表 3. 不同采收期三七中三七素的含量 (n=3)
No 采收期 1 三月 2 四月 3 五月 4 六月 5 七月 6 八月 7 九月 8 十月 9 十一月
含量(%) 0.567 0.573 0.440 0.601 0.599 0.760 0.664 0.738 0.681
表 4. 不同规格三七中三七素的含量 (n=3)
6 文山乐诗冲 0.382 28
7 文山乐诗冲 0.390 29
8 文山乐诗冲 0.430 30
9
蒙自名就
0.523 31
10 蒙自名就
0.465 32
产地 马关大栗树 马关马白 马关马白 砚山阿猛 砚山阿猛 砚山者腊 砚山者腊 砚山干河 砚山江那 砚山郊址
含量(%) 0.599 0.448 0.479 0.498 0.489 0.589 0.571 0.567 0.525 0.481
21 马关八寨
0.328 43
22 马关大栗树 0.325 44
砚山盘龙 砚山盘龙 砚山盘龙 广南马街 广南马街 文山坝心 文山坝心 文山马塘 广西靖西 广西靖西 广西靖西 广东南雄
0.480 0.433 0.494 0.503 0.393 0.333 0.526 0.417 0.453 0.398 0.425 0.457
HPLC 法测定三七中三七素的含量
董婷霞 1 赵奎君 2 崔秀明 3 詹华强 1
1 香港科技大学生物技术研究所 香港九龙 2 北京军医学院 北京 100071 3 云南省 文山州三七研究所 云南文山 663000
三七为五加科植物三七 Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen 的干燥根 是著名的 云南 白药 的主要组成药物 具有较好的散淤止血 消肿止痛的功效 用于咳血 吐血 衄血 便 血 外伤出血等 其止血的有效成分为三七素 是一种特殊的氨基酸 1 因此 三七素是中药 三七质量评价的重要指标之一 有关三七素的含量测定仅见高效薄层扫描法 1 因易受实验条 件影响 误差较大 为更准确控制三七的质量 我们建立了三七素的 HPLC 含量测定方法 方 法简便 快速 稳定 可靠 同时 我们用该方法对不同产地 不同采收期 不同规格的三七 和三七的不同部位中三七素的含量进行了测定 以为三七的生产和质量评价提供科学的依据 1 仪器 试剂 样品 1 1 仪器 WatersTM600E 高效液相色谱仪 WatersTM2487UV 检测器 WatersTMMillennium32 色 谱工作站, BRNASON5200 超声仪 1 2 试剂 乙腈 HPLC 级, 甲醇 分析级 购自 sigma 公司 美国 , 标准品三七素
2
根茎
3
側根
4 纤状根
5
花
6 茎和叶
含量(%)
0.523 0.881 0.409 0.886 0.856 0.371
3.讨论 3 1 三七素是三七中能准确表达三七生物活性的重要有效成分之一 有关三七活性成分的含 量测定方法的研究 以往多集中在皂苷类成分上 而对三七素含量测定的研究却极少[1] 这很 不利于全面准确地评价三七的内在质量 本文中所建立的 HPLC 分析方法能快速 准确地测定 三七中三七素的含量 3 2 我们测定了产于云南 广西 广东的 44 件三七样品中的三七素含量 全国 90%的三七分 布在云南省文山州 其中又主要分布于文山 砚山和马关 3 县 因此 我们重点分析了文山 19 个样品 马关 6 个样品 砚山 10 个样品 结果表明 产地对三七素含量有一定的影响 其变 化幅度在 0.311%~ 0.615% 之间 但变化规律不明显 3 3 在不同采收期的三七中 三七素的含量以 8,9,10 三个月的含量较高 这和三七传统的采 收期是一致的 3 4 在不同规格的三七中 160 头和 200 头三七素的含量最高 其他规格含量变化不明显 说 明三七素的含量与三七传统的商品规格并不成正相关 3 5 对三七不同部位中三七素的含量测定表明 根茎 纤状根和花的含量均高于块根 说明 这些部位均有较高的开发利用价值 [参考文献] 1 郑虎占 董泽宏 佘靖. 中药现代研究与应用. 第一卷. 北京 学苑出版社 1997. 202~206.
11 蒙自老寨
0.512 33
12 文山老回龙 0.557 34
13 文山平坝
0.449 35
14 文山平坝
0.405 36
15 文山平坝
0.407 37
16 文山新街
0.311 38
17 文山新街
0.615 39
18 文山小街
0.390 40
19 文山小街
0.373 41
20 马关浪桥
0.385 42
dencichine 由云南白药研究所高崇昆研究员惠赠 1 3 样品 不同采收期: 三年生三七 3 月至 11 月采收, 每月采收一次 不同产地 在三七采收 期分别于云南文山 砚山 马关 广西靖西 广东华雄采收 不同规格 于云南文山同一地块 采收 所有样品均采收 30 株 清洗干燥后分别取根 根茎等药用部位粉碎过 80 目筛备用 实 验样品均经过崔秀明研究员鉴定 2 实验部分 2 1 色谱条件 分析柱 WatersTM Carbolydrate Caryridge Column C18 (5.9 150nm) 流动相 95%缓冲液 A (0.001% 醋酸)- 5% 缓冲液 B (46% 乙腈 10% 甲醇 46%水) 流速 1.0ml/min; 检测波长 213 nm;柱温 室温 2 2 稳定性考察 精密称取三七素对照品 1.0 mg, 用水溶解定容于 1 mL 容量瓶中 在 1 d 内重 复进样 5 次 按上述色谱条件进行测定 结果峰面积积分值的平均值为 34250670 其 RSD 为 0.95% 结果表明三七素在 24 小时内稳定性良好 2 3 线性关系考察 精密称取三七素对照品 1 mg 加水定容于 1 ml 容量瓶中 精密吸取 10.0, 30.0, 50.0, 70.0, 90.0 µL 进样 按上述色谱条件测定峰面积积分值 以三七素量为纵坐标 峰面 积积分值为横坐标 绘制标准曲线 计算回归方程 Y = 2.8 10- 7 X + 0.0072, r = 0.9996 实验 表明三七素在 10.0 ~ 90.0 µg 具有良好的线性关系
No 规格 1 20 头 2 30 头 3 40 头 4 60 头 5 80 头 6 120 头 7 160 头 8 200 头
含量 (%) 0.647 0.611 0.627 0.603 0.540 0.492 0.702 1.175
表 5. 不同部位三七中三七素的含量(n=3)
No 部位
1
块根
样品中量 /mg 0 4925 0 4951 0 4934 0 4960 0 4929
加入量 /mg 0 2250 0 2250 0 2250 0 2250 0 2250
表 1. 三七素加样回收率试验结果
测得量
回收率
平均值
/mg
/%
/%
0 2189 97 3
0 2196 97 6
0 2279 101 3
98 22
0 2207 98 1
0 2178 96 8
RSD /%
1.82
表 2.不同产地三七中三七素的含量 n=3
No
产地
含量(%) No
ห้องสมุดไป่ตู้
1 文山追栗街 0.478 23
2 文山莲花塘 0.490 24
3 文山莲花塘 0.434 25
4 文山乐诗冲 0.537 26
5 文山乐诗冲 0.541 27
2 4 精密度实验 精密吸取上述对照品溶液 重复进样 5 次 测定 三七素峰面积积分值的平 均值为 34221870 其 RSD 为 0.85% 2 5 重复性实验 取相同的样品 5 份 精密称定 按供试品溶液制备方法制备样品溶液 按上 述色谱条件测定 平均含量为 0.49 %,其 RSD 为 1.75% 2 6 回收率试验 采用加样回收法 取已知含量的样品分别添加三七素对照品 按样品制备方 法制备供试液 按上述色谱条件进行测定 计算回收率 结果见表 1 2 7 供试品溶液的制备与测定 取各样品粉末约 5g 精密称定 置具塞三角瓶中 精密加水 25ml 称定重量 超声提取 60 min,放冷 再称定重量 加水补足减失的重量 摇匀 以 4000 rpm 离心 5min,收取上清液 用 0.2 µm 滤膜过滤 取续滤液加水适量 调整三七素浓度至线 性范围内 进样 20µL, 测定峰面积积分值 用外标法根据峰面积积分值计算三七素的含量 结 果见表 2,3,4 5