光合色素分离： 剪取适当长度和宽度的滤纸条→ 用上行纸层析法 分离色素→ 启动剂：石油醚：丙酮：苯=10：2：1。 吸收光谱的测定：
光合色素的吸收光谱：取色素溶液 1 mL，加入丙酮 3 mL，摇匀后 在分光光度计上 400 到 700 nm 处每隔 10 nm 进行扫描。
各色素的吸收光谱：上述层析出的 3~4 种色素，分别剪下后溶于 3 mL 丙酮中，按上述方法扫描。
光合色素的提取：将植物叶片洗净并用滤纸洗干，取 1/2 片叶片， 放入研钵中并加入少许 CaCO3 和石英砂及 5 ml 丙酮，充分研磨，再 加入 10 ml 丙酮，研磨，静止片刻，上清液过滤于三角瓶中，待用。
观察荧光现象：与光线垂直的方向观察色素颜色。 光破坏作用：1ml 色素提取液于室内，1ml 于太阳光下，30min 后 观察颜色变化。 皂化反应：取一支试管，加入色素提取液 2.5ml，再加入 20%KOH 甲醇溶液 1ml，摇匀，再加入苯 2.5ml，轻轻摇动，沿试管壁慢慢加 入自来水 1ml，轻轻摇动后观察，注意观察整个过程颜色的变化。 取代反应：取一支试管，加入 3ml 色素，逐滴加入 50%醋酸直至 溶液变为黄褐色。倒出一半，加入少许醋酸铜粉末，酒精灯上加热， 与另一半比较颜色的差异。 （2）、光合色素的提取：将植物叶片洗净并用滤纸洗干，取 1/3 片叶片，放入研钵中并加入少许 CaCO3 和石英砂及 5 ml 丙酮，充分 研磨，再加入 10 ml 丙酮，研磨，静止片刻，上清液过滤于三角瓶中， 待用。
本科学生综合性实验报告
姓名 陈春梅
学号 134120072
学院 生命科学学院 专业、班级 生物科学 13 级 B 班
实验课程名称 植物生理学
教师及职称 李忠光
开课学期 2015 至 2015 学年 第二 学期
云南师范大学教务处编印
实 验 室 睿智三栋 实 验 时 间 周三下午 7-8 节 1、光合色素的提取、理化性质
离体叶绿素在有氧气和光照条件下，发生光氧化作用，结构遭到破坏，
形成加氧叶绿素等产物。
叶绿素是一种双羧酸酯，可以发生皂化反应。
叶绿素分子中 Mg2+与仆啉环结合不稳定，可以被 H+、Cu2+、Zn2+ 等离子所取代。
（2）、光合色素能溶于具有一定极性的有机溶剂，如丙酮、乙醇等。 不同光合色素的分子量、分子结构、极性、溶解度、支持物对它
L 尔吸收系数。故其单位为： mol.cm
4、实验方法、步骤及现象 （1）、光合色素的提取：将植物叶片洗净并用滤纸洗干，取 1/2
片叶片，放入研钵中并加入少许 CaCO3 和石英砂及 5 ml 丙酮，充分 研磨，再加入 10 ml 丙酮，研磨，静止片刻，上清液过滤于三角瓶中， 待用。 方法及步骤
2、试论述高等植物光合色素的种类和生理功能
结果与讨论
1、根据原理中计算出三类色素的浓度（mg / L）。
2
C V
Chl = 分别计算出各种植物叶片色素含量。
思考题
1、一般正常的植物叶片，Chla / Chlb = 3 / 1，你所测定的结果
Ca = 12.7 A663 – 2.69 A645；Cb = 22.9 A645 – 4.68 A663
Ca+b = 8.02 A663 + 20.20 A645
A663 = Ca.ka1 + Cb.kb1 A645 = Cb.kb2 + Ca.ka2
由于 k 是一个常数，而 A 可以通过
分光光度计测出，故求二元一次方程组可得到此公式。
k——比吸收系数。即溶剂和波长不变的情况下，当物质的浓度(C)为
1g/L(0.1%)，比色皿的直径(光径，L)为 1cm 时所测出的吸光度即为比
L 吸收系数。故其单位为： g.cm
ε ——摩尔吸收系数。即溶剂和波长不变的情况下，当物质的浓度(C) 为 1mol/L，比色皿的直径(光径，L)为 1cm 时所测出的吸光度即为摩
（3）、方法一：快速测定法 由于叶绿素 a、b 在 652nm 处有共同吸收，k = 34.5 L g-1. cm-1。
可直接用便携式叶绿素测定仪测定植物叶片的叶绿素含量，最后浓度 单位为 mg/dm2
方法二: 分光光度计法 色素提取：将上述植物叶片洗净并用滤纸吸干，准确称取已知Φ 的叶 圆片 0.05g 左右，加入少许 CaCO3 和石英砂及 80%丙酮 2ml，充分研 磨，转入离心管中（离心机使用），再用 5ml 80%丙酮洗研钵，转入 离心管中，平衡，5000rpm 离心 10min, 记录上清液体积，取 1ml 稀 释到 4ml。 测定：以 1cm 比色皿分别测定 A663、A645。使 A 控制在 0.1 ~ 0.8 之 间。 结果与讨论
实 验 名 称 2、分离、吸收光谱及含量的测定 3、光合色素含量的测定
1、实验目的 1、掌握光合色素的提取方法以及了解有关的理化性质。 2、掌握光合色素的分离方法以及了解有关的吸收光谱。 3、掌握用分光光度计测定叶绿素含量的方法。
2、实验仪器及试剂 材料：小桐子叶片、植物叶片
3、实验原理 （1）、光合色素能溶于具有一定极性的有机溶剂，如丙酮、乙醇等。 提取液中无任何电子受体，因此可以观察荧光现象。
1、认真记录观察到的结果（颜色变化？分几层？为什么？），并 加以讨论。
思考题
1、为什么在皂化反应中只能用 20%KOH 甲醇溶液，而不能用
20%KOH 水溶液？
结果与讨论
1、画出你的层析结果，并加以分析。
2、总光合色素和各光合色素的吸收光谱有何不同，为什么？
思考题
1、光合色素的吸收光谱对我们理解光合作用有何意义？
们的吸附力等不同，因而分配系数不同，故彼此可以分开。
叶绿素的卟啉环结构对光有很强的吸收，主要是红光和蓝紫光。
（3）、混合液中的两个或多各组分，只要它们的光谱吸收峰不互相 重叠，仍然可以根据 Lambert-Beer 定律（A = k L C）求出各组分含量。 Lambert 定律：A = k L；Beer 定律 A = k C。叶绿素 a、b 在 80%丙酮 溶液中的 Amax 分别为 663nm、645nm，由此得出：见推导过程