生物素标记
1,向皿中加入2ml 1mg/ml的生物素试剂。

2,4℃，温和shaking30min，孵育后有一些细胞会悬浮起来，转移这些细胞至离心管中，离心收集细胞，并按下面方法洗涤细胞。

3，用2ml含0.1mM Ca+，1mM mg2+，100Mm Glycine的PBS清洗细胞2次，这时也会有一些细胞悬浮起来，转移它们到一个离心管，离心收集细胞。

4，加2ml含0.1mM Ca+，1mM mg2+的PBS到皿中。

5，4℃，45min停止未反应的生物素试剂的反应。

（使生物素试剂失活），并收集浮起来的细胞，离心收集细胞。

6，收集细胞：将皿中的细胞和浮起来的细胞转移进入一个1.5ml的离心管。

7，向1.5ml的离心管中加入1ml RIPA/lysis buffer。

（含蛋白酶抑制剂1table /50ml）8，4℃涡旋1h。

9,20000g,10min,4℃,以沉淀核酸与其他残渣。

10，把上清转入新的EP管，（这是总蛋白，T，一般情况下浓度应该在1-5mg/ml，可以用B radford method来测定浓度，并调整全部样品至同一浓度）
11，向300ul pre-cleared sample中加入300ul含50% slurry-Avidin beads的PBS,P I孵育。

（PI，蛋白酶抑制剂，的工作浓度0.1-1mM，17-174ug/ml）
12，室温涡旋1h。

（使生物素和亲和素充分结合）
13，离心除去beads，将上清转移至一新离心管中。

（这是位结合的蛋白质，浓度相对于总蛋白被稀释了1.5倍。

）
14，向beads中加入150ul 2×Laemmli buffer来将beads上的蛋白质洗掉。

（洗下来的蛋白浓度是总蛋白浓度的2倍）。