Co-IP实验步骤
一、制备细胞样品
1.10cm盘细胞用PBS清洗两次，加入1mL RIPA裂解液和10μL PMSF
（100mM稀释至1mM）；
2.充分混匀吹打后，冰上裂解4h，充分吹打吸入1.5mL EP管中，
-80℃保存；
3.取出样品，1200rpm离心10min，取上清弃沉淀，测定蛋白浓度。

二、Co-IP，拉出蛋白
1.每管取出少量蛋白样（15~30μL）作为input；
2.将磁珠充分混匀后，取出50μL于1.5mL EP管中，置于磁力架上，
弃上清。

（有几个样品就准备几管）；
3.加入200μL Ab binding&washing Buffer（可用PBST代替），加入对
应抗体，加入后轻弹混匀，360°混合仪上旋转30min；
4.500rpm离心使管壁液体下来，弃上清，200μL PBS清洗（旋转
5min）；
5.加入1000μg 蛋白样品于EP管中，轻弹混匀，旋转1h，弃上清；
6.加入200μL washing buffer（或PBST）清洗3次；
7.加入100μL washing buffer 悬浮磁珠并将溶液转移至新的EP管中；
8.弃上清，加入6μL 5×loading buffer，24μL Elution buffer（或ddw，
洗脱液）；
9.100℃煮10min，吸取上清；
10.进行WB或SDS-PAGE。

注意事项：
1.标记：样品名+抗体名；
2.抗体上必须标有“IP”字样，有推荐用量；
3.Co-IP中pull down 抗体与WB抗体的来源（M,R）必须不同；
4.PBST=PBS + 0.02% 吐温。