关键步骤。
1. 转染
将目标基因导入Cho细胞中,通常使用质粒转染法或病毒载体转染法。
质粒转染法通过将目标基因插入质粒DNA中,然后利用转染试剂将质粒DNA导入细胞内。
病毒载体转染法则通过构建携带目标基因的病毒载体,将其感染到Cho细胞中。
2. 选择性筛选
为了确保只有转染成功的细胞能够表达目标蛋白,通常在培养基中添加适当的选择性抗生素,如G418或葡萄糖酸钾。
只有转染成功的细胞才能抵抗抗生素的作用,存活下来。
3. 扩增和表达
经过筛选的细胞将被扩增培养,以获得足够数量的细胞进行大规模
蛋白质表达。
通常选择合适的培养基和培养条件,以提高细胞的生长速度和蛋白质表达水平。
4. 蛋白质纯化
经过表达的目标蛋白质需要进行纯化,以去除其他杂质。
常用的纯化方法包括亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等。
通过这些方法,可以获得高纯度的目标蛋白质。
三、Cho细胞表达系统在蛋白质筛选中的应用
Cho细胞表达系统在蛋白质筛选中具有以下优势。
1. 高表达水平
Cho细胞具有较高的蛋白质表达能力,能够快速产生大量目标蛋白。
这对于需要大量蛋白质的研究和工业应用非常有利。
2. 真核细胞表达
与原核细胞表达系统相比,Cho细胞表达系统能够实现真核细胞蛋白质表达。
这使得Cho细胞表达系统适用于需要进行正确的蛋白质翻译修饰、蛋白质折叠和组装的蛋白质研究。
3. 可选择性筛选
通过添加适当的选择性抗生素,可以筛选出成功表达目标蛋白的细胞。
这样可以确保筛选后的细胞具有较高的表达水平和纯度。
4. 灵活性
Cho细胞表达系统可以应用于多种类型的蛋白质,包括单链抗体、重组蛋白、酶等。
它还可以适应多种表达策略,如稳定细胞线和临时表达。
5. 成本效益
相对于其他哺乳动物细胞表达系统,Cho细胞表达系统具有较低的成本。
这使得它成为许多研究实验室和生物制药公司的首选。
四、结论
Cho细胞表达系统是一种常用的哺乳动物细胞表达系统,具有高表达水平、真核细胞表达、选择性筛选、灵活性和成本效益等优势。
在蛋白质筛选中,Cho细胞表达系统可以快速高效地产生目标蛋白,为研究和应用提供了重要工具。
未来,随着技术的不断发展,Cho 细胞表达系统将在蛋白质研究和生物制药领域发挥更大的作用。