第六章 植物离体快繁殖
一、植物离体快繁的意义 二、离体快繁的方法 三、离体快繁中存在问题 四、几种植物的离体快繁技术
一、植物离体快繁的意义
1.植物繁殖类型
植物 繁殖
有性 繁殖
无性 繁殖
扦插
嫁接
常规无性繁殖
压条 分株
埋条
非试管快繁
在计算机控制环境条件下 的快繁技术（如扦插）
离体快繁 植物组织培养
一、植物离体快繁的意义
• 强度：光照弱，易产生玻璃化现象。
三、离体快繁中存在问题
• 4）琼脂浓度低：
• 培养基中琼脂浓度低时玻璃化苗比例增加，
水浸状严重，苗向上长。随着琼脂浓度的 增加，玻璃化苗比例减少。 • 但过硬的培养基影响了养分的吸收，试管 苗生长减慢，分蘖亦减少。因此，琼脂的 浓度一定要适当。
三、离体快繁中存在问题
三、离体快繁中存在问题
•2.褐化：外植体接种到培养基中后，外植体 或与培养基接触部位出现变褐色的现象。
•褐化后果：不加以控制，外植体会死亡。 •引起原因：切割后，使液泡中的多酚物质与细胞质 中多酚氧化酶接触发生反应，产生有毒的醌类物质。 •在自然界中，褐化（多酚物质与多酚氧化酶反应） 是主动防御机制，防止病原菌感染的自卫措施。
• 2.茎芽增殖途径：在培养过程中使其产生大 量无根试管苗。
•
侧芽增殖途径
• 途径有：不定芽增殖途径
•
体细胞胚增殖途径
• （增加 P105图8-1）
二、离体快繁的方法
• 2.茎芽增殖途径：在培养过程中使其产生大 量无根试管苗。
•
侧芽增殖途径
• 途径有：不定芽增殖途径
•
体细胞胚增殖途径
• （增加 P105图8-1）
胚乳或其 它外植体
体细胞胚
体细胞胚
• 体细胞胚，是由体细胞发育成的胚。胚由 受精卵发育而来，这在生物学中是大家所 熟知的，但实际上胚不一定从受精卵发育 来，尤其在植物界，往往可以看到未受精 的卵细胞或胚囊细胞、珠心细胞等发育成 胚的现象。严格地说，除卵以外的胚囊细 胞和珠心细胞等都应属于体细胞的范畴， 由体细胞发育成的胚就叫做体细胞胚。
• 2.快繁意义 • 1）繁殖系数高，速度快； • 2）解决其他繁殖方法不能繁殖的植物繁殖； • 3）结合快繁技术，对植物脱毒，得到无毒
种苗。 • 4）可以周年生产（工厂化生产）。
二、离体快繁的方法
• 分以下5个阶段： • A.无菌培养的建立： • B.初代培养： • C.继代培养和快速增殖： • D.诱导生根： • E.驯化移栽：
三、离体快繁中存在问题
•褐化防止措施 •1）取材母株处理：对取材植株避光或黑暗处理。 •2）切割合理：刀要锋利，动作要快，伤口尽量小。 •3）低温处理：接种后先在5℃条件下处理一段时间。 •4）培养基：选用1/2MS培养基，对有些植物有作用。 •5）改善培养条件：弱光或黑暗中培养会减少褐化。 •6）加防褐化剂：0.5-5g/L VC、0.5-3%活性炭等 •7）换培养基：连续继代培养出现褐化时，换新的培 养基，多数植物出现褐化换2-3次培养基，褐化明显 减轻。
• 产生玻璃化苗的细胞分裂素浓度因植物种 类的不同而异。。
三、离体快繁中存在问题
• 2）温度低：适宜的温度可以使试管苗生长 良好，当温度低时，容易形成玻璃化苗， 温度越低玻璃化苗的比例越高。温度高时 玻璃化苗减少，且发生的时间较晚。
• 3）光照不足：光照分强度和时间长短
• 时间：满足植物的光照时间，试管苗才能 生长正常。大多数植物在10～12h光照下 都能生长良好，光照时数大于15h时，玻璃 化苗的比例明显增加
三、离体快繁中存在问题
• 6）离子浓度失衡：
• 植物生长需要一定的矿物质营养，但是， 如果营养离子之间失去平衡，试管苗生长 就会受到影响。
• 植物种类不同，对矿物质的量、离子形态、 离子间的比例要求不同。
• 如果培养基中离子种类及其比例不适宜该 种植物，玻璃化苗的比例就会增加。
三、离体快繁中存在问题
三、离体快繁பைடு நூலகம்存在问题
• 3.玻璃化： • 概念：在植物组织培养过程中，出现一种
试管苗变成膨胀、半透明、易折断的畸形 现象。 • 特点：分化能力低，难以增殖生根成苗。
三、离体快繁中存在问题
• 玻璃化形成原因：因植物种类不同存在差 异，概括起来有以下几种情况；
• 1）激素浓度不合理：激素浓度过高，尤其 是细胞分裂素浓度提高(或细胞分裂素与生 长素比例高)，易导致玻璃化苗的产生。
二、离体快繁的方法
• 1.无菌培养的建立：整个实验过程要求在无 菌的条件下完成。
• 常存在问题： A.培养基灭菌不规范： B.无菌环境不达标： C.操作不规范：主要接种环节的无菌操作； D.外植体消毒失败：过长或过断 E.外植体选择（老嫩）、切（刀不锋利）、接（极 性不对）不科学：
二、离体快繁的方法
•防止玻璃化的措施
•1）提高光照强度：因植物种类不同而异； •2）加强通气：用大瓶、增加透气性； •3）用质量好琼脂：琼脂条用水浸泡24 h;除去某些离 子，如Ca2+、Mg2+ 、 Z2n+ 、C2u+ 、F2+e 。 •4）调整离子浓度：适当减低NH2+4 浓度，提高C2+a 浓度 •5）科学使用激素：种类、浓度； •6）控制温度：在高温季节，降低温度，控制在32℃ 以下，降低接种密度；
• 污染现象：外植体表面、周围或培养基中。 • 表现：霉变、浑浊、黏液状和发酵泡沫状。
三、离体快繁中存在问题
引起原因和解决途径见下表
引起原因
A 培养基灭菌不 彻底
B 消毒效果不好 C 接种操作不规
范
D 外植体有内生 菌
解决途径 查清原因、对症下药 时间、封闭、排冷气
消毒液种类，浓度、时间 环境、紫外灯、超净工作台工 作作态。接种器消毒、接种超 作规范程度等。 加抗生素、注意浓度及副作用
• 5）环境条件（生长空间小和气体交换差）
• 在一定容量的培养瓶内，愈伤组织和试管苗生长 越快，越容易形成玻璃化苗。
• 培养瓶容量小，气体交换不良，易发生玻璃化。 • 愈伤组织和试管苗长时间培养，不能及时转移，
容易出现玻璃化苗。 • 培养瓶盖过严透气性差易形成玻璃化。
其中棉塞、滤纸、封口纸、牛皮纸通气性较好，破 璃化苗的比例较低； 锡纸、用塑料膜封口时，不透气，影响气体交换， 玻璃化苗增加。
二、离体快繁的方法
• 3.影响芽增殖的因素 • A.植物种类：营养繁殖易成活的成功率高。 • B.外植体生理状态：生长旺盛时期取材易成功 • C.外植体消毒受害程度：时间、种类和浓度 • D.培养基配方、激素配比：
三、离体快繁中存在问题
• 培养过程中常出现的问题有以下4各方面 • 1.培养物污染：