人封闭抗体（BA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
特异性：本试剂盒可检测人封闭抗体（BA），且与其他相关抗体无交叉反应。
有效期：6个月
预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中封闭抗体（BA）含量。
说明
1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
试剂盒组成及试剂配制
1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。
2.酶结合物（Conjugate）：2×6ml/瓶。
3.样品稀释液（Sample Diluent）：2×6ml/瓶。
4.阳性对照（Positive Control）：1×0.5ml/瓶。
5.阴性对照（Negative Control）：1×0.5ml/瓶。
6.底物溶液A（Substrate A）：1×7ml/瓶。
7.底物溶液B（Substrate B）：1×7ml/瓶。
8.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。
9.终止液（Stop Solution）：1×7ml/瓶。
需要而未提供的试剂和器材
1.标准规格酶标仪
2.高速离心机
3.电热恒温培养箱
4.干净的试管和Eppendof管
5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器
6.蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或室温过夜后于1000x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔，不加任何溶液；设阴性对照孔2孔，加阴性对照100μl；设阳性对照孔2孔，加阳性对照100μl；余孔加100μl样本稀释液，然后直接加待测样本5μl。
注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃放置30分钟。
2.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。
3.每孔加酶结合物100μl（空白孔除外），充分混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃放置20分钟。
4.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。
5.依序每孔加底物溶液A和B各50μl，37℃避光显色10分钟。
6.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
终止液的加入顺序应尽量与底物液的加
入顺序相同。
为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
7.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。
在加终止液后15分钟以内进行检测。
注：
1.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。
测量时先用此孔调OD值至零。
3.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。
5.建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。
根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
1.目测法：比临界对照显色深的样本为阳性，比临界对照显色相同或显色浅的为阴性。
2.酶标仪测定：判断值（OD值）=阴性对照平均OD值×2.1，样品OD值大于判断值为阳性，小于等于为阴性。
阴性对照平均OD值小于0.05时，按0.05计算。
注意事项
1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3.一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。
5.在配制检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
6.底物请避光保存。
7.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。