丁黎
中国药科大学色谱分析课程
第六节
分离度及影响因素
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分离度的定义 影响分离度的因素
改善分离的一般原则
一、分离度的定义
分离度（resolution，缩写为R） 分离度 又称作分辨率，用以衡量相邻峰 的分离情况，是把柱效率和溶剂 效率综合到一起的参数。
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一、分离度的定义
• k 为相邻两组分中保留时间长的组分的容量因 子，即 k2。
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柱效项
柱选择项
n 1 k R ( )( ) 4 1 k
柱容量项
柱效项主要与理论塔板数相关，柱选择项与柱容 量项相互关联。
在气相色谱中，柱选择 项和柱容量项虽然都与 色谱柱的性质相关，但 柱选择项主要受色谱柱 性质影响，柱容量项主 要受柱温左右。 在液相色谱中柱选择项 和柱容量项也都与色谱 柱及流动相的性质相关， 但柱选择项主要取决于 流动相的种类。
• 分离度由下式计算：
R 2(t R (2) t R (1) ) W2 W1 1.18(t R (2) t R (1) ) W1/ 2(2) W1/ 2(1)
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对于两个等面积峰
R = 1：分离程度98%（又称4σ分离） R = 1.25：达99.2%的分离 R = 1.5：达99.7%（又称6σ分离） （3）选择分离因子较大的色谱条件
① 降低柱温（气相色谱中常用在GC中）：在G C中，对分离因子α而言:
2.13 ln (Tb2 Tb1 ) c RTc
式中，Tc 为柱温，Tb1 和 Tb2 分别为组分1、2 的沸点，c 为常数，R 为热力学常数。可见， 柱温降低，分离因子增加，柱选择项增加， 分离度增加。
色谱分析
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第二章 色谱法的基本术语及理论
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主要内容
第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 色谱分离与保留作用 有关色谱保留的基本术语及参数 塔板理论 速率理论 色谱峰展宽的柱外因素
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主要内容
第六节 第七节 第八节 第九节 分离度及影响因素 系统适应性试验 测定法 色谱吸附或分配等温线
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主要内容
第六节 第七节 第八节 第九节 分离度及影响因素 系统适应性试验 测定法 色谱吸附或分配等温线
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n 1 k R ( )( ) 4 1 k
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n 1 k R ( )( ) 称为分离度方程。 4 1 k
• n 为色谱柱的理论塔板数；
• α为相对保留值比（即分配系数比或容量因子 比），即α = k2 / k1，k1、k2 分别为两待分离组 分的容量因子；α﹥1，即 k2 ﹥k1；
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• k 变小，谱带流出较早，分离度变差；k变大， 分离度增加。但是当 k = 5～6 时，对分离度的 贡献已基本上达到最大，再增加对分离度已无 多大贡献。
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• 在填充柱气相色谱中，柱效低，因而为了达到 预期的分离度，选择性是最重要的因素，因此， 在填充柱气相色谱中，需提供许多种性质不同 的固定相供选择。 • 在高效毛细管气相色谱中，只需使用几种固定 相就可分离复杂的混合物。
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三、改善分离的一般原则
1.增加△t R，即相邻组分保留时间的差值 2.减小谱带宽度（峰宽）W
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三、改善分离的一般原则
1、增加
tR tR 2 tR1
（1）增加柱长 （2）增加固定相的量 （3）选择分离因子较大的色谱条件 ① 降低柱温 ② 选择不同的固定相（填充柱GC中常用） ③ 选择不同的流动相（HPLC中常用）
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• 《中华人民共和国药典》要求“除另有
规定，分离度应大于1.5”。
• 在实际工作中，有时R = 1.25 时也被认可， 因为GC与HPLC的误差为1％。
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二、影响分离度的因素
• 分离度不仅取决于两组分的保留时间，也取决 于其对应色谱峰的宽度。相同的分离度在高效 或低效色谱系统中均可达到，因为影响分离度 R大小的因素可以用下式表示：
② 减小色谱系统的死体积：如在填充经典的制 备柱时，经常采用湿法装柱。柱子装好后一 般要在流动相流动的情况下给出足够的时间 让固定相沉降，等固定相不再沉降后才能上 样品。 ③ 减小进样量：防止色谱柱超载。
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主要内容
第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 色谱分离与保留作用 有关色谱保留的基本术语及参数 塔板理论 速率理论 色谱峰展宽的柱外因素
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（1）增加色谱柱长
• 对于长度不同的同一种色谱柱：
R2 R1 n2 n1 L2 L1
• 式中，L1、L2分别为两根色谱柱的长度。可见， 增加色谱柱的长度，理论塔板数将会增加，从 而可提高分离度。
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（2）增加固定相的量
• 增加固定相的量，则 k 增加，柱容量项增加， 分离度增加。
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（3）选择分离因子较大的色谱条件
② 选择不同的固定相：填充柱气相色谱中常用。
③ 选择不同的流动相：高效液相色谱中常用。
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三、改善分离的一般原则
2、减小谱带宽度（峰宽）W
① 提高柱效，减小塔板高度：使用颗粒更细的 填料，更小心、均匀的填充色谱柱。