常用的免疫胶体金检测技术
（1）免疫胶体金光镜染色法
细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以 银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的 敏感性。免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切 片结合，然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。
cobas h 232 检测原理及操作培训
上海亦扬医疗器械有限公司 罗氏血气分析仪
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Contents
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POCT简介
cobas h 232检测原理介绍
主要竞争对手及检测原理介绍
“在中心实验室以外进行的检验"
POCT 特点
中心实验室
商业实验室 检验科 监护室 手术室 急诊 时间：即时 地点：在患者床边 人物：医护人员，患者本人及家属等
COBAS and LIFE NEEDS ANSWERS are trademarks of Roche
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内部因素
•测试条性能：芯片、条码和保存条件 保存2-8℃/室温下1周/撕开15min
•环境：是否处于水平、无震的平面
•机内反应温度：一般37℃
•机内检测光源 •反应时间
cobas h 232检测原理
操作步骤
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POCT简介
cobas h 232检测原理介绍
POCT的主要技术包括： •简单显色（干化学法）技术 •多层涂膜（干化学法）技术 •免疫金标记技术
•免疫荧光技术
•生物传感器技术 •生物芯片技术 •红外和远红外分光光度技术
•2 2
POCT简介
cobas h 232检测原理介绍
主要竞争对手及检测原理介绍
废液池
免疫荧光法
Response 瑞普
胶体金法/双向侧流免疫法
深圳瑞莱
免疫胶体金法
免疫荧光法
美德声 德帕斯
深圳 微点
南京 普朗
广州 万孚
Thank you for your attention
Roche Diagnostics (Shanghai) Limited Shanghai 200031 China
信号线显色
免疫胶体金抗体 结合质控线
质控线显色
synth. petide
质控线
streptavidin
没有结合的抗体 与信号线结合
信号线不显色
信号线
膜
醋酸纤维膜层
加样区
反应区
检测区
cobas h 232检测原理
影响抗原抗体反应的因素
外部因素
•温度：18° C 至32° C室温下 •湿度：10%至85%的相对湿度
转移至 电极;标 结合 记后免疫 电化学发光技术 复合物与 磁珠 游离组分 分离
施加电压 启动化学 发光反应
信号检测
酶联免疫荧光标记技术
梅里埃 Vidas
化学发光分析技术
Beckman Access 2
双抗体夹心法
时间分辨荧光法
AQT90 FLEX快速免疫分析仪采用时间分辨荧光法检测捕捉抗体、 铕螯合物标记的荧光示踪剂抗体及有关抗原间形成的三明治复合体
加样区
反应区
检测区
cobas h 232检测原理
以NT-proBNP为例
反应
识别NT-proBNP的抗体
玻璃纤维膜
免疫胶体金抗体 双抗体夹心复合物
血浆
血浆
双抗体夹心复合物随 血浆过滤到下一层
玻璃纤维膜层
加样区
反应区
检测区
cobas h 232检测原理
以NT-proBNP为例
检测
双抗体夹心的抗原抗体复 合物 与信号线结合
医生期待时间
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POCT带来了哪些优点？
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POCT的检测技术
POCT的基本原理是：把传统方法中的相关试剂浸润于试纸和各种微孔膜的吸水材 料中，成为整合的干燥试剂块，然后将其固定于硬质基质上。成为各种形式的诊断 试剂条；或把传统分析仪器微型化，操作方法简单化，使之成为便携式和手掌式的 设备，或将上述两种整合为统一的系统。
• 即时报告
• 结果稳定具有可比性
• 成本低
• 采血量少
TAT (Turn Around Time) 的现状
危重疾病需要快速的测试结果，以便减少治疗的延误
ESC指南建议：POCT可缩短TAT，60min内中心实验室无法获 得检测结果的，建议使用POCT。
NACB指南指出：样本周转时间需要快速，建议 cardiac TAT 60 实际样本检测时 间 min，最好是30min或更少。 检验人员估计时间
检测原理
测试速度 试剂通道 定标类型 样本位 样本类型 自动探测 操作界面
电化学发光免疫检测技术
86个测试/小时 18个 二维码定标、2点定标 30个样本位（盘式系统） 75个样本位（架式系统） 血清、血浆、尿液、其他 液面、气泡、凝块 中文操作界面
架式
盘式
电化学发光检测原理
结合 Ruthenium
胶体金免疫层析法
相关概念
胶体金标记物
抗原抗体反应： 每个抗体结合特定抗原
双抗体夹心法
cobas h 232检测原理
以NT-proBNP为例
加样
全血
proBNP
含有NT-proBNP的血样
测试片
识别NT-proBNP的抗体
M7 biotin biotin
gold
M117
gold
免疫胶体金抗体
包被好抗体反应膜层
POC
医生诊所 社区诊所
家庭
医院
医生 / 社区 诊所
家庭
快速诊断
有效诊断
便捷诊断
实验医学向“两极”发展的趋势
中心实验室-高大上
• 高分析速度
• 高自动化程度
• 高智能化水平
• 高精密度分析结果
• 大型化
• 上档次
4
实验医学向“两极”发展的趋势
POCT—小快简
• 仪器小型便捷
• 非专业人员简单操作
（2）斑点免疫金渗滤法
应用微孔滤膜（如膜）作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体 金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。
（3）胶体金免疫层析法
将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结 合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的 胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合 物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察或者仪器光源检测得到 显色结果，从而得到待测物的检测值。
主要竞争对手及检测原理介绍
心机标志物市场分布
自动化检测设备采用的技术
酶联免疫 荧光免疫 化学发光
电化学发光
放射免疫
1960‘S
1970~80‘S
2000‘S
免疫检测原理未变，依旧利用抗原与抗体的特异性结合；改变的只是标记物的种 类以及相应的检测方法和手段。
cobas e 411电化学发光全自动免疫分析仪
AQT90 FLEX快速免疫分析仪光电倍增管可计算铕螯合物射出的光 量子（光粒子）的数量。血液中抗原的浓度与标记示踪抗体产生的 荧光水平成正比。
雷杜 AQT90
免疫荧光法
Biosite Triage 诊断仪测试板条原理平面图
加样孔 滤膜 反应池 第二次包被 （第一次 抗原抗体包被） （荧光信号产生 ）