流式细胞术在微小残留（MRD） 检测中的应用
一、MRD概念
指白血病患者经诱导治疗达临床缓解后，体 内残存的少量白血病细胞。此时白血病细胞 仍可达1010，是复发的根源。研究表明当体 内白血病细胞小于106时，肌体通过自身免疫 机制可将之清除。即MRD检测敏感性应达到 10-4，才有意义。
二、MRD检测意义
4、流式细胞术：根据白血病细胞表面或细胞 内免疫分子来区别并计数白血病细胞。可以 直接计数白血病细胞（PCR是根据扩增产物 的量进行推算），并可区分活细胞或将要凋 亡 的 细 胞 及 碎 片 。 敏 感 性 10-4 ， 较 PCR 低 （但达到临床要求）；白血病进展及治疗后，
免表型可能发生改变，造成假阴性。目前 仍是最简单、直接、精确、使用的方法。
3、时机选择：常在化疗第19天取第一次标 本进行检测。此时白血病细胞及正常重建的 细胞都存在；经过化疗后白血病细胞免疫表 型可能发生改变，而此时已经经过一轮强烈 化疗，今后再变的可能性较小；此时白血病 细胞和正常重建细胞在流式图上的分布特点 就是今后区分白血病细胞与正常细胞的依据。
4、常用抗体组合及其有效频率：
12.86% 91.43%
TdT/CD10/CD34/CD19抗体组合
2、 荧光原位杂交（FISH）：依靠区域特异 DNA探针对染色体染色来鉴别染色体数量和 结构的改变，从而区分白血病细胞。分子水 平。敏感性差。
3、聚合酶链反应（PCR）：通过检测扩增 的靶系列（染色体断裂点融合区、免役球蛋 白及T细胞受体基因重排）来区分白血病细胞。 敏感性最高10-6 。但覆盖面小（65%儿童 ALL缺乏特异的含有断裂点融合区的染色体 改变；另由于白血病细胞重组酶活性较强， 重排基因可能进一步重排，造成假阴性。）
预报复发；指导缓解后治疗；指导干细胞移 植（时机的把握、术后的监测）；判断预后 和指导更精确的缓解标准。
三、 常用MRD检测方法原理及其优、 缺点：
1、 传统的细胞遗传学：80%--90%的急性 及95%以上的慢性儿童白血病有染色体的异 常改变，如慢粒的PH染色体，这一特征可作 为MRD检测指标。覆盖面广，但敏感性差 （1%--10%）。尤其当基因改变不足以影响 染色体大体水平时会成假阴性。
TDT/CD34/CD10/CD19
65.71%
CD38/CD34CD10/CD19
45.71%
CD58/CD34/CD10/CD19
61.43%
CD45/CD34/CD10/CD19
44.29%
CD66c/CD34/CD10/CD19 32.86%
CD22/CD34/CD10/CD19 合计
四、以ALL为例流式细胞术在MRD检 测中的具体应用
1、原理
2、指标的选择：理想的指标是只在白血病 细胞表达而不在正常细胞表达的抗原。尚未 发现。但据白血病细胞抗原表达特点（跨系、 时相紊乱、量的异常），及正常早期B细胞对 糖皮质激素十分敏感等特点，仍能找出相应 指标。常为几种抗原的组合。如 CD34+/CD10+/CD19+