ｅｎｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ＨＣＣ．
： ， ； ； ； Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｅｘｏｓｏｍｅｓ ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ
ｄ收基作通ｏｉ稿金者信：１日 项 简 作０．期 目 介 者３９：：：：６２福 吴 王９０／２建 俊 耀ｊ０． ｉ医 艺 东ｓ－ｓ０ｎ（，科２．电１１大９－０子９０１０学１２信－；启－修箱）５航，２回：男５ｗ基６日ａ，．金ｎ主２期ｇ０ｙ（要２ａ：２０ｏ２０从ｄ．０１ｏ０２８ｎ事８０Ｑｇ．ｃ－肝Ｈ０ｈ１０１＠胆８３１１１－胰２６１）３相１．。ｃ关ｏｍ疾。病研究。
ｓｑｕａｒｅ ｔｅｓｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃａｔｅｇｏｒｉｃａｌ ｄａｔａ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ． Ｔｈｅ Ｋａｐｌａｎ － Ｍｅｉｅｒ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｌｏｇ － ｒａｎｋ ｔｅｓｔ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ
， ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｅｘｏｓｏｍａｌ ｍｉＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ ｗｉｔｈ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｃｏｘ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ ｈａｚａｒｄｓ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ
摘要：目的 方法 探讨肝细胞癌（ ＨＣＣ） 患者血清外泌体来源 ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ ｍｉＲＮＡ） － ２２１ － ３ｐ 的表达水平及分析其临床意义。
选取 ２０１０ 年 ２ 月 － ２０１４ 年 １２ 月南京大学医学院附属南京鼓楼医院经手术治疗后诊断为 ＨＣＣ 的 ６６ 例患者作为 ＨＣＣ 组，选取 ２５
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临床肝胆病杂志第 卷第期 年月 ， ， ３６ ８ ２０２０ ８ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｈｅｐａｔｏｌ Ｖｏｌ．３６ Ｎｏ．８ Ａｕｇ．２０２０
血清外泌体来源的 ｍｉｃｒｏＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ 在肝细胞癌中的表达及意义
吴俊艺１，２，赖智德１，田毅峰１，王耀东１
１ 福建省立医院肝胆胰外科，福州３５０００１；２ 南京大学医学院附属南京鼓楼医院肝胆胰外科，南京２１０００８
例同期在本院接受健康检查的体检者作为对照组。 通过外泌体提取试剂盒分离 ＨＣＣ 组和对照组血清中的外泌体，采用蛋白免疫印
迹检测外泌体标记蛋白分子，透射电镜鉴定血清外泌体形态；实时荧光定量 ＰＣＲ 方法检测两组血清外泌体来源的 ｍｉＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ
表达水平。 计量资料两组间比较采用 Ｍａｎｎ － Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ 检验，计数资料两组间比较采用 χ２ 检验。 采用 Ｋａｐｌａｎ － Ｍｅｉｅｒ 方法及 ｌｏｇ －
失去手术时机［２］。因此，深入研究ＨＣＣ 的发病机制、寻 及ａｎｔｉ － ＣＤ６３ 一抗在４ ℃ 冰箱中孵育过夜，ＰＢＳ 缓冲液
找新的ＨＣＣ 早期诊断标志物具有重要意义。目前临床 冲洗后二抗孵育１ ｈ，采用化学发光法显色并拍照（Ｔａｎｏｎ
上ＡＦＰ 的检测是ＨＣＣ 筛查的主要手段，但是其对ＨＣＣ ５２００ 成像系统）。
结果 ｒａｎｋ 检验分析血清外泌体来源的 ｍｉＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ 表达与预后关系，采用 Ｃｏｘ 比例风险回归模型分析预后影响因素。
血清
来源的外泌体是直径为 ４０ ～ １００ ｎｍ 囊泡体，表达 ＨＳＰ７０、Ａｌｉｘ 及 ＣＤ６３。 ＨＣＣ 组血清来源外泌体中 ｍｉＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ 较对照组表达 水平升高，差异具有统计学意义（ Ｕ ＝ ３５４． ００，Ｐ ＜ ０． ００１） 。 ＨＣＣ 患者血清外泌体 ｍｉＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ 高表达与肿瘤大小（ χ２ ＝ ６． ０１６， Ｐ ＝ ０ ０１４） 、包膜侵犯（ χ２ ＝ ７ ５８０，Ｐ ＝ ０． ００６） 和 ＴＮＭ 分期（ χ２ ＝ ６． ３４０，Ｐ ＝ ０． ０１２） 有关。 此外，血清外泌体来源的 ｍｉＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ 表达水平较高的 ＨＣＣ 患者总体生存率较低，差异具有统计学意义（ χ２ ＝ １７． １０５，Ｐ ＜ ０． ００１） 。 多因素分析结果表明血清外泌体来
吴俊艺，等． 血清外泌体来源的ｍｉｃｒｏＲＮＡ －２２１ －３ｐ 在肝细胞癌中的表达及意义
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肝细胞癌（ＨＣＣ）是最常见的恶性肿瘤之一，ＨＣＣ 的 （ＪＥＭ － ）在 ２１００ １００ ｋＶ 电压下进行观察并拍照。
发展具有多种癌症特征，如持续性细胞增殖、逃避凋亡、 １． ３． ３ 白免疫印迹 通过含有蛋白酶抑制剂的裂解
达水平明显升高，对 ＨＣＣ 诊断及预后判断具有参考价值。
关键词：癌， 肝细胞； 外泌体； 微 ＲＮＡｓ； 预后 中图分类号：Ｒ７３５． ７ 文献标志码：Ａ 文章编号： （ ） １００１ － ５２５６ ２０２０ ０８ － １７６８ － ０５
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｅｘｏｓｏｍａｌ ｍｉｃｒｏＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ
： （ ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｅｘｏｓｏｍａｌ ｍｉｃｒｏＲＮＡ ｍｉＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ ｉｎ ｈｅｐａｔｏ
（ ） ， ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＨＣＣ ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ６６ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏ ｕｎｄｅｒｗｅｎｔ ｓｕｒｇｅｒｙ ｉｎ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｄｒｕｍ Ｔｏｗｅｒ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ， ， Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ ｆｒｏｍ Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１０ ｔｏ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１４ ａｎｄ ｗｅｒｅ ｄｉａｇｎｏｓｅｄ ｗｉｔｈ ＨＣＣ ｗｅｒｅ ｅｎｒｏｌｌｅｄ ａｓ ＨＣＣ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ２５ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｗｈｏ
ｕｎｄｅｒｗｅｎｔ ｐｈｙｓｉｃａｌ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｏｕｒ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｐｅｒｉｏｄ ｏｆ ｔｉｍｅ ｗｅｒｅ ｅｎｒｏｌｌｅｄ ａｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ． Ｔｈｅ ｅｘｏｓｏｍｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｋｉｔ ｗａｓ
； ； ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｓｅｒｕｍ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｘｏｓｏｍｅ ｍａｒｋｅｒｓ ａ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉ ； ｃｒｏｓｃｏｐｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｅｘｏｓｏｍｅｓ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ － ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ， ｅｘｏｓｏｍａｌ ｍｉＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ． Ｔｈｅ Ｍａｎｎ － Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ ｔｅｓｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｄａｔａ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｈｉ －
ｍｏｄｅｌ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｓｅｒｕｍ ｅｘｏｓｏｍｅｓ ｗｅｒｅ ｓｍａｌｌ ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ ｖｅｓｉｃｌｅｓ ｗｉｔｈ ａ ｄｉａｍｅｔｅｒ ｏｆ
， ， ， ａｂｏｕｔ ４０ － １００ ｎｍ ａｎｄ ＨＳＰ７０ Ａｌｉｘ ａｎｄ ＣＤ６３ ｗｅｒｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｏｓｏｍｅｓ． Ｔｈｅ ＨＣＣ ｇｒｏｕｐ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒ （ ， ） ， ｕｍ ｅｘｏｓｏｍａｌ ｍｉＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ Ｕ ＝ ３５４． ００ Ｐ ＜ ０． ００１ ． Ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＨＣＣ ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ （ ， ）， （ ， ）， ｅｘｏｓｏｍａｌ ｍｉＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ ｗａｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｕｍｏｒ ｓｉｚｅ χ２ ＝ ６． ０１６ Ｐ ＝ ０． ０１４ ｃａｐｓｕｌａｒ ｉｎｖａｓｉｏｎ χ２ ＝ ７． ５８０ Ｐ ＝ ０． ００６ ａｎｄ （ ， ） ， ＴＮＭ ｓｔａｇｅ χ２ ＝ ６． ３４０ Ｐ ＝ ０ ０１２ ． Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｔｈｅ ＨＣＣ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｅｘｏｓｏｍａｌ ｍｉＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ ｈａｄ ａ ｓｉｇ （ ， ） ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｏｖｅｒａｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ χ２ ＝ １７． １０５ Ｐ ＜ ０． ００１ ． Ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘ （ ［ ］ ， ［ ］： ， ） ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｅｘｏｓｏｍａｌ ｍｉＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ ｈａｚａｒｄ ｒａｔｉｏ ＨＲ ＝ ２． ４３４ ９５％ ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅ ｉｎｔｅｒｖａｌ ＣＩ １． １７８ － ５． ０２７ Ｐ ＝ ０． ０１６ （ ， ： ， ） ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｓｔａｇｅ ＨＲ ＝ ２． ６５３ ９５％ ＣＩ １． ２２２ － ５． ７６０ Ｐ ＝ ０． ０１４ ｗｅｒｅ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＨＣＣ． ， Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅｒｅ ｉｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｅｘｏｓｏｍａｌ ｍｉＲＮＡ － ２２１ － ３ｐ ｉｎ ＨＣＣ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｉｃｈ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ａ ｒｅｆｅｒ