第 二 讲 免疫器官的观察与 免疫细胞的分离
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实验目的
掌握小白鼠的捉拿与处死方法 掌握免疫细胞分离的方法及其效果的判断 熟悉血细胞计数板的构造及使用方法
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免疫器官的观察
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【实验结果】
细胞计数
• 随机计数100个细胞，并数出其中活细胞 数
结果计算
• 细胞活力＝活细胞数／细胞总数 × 100%
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实验操作录像
实验报告
实验原理
实验方法
实验结果及分析
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【台盼兰拒染法原理】
活细胞 死细胞
通透性 死细胞 高
着色 易
颜色 蓝
体积 大
活细胞
低
难
无色
小
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注意事项
脾脏去净筋膜，弃边缘，取其中间部分 研磨时不可用力过大，时间不宜过长 染色时间不宜过长或过短 血细胞计数板的使用方法（10倍镜、暗 视野）
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粒细胞 红细胞
离心前
离心后
密度梯度离心法
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淋巴细胞及其亚群的分离
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抗原肽-MHC 分子四聚体技术
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小白鼠的抓取和固定
通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠 笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前挣 扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双 耳及颈部皮肤，翻转后将小鼠置于左手 掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾 部，即可将小鼠完全固定。
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小白鼠的抓取和固定
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小白鼠的抓取和固定
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小白鼠的处死方法
颈椎脱臼法：用拇指和食指用力往下按住 鼠头，另一只手抓住鼠尾，用力稍向后上 方一拉，使之颈椎脱臼，造成脊髓与脑髓 断离，动物立即死亡。
【实验步骤】
1. 颈椎脱臼法处死小白鼠，取其脾脏 2. 将脾脏放入适量（约15ml）生理盐水 中，除去筋膜 3. 取绿豆大小的脾脏，用玻片研磨制成 10ml细胞悬液 4. 取１ml细胞悬液于试管中，加入１滴 台盼蓝染液 5. 混匀后静置3分钟，低gy
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小白鼠的处死法（颈椎脱臼法）
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倒 T 字开腹
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小白鼠脾脏
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小白鼠脾脏
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小白鼠脾脏
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小白鼠胸腺
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小白鼠胸腺
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【实验器材】
小白鼠
手术器械，解剖台,血细胞计数板, 显微镜 0.2％的台盼蓝染液
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免疫细胞种类
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免疫细胞分离技术
花环沉降法 密度梯度离心法 抗原肽-MHC分子四聚体技术 荧光激活细胞分选仪分离法 免疫吸附分离法 磁珠分离法
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外周血单核细胞的分离
稀释抗凝血
血浆 单个核细胞
淋巴细胞分离液
血细胞记数板
细胞计数池
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血细胞计数池的构造
白细胞计数区：
无效计数区
红细胞计数区：
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【计数原则】
计左不计右，计上不计下 1、
√ √ √ ×
2、“ S ”形随机计数
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