活菌计数法
滤前后的完 整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗 液过滤以润湿滤膜。油类供试品,其滤膜和 过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的 最大过滤效率,应注意保持供试品溶液及冲 洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤 后,若需要用冲洗液冲洗滤膜,每张滤膜每 次冲洗量不超过100ml,总冲洗量不得超过 1000ml,以避免滤膜上的微生物受损伤。
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平板法
上述平皿法还可以将稀释的菌液取 0.2ml 加到已制备好的平板上,然后用无菌涂棒将 菌液涂布整个平板表面,放入适宜温度下培 养,计算菌落数,再按上公式计算出每毫升 原菌液的所含活菌总数。
薄膜过滤法
原理:将供试液通过已灭菌的膜过滤器。然后将滤 膜置于适宜培养基上培养,计算长出的菌落数。
操作:取相当于每张滤膜含1g、1ml 或10cm2 供试 品的供试液,加至适量的稀释剂中,混匀,过滤; 若供试品所含的菌数较多时,可取适宜稀释级的供 试液1ml 进行试验。用pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓 冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜。冲洗后取出滤 膜,菌面朝上贴于适宜培养基平板上培养。
每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿
菌落平均数×稀释倍数× 5
❖ 注意: 此法可因操作不熟练造成污染,或因 培养基温度过高损伤细胞等原因造成结果不 稳定。但由于该方法能测出样品中微量的菌 数,仍是常用的一种测定细菌数的有效方法。 细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此 法测定。但不适于测定样品中丝状体微生物。
活菌计数法
活菌计数的方法
❖ 平皿法 ❖ 平板法 ❖ 薄膜过滤法 ❖ 比浊法
平皿法
原理:每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条 件下可以通过生长形成菌落。
操作:将待测样品经一系列 10 倍稀释,然后选择 三个稀释度的菌液,分别取 0.2ml 放入无菌平皿, 再倒入适量的已熔化并冷至 45℃ 左右的培养基, 与菌液混匀,冷却、待凝固后,放入适宜温度的培 养箱或温室培养,长出菌落后,计数,按下面公式 计算出原菌液的含菌数:
比浊法
原理:在一定范围内,菌的悬液中细胞浓度与浑浊 度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越 大。因此可以借助于分光光度计,在一定波长下, 测定菌悬液的光密度,以光密度(OD值) 表示菌量。 操作:取适量供试液于适宜液体培养基中培养24h, 在一定波长下,用分光光度计测定菌悬液的光密度。 注意:实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成 正比的线性范围内,否则不准确。