第七章 茎尖培养和脱 毒、快繁技术
第七章 茎尖培养和脱毒、快 茎尖培养和脱毒、 繁技术： 繁技术：
7.1 茎尖培养： 7.2 脱毒技术： 7.3 快速繁殖技术
7.1 茎尖培养
7.1 茎尖培养
1. 茎尖培养的概念 2. 茎尖培养的应用： 3. 茎尖培养的方法
7.1 茎尖培养
1. 茎尖培养的概念： 1. 茎尖培养的概念 • 茎尖分生组织培养： （ meristem ） , 不带叶 茎尖分生组织培养：（ meristem） 原基， 250um； 原基，<250um； • 茎尖培养： (shoot tip), 带 1-3 个叶原基 ， 茎尖培养：(shoot 个叶原基， 100-1000um； 100-1000um； • 芽培养：(shoot)，>1mm。 芽培养：(shoot)， mm。
Байду номын сангаас
无菌短枝型：节培法、微型扦插法。将待繁殖的材 节培法、 微型扦插法。
料剪成带一叶的单芽茎段，转入成苗培养基， 料剪成带一叶的单芽茎段，转入成苗培养基，成苗 后再剪成带一叶的单芽茎段，继代成苗。遗传稳定。 后再剪成带一叶的单芽茎段，继代成苗。遗传稳定。
•
丛生芽增殖型：茎尖或初代培养的芽，在适宜的培 茎尖或初代培养的芽，
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
4. 病毒检测 • 指示植物法 （indicator）：提取脱毒苗的汁液， 接种（汁液接种、芽嫁接等）到能产生明显的 典型症状的别种植物（指示植物）上，根据接 种后指示植物的表现确定脱毒是否彻底。 • 指示植物的选择 ：1.对特定病毒敏感，且症状 表现明显；3.本身无毒（如种子繁殖）；2.可 常年栽培； 常用：千日红、笕色藜、野生马铃 薯、曼陀罗、心叶烟等。
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
4. 提高试管苗繁殖速度的措施：
① 选择合适的繁殖途径 ② 改良培养基： 激素 （腋芽 、 不定芽 、 胚状体 ） 等； 激素（ 腋芽、 不定芽、 胚状体） ③ 改良培养条件 ： 温 、光 、 湿度、 气体（有利气体、 湿度 、 气体 （ 有利气体、
4. 病毒检测： • 电镜法：用电镜直接观察病毒颗粒，通过病 毒颗粒的形态直接鉴定病毒的存在。比较快 速、可靠；但需要电镜和样本制备技术。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
5. 几种植物的脱毒技术 • 马铃薯、甘薯、甘蔗、苹果、草莓、柑桔、 马铃薯、甘薯、甘蔗、苹果、草莓、柑桔、 香蕉
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
有害气体） 有害气体）
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
5. 种苗繁殖体系： 对大规模栽培的植物， 特别是脱毒苗， 种苗繁殖体系：对大规模栽培的植物 ， 特别是脱毒苗， 需要三级繁殖体系。 花卉等规模不大的则不一定需要。 需要三级繁殖体系 。 花卉等规模不大的则不一定需要。
次，少部分长出芽；
•
结合热处理脱毒：先热处理植株，取1mm的茎尖培 ：先热处理植株， mm的茎尖培
养；试管苗热处理；
•
结合化学疗法脱毒 ：如抗病毒制剂 Virazole可以抑 ：如抗病毒制剂Virazole 可以抑
制病毒复制；
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
4. 病毒检测： 病毒检测：经过茎尖培养的植物不一定全是无 毒的，需要经过严格的鉴定才能用材料消毒： • 指示植物法（indicator）： • 抗血清鉴定法： • 酶 联 免 疫 法 (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA): • 电镜法：
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• •
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
2. 常用的快繁类型及特点：
① 无菌短枝型： ② 丛生芽增殖型： ③ 器官发生型： ④ 胚状体发生型： ⑤ 原球茎型：
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
2. 常用的快繁类型及特点： •
1. 脱毒苗培育的意义： 2. 脱毒原理： 3. 茎尖培养脱毒技术和程序： 4. 病毒检测： 5. 几种植物的脱毒技术
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
1. 脱毒苗培育的意义： • 是无性繁殖作物消除病毒的有效手段：病毒 一般不能通过种子传播到下一代， 一般不能通过种子传播到下一代，所以无性 繁殖植物易受病毒的侵害， 繁殖植物易受病毒的侵害，造成产量品质的 下降；脱毒苗一般可提高产量30-70% 下降；脱毒苗一般可提高产量30-70%。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
4. 病毒检测： • 抗血清鉴定法：用纯化的病毒注射动物，在 动物的血清中产生抗体。抗原与抗体之间存 在十分特异的凝集和沉淀反应。已知病毒的 抗血清可以用来鉴定这种病毒的存在与否。 试管沉淀反应、点滴沉淀实验、凝聚试验等。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
4. 病毒检测： •
酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,
ELISA):在血清法的基础上，结合酶反应发展起来。 在抗体上带上某种酶，抗原和抗体结合成的免疫复 合物就有了酶活性，在反应体系中加入酶底物，底 物在酶的催化下，形成有色反应物。从而使检测的 灵敏度大大提高。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
养基上诱导， 不断发生腋芽， 养基上诱导， 不断发生腋芽， 而成丛芽；最后生根 成苗。遗传稳定。 成苗。遗传稳定。
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
2. 常用的快繁类型及特点： • 器官发生型：从无芽组织直接诱导不定芽， 从无芽组织直接诱导不定芽， 或诱导出愈伤组织后， 或诱导出愈伤组织后，再在从愈伤组织上诱 导不定芽。易变异。 导不定芽。易变异。 • 胚状体发生型：从愈伤组织诱导胚状体，繁 从愈伤组织诱导胚状体， 殖速度快，但成功的事例不多。易变异。 殖速度快，但成功的事例不多。易变异。可 以制作人工种子。 以制作人工种子。
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 培养方法：固体培养、液体纸 桥培养（易愈伤化时）
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 对培养基和培养条件的要求： • 一般可用MS培养基，加少量的生长素（不 用2,4-D）和细胞分裂素；GA3有时对抑制 愈伤等有一定的效果。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
3. 快繁的一般步骤：
③ 试管苗的壮苗与生根：
• 一般要分成单苗 ， 转移到盐浓度较低 、 不含细 一般要分成单苗， 转移到盐浓度较低、 胞分裂素， 含低浓度生长素的生根壮苗培养基， 胞分裂素 ， 含低浓度生长素的生根壮苗培养基 ， 至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。 至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。 • 问题：不易生根 （ 延长时间、 继代 ） ；易生根： 问题：不易生根（ 延长时间 、 继代） 壮苗阶段不加生长素， 壮苗阶段不加生长素 ， 试管外生根可减少费用； • 特殊方法：如马铃薯的小球茎法。 特殊方法：如马铃薯的小球茎法。
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
2. 常用的快繁类型及特点： • 原球茎型：兰花的茎尖或腋芽在组织培养的 条件下可直接产生原球茎。 条件下可直接产生原球茎。原球茎是一种类 胚组织，可以继代增殖成新的原球茎， 胚组织，可以继代增殖成新的原球茎，控制 条件也很容易分化成植株。 条件也很容易分化成植株。
3. 茎尖培养技术： • 材料消毒：在温室种植或田间种植的健康植 株上取枝条，必要时母株可用杀菌剂处理； 在实验室切取2-3cm长的芽，去掉较大的叶 片，进行常规的表面灭菌；
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 茎尖分离：将灭菌的芽置放有湿滤纸的无菌 培养皿中，置体视显微镜下，依次用镊子或 解剖刀剥去叶片直至露出生长点，用锋利的 解剖刀片把带或不带叶原基的分生组织切下 来，直接接种到培养基上；
1. 试管苗无性繁殖的意义： 2. 常用的快繁类型及特点： 3. 快繁的一般步骤： 4. 提高试管苗繁殖速度的措施： 5. 种苗繁殖体系
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
1. 试管苗无性繁殖的意义： •
与脱毒技术结合，生产无毒苗原种；苹果、桃子、枣、大 蒜、康乃馨、唐菖蒲、 加快果树、花卉、林木、药材等繁殖系数低的植物优良品 种的繁殖速度；月季、杜鹃（扦插难生根） 是兰花唯一的大规模无性繁殖方法； 为一些不能进行常规繁殖的植物材料提供了新的繁殖方法。 如雄性不育系（如大白菜）、自交系、和杂交种（杂种优 势固定）、雄株（石刁柏，芦笋）、三倍体无籽西瓜、
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
3. 快繁的一般步骤：
④ 试管苗的出瓶种植与苗期管理：
（ 壮苗培养；开口锻炼；选择介质；逐步过渡） 壮苗培养；开口锻炼；选择介质；逐步过渡 ） • 水分平衡 • 介质适宜（水培、固培） 介质适宜（水培、固培） • 养分充足 • 防止菌类 • 光温合适
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
2. 脱毒原理： •
热处理：使病毒钝化，可在活体进行，如香石竹在 ：使病毒钝化， 可在活体进行，
38度处理2个月可消除茎内所有病毒； 38度处理2
•
茎尖培养：病毒在体内的分布不均匀，顶端分生组 ：病毒在体内的分布不均匀，
织一般不含病毒（ 维管系统缺乏、 细胞分裂速度快、 织一般不含病毒（ 维管系统缺乏、 细胞分裂速度快、 其他的抑制机制） 其他的抑制机制）；
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
3. 快繁的一般步骤：
① 无性繁殖系的建立： ② 试管苗中间繁殖体的增殖： ③ 试管苗的壮苗与生根： ④ 试管苗的出瓶种植与苗期管理：