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Chinese Journal of Clinical M edicine, 2010 . Vo l. 17 , No. 1
中国临床医学
2010 年 2 月
第 17膜中的表达
赵 栋1 黄诗颖2 翁 雷1 孙 静1 ( 1. 同济大学附属上海市第一妇婴保健院妇科 , 上海 200040; 2. 复旦大学药学院药理教研室 , 上海 201203)
中国临床医学
2010 年 2 月
第 17 卷
第1期
Chinese Journal of Clinical Medicine, 2010. Vol. 17, No. 1
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膜病灶, 在位内膜及正常对照组的在位内膜的基质 细胞和腺上皮细胞均不表达 , 仅有部分血管内皮细
胞表达 ER - ( 图 1) 。
1
2
Key Words
Endometriosis;
Estr og en r eceptor
子宫内膜异位症是一种常见的复杂妇科疾病 , 发病机制尚不明确, 主要临床表现 是疼痛及不孕。 子宫内膜 异位症在正常 妇女中发病率 为 0. 5% ~ 5% , 而在 患不孕 症的妇 女中高 达 25% ~ 45% [ 1] 。 [ 2] 有研究 表明子宫内膜的基质和腺体细胞主要表达 雌激素受体 ( ER - ) , 而对于子宫内膜是否表达雌 激素受体 ( ER - ) , 研究结果并不一致。本研究应 用 RT- P CR 以及免疫组化法测定 ER 在异位内膜 及在位内膜的表达情况。 1 资料与方法 1. 1 标本来源 收集 2008 年 7 月 2008 年 12 月 同济大学附属上海市第一妇婴保健院进行手术治疗 的子宫内膜异位症患者异位及其 在位子宫内膜 标 本, 常规 4% 甲醛固定 , 石蜡包埋。收集异位内膜标 本 15 例, 对应增生期在位内膜 12 例, 分泌期在位内 膜 3 例, 患者年龄 23~ 41 岁, 平均年龄 35 岁。选择 同期因宫颈病变行全子宫切除患者的子宫内膜 15 例作为对照, 增生 期 10 例 , 分泌期 5 例, 患者年 龄
基金项目 : 上海市青年科技启明星计划 ( 08QA1407000) 通讯作者 孙 静 , E - mail: sunjing61867@ yahoo . com. cn
36~ 49 岁 , 平均年龄 45 岁。所 有患者月经周期规 律, 术前半年之内未接受激素治疗 , 术前签署知情同 意书。 1. 2 逆转录聚合酶链式扩增 采用 T rizol 法制备 总 RN A, 制备的 RNA 样品用核酸定量分析仪检测 OD260、 OD260/ OD280 的 值, 并 计算 RNA 产 量。 所用 T rizol 试剂 购自 GIBCO 公司, 逆转 录试剂盒 购自 Pro mega 公司。 1. 3 免疫组织化学染色 主要步骤包括 5 m 切 片, 脱蜡水化, 抗原 修复, 封闭 内源性过氧化 物酶。 一抗为小鼠抗人 ERb( Serot ec, U K) , 二抗为连接生 物素的马抗小鼠抗体 ( Vect or L ab, CA ) , 非特异性 的小鼠 IgG 作为阴性对照, 已知阳性的卵巢组织作 为阳性对照。 2 结 果 2. 1 逆转 录聚 合酶 链式 扩 增 组织 的 OD 260/ OD280 在 1. 8~ 2. 0, RNA 的纯度 高, 同时得 到总 RNA 的浓度; 紫外灯下 28S 、 18 S 带清晰 , 5S 带模 糊, RNA 的完整性好。在位及异位内膜组织中 ER m RNA 阳性表达率均为 100% 。 2. 2 免疫组化 ER - 在内膜异位症患者的异位内
图1
A 正常卵巢组织 ( 阳性对照 ) B 对照组子宫内膜 C 子宫内膜异位病灶 D 内膜异位症患者的在位子宫内膜
3 讨 论 子宫内膜异位症是一种雌激素依赖性的疾病 , 雌激素可以刺激异位内膜细胞的增殖, 是内膜异位 [ 3] 病灶形成的必要条件之一 。 ER - 激动剂在小鼠 子宫内膜异位症模型中可有效治 疗子宫内膜异 位 症, 使得研究者对于 ER - 在子宫内膜细胞中的作 用产生极大的兴趣。因为雌激素作用绝大多数是通 过受体介导的, 所以要了解这种新的雌激素受体在 子宫内膜异位症的作用, 首先必需了解 ER - 在子 宫内膜组织中的分布情况。有关 ER - 在子宫内膜 中及内膜异位病灶的表达 , 虽有相关报道, 但结果不 一[ 4- 5] 。分析其原因主要是试验试剂及试验方法的 不同。有些学者用流式细胞技术检测雌激素受体 , 首先细胞在制备过程中生化特性可能发生改变 ; 其 次, 流式细胞技术主要用于检测细胞表面抗原 , 而且 雌激素受体为核蛋白 , 抗体要与细胞结合, 必须破坏 核膜 , 或者用注射器将抗体注入细胞核内同时固定 , 所以用流式细胞技术研究核蛋白 在方法上面值 得 商榷。 本研究用 RT- PCR 法探测 15 例子宫内膜异位 症患者的在位及异位内膜以及 15 例非内膜异位症 患者的子宫内膜 , 结果显示内膜异位症组及对照组 均表达 ER - mRNA 。免疫组化法测定正常组及对 照组子宫内膜蛋白质分布结果显示子宫内膜基质细 胞及腺上皮细胞的细胞核中均无 ER - 蛋白表达 , 只有血管内皮细胞表达 ER - 。本试验采用小鼠抗
摘要 目的 : 研究雌激素受体 在子宫内膜以及子宫内膜异位灶中的表 达 。 方法 : 用反转录 聚合酶链式 扩增以及 免疫组化法 测定在位及异位子宫内膜组织中雌激素受体 mR NA 以 及蛋白 的表达 。 结 果 : 在 位及异 位子宫 内膜都 探测到 雌激素 受体 mRN A, 而在位及异位内膜 用免疫组化法均未 探测到雌激素受体 蛋白 。 结 论 : 在位 及异位子宫内膜组织 不表达雌激素受体 蛋白 。 关键词 子宫内膜异位症 ; 雌激素受体 中图分类号 R392 文献标识码 A
The Expression of Estrogen Receptor in Human Endometrium ZH A O Dong H UA N G S hi y ing WE N 1 1 L ei S UN J i ng 1. Dep ar tment of M inim al I nv asi ve Surg ery , Shanghai Fi rst M at ernit y and I nf ant H osp i tal, S hanghai 200040, Chi na; 2. S chool of Phar macy , Fudan Uni ver sit y , Shanghai 201203, Chi na Abstract Objective: T o investig ate the distr ibut ion o f estr og en receptor ( ER - ) in the human endometr ium and endo metrio sis lesions. Methods; Both eutopic and ectopic endometr ium was ex amined fo r the mRN A and pr otein ex pr ession o f ER - with RT - P CR and immuno histochem istry . Results: ER - mRN A w as present in both euto pic and ecto pic endometr ium; Ho wev er, pr otein ex pression w as absent in both st roma and epithelium. Conclusion: T hese r esult s sug gest that the ER - pro tein is no t ex pressed in the human endo met rium.
人的单克隆抗体具有极高的特异性 , 使用非特异独 特型抗体作为阴性对照有效地排除假阳性 , 结果直 观、 真实、 可靠。 特异性 ER - 激动剂在小鼠模型中可有效治疗 包括子宫内膜异位症在内的一些炎性疾病 , 目前正 在进行人类的临床研究。而子宫内膜及异位内膜的 细胞核中很可能无 ER - 存在 , 所以, ER - 激动剂对 于子宫内膜异位症的治疗作用可能为非受体依赖性 的。它可能是通过影响细胞增殖、 自然凋亡、 免疫系 统、 新生血管形成、 或者下丘脑 - 垂体 - 卵巢轴等起的 作用 , 不过这还需要进一步研究加以验证。 参考文献