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辛酸硫酸铵纯化方法

所需溶液配制:
1.0.06mol/L pH=4.8醋酸盐缓冲液:无水醋酸钠0.29g,冰醋酸0.141mL,纯水定容至100mL。

2.2mol/L氢氧化钠溶液:16g氢氧化钠固体用于200ml纯水中。

3.2mol/L盐酸溶液:取33m L36.4%的浓盐酸定容至200mL纯水中。

4.0.1mol/L PBS缓冲液:80.0 NaCl,KCl 2.0g,Na2HPO4· 12H2O 29.0g,KH2PO4 2.0g,
加超纯水定容至1L。

单克隆抗体采用辛酸-硫酸铵方法纯化,具体步骤如下:
(1)将腹水从-20°C冰箱拿出室温解冻。

腹水用双层滤纸过滤,初步除去杂质、脂肪及细胞碎片。

4°C,12000r/min,离心15min,收集上清,弃沉淀。

精确定量腹水体积。

(2)一份体积的腹水与2-4份体积的醋酸盐缓冲液磁力搅拌混匀,用2mol/L HCL 调PH至4.5-4.8。

(3)磁力搅拌下缓慢加入正辛酸,33μL/mL腹水,加完后室温磁力搅拌半小时,后置4°C静置2h以上。

(4)4°C ,12000r/min,离心5min,收集上清,双层滤纸过滤,收集滤液。

(5)量取滤液体积,加入1/10体积的0.1M pH=7.4 的PBS,用2mol/L NaOH(记录NaOH 体积)调pH至7.4。

(6)将上清冰浴预冷,加硫酸铵固体至0.277g/mL,边加边搅拌,并于30min内加完,置4°C过夜。

(7)12000r/min,离心15min,弃上清。

用一定体积的0.01mol/LPBS溶解沉淀。

用PB 透析两天后换0.01mol/LPBS 透析两天。

收集透析液,12000r/min,离心15min,取上清,置-20°C预冻后真空冻干成粉保存。

张道宏师姐版本:用1/10原腹水体积的0.01mol/L pH值7.4 PBS溶解沉淀;对0.01mol/L pH值7.4的PBS透析一天,离心去掉不溶杂质,用纯水进行透析,优球蛋白析出后离心收集澄清抗体溶液,置于-20°C预冻;冻干保存。

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