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化学发光酶免疫分析(CLEIA)属酶免疫分析，只是酶
反应的底物是发光剂，操作步骤与酶免分析完全相同 ：以酶标记生物活性物质进行免疫反应，免疫反应复 合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发 光，用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标 记酶为辣根过氧化物酶(HRP )和碱性磷酸酶(ALP)，它 们有各自的发光底物。
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化学发光反应两个关键步骤：化学激发和发光。
故化学反应要成为发光反应，必须满足两个条件： 1.反应必须提供足够的能量（ 170 ～ 300KJ ／ mol ）； 2. 这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电
子激发态，并且有足够的光量子产率。
发光效率：指发光剂在反应中的发光分子数与参 加反应的分子数之比。一般化学发光反应，值约 为 10 － 6
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化学发光技术
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概念：某些化合物分子吸收化学能后，被激发 到激发态，再由激发态返回至基态时，以光量 子的形式释放出能量，这种化学反应称为化学 发光反应，利用测量化学发光强度对物质进行 分析测定的方法称为化学发光分析法。
化学发光与其它发光分析的本质 区别是体系产生发光( 光辐射) 。 所吸收的能量来源不同。
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常见化学发光剂 直接：吖啶酯类 三联吡啶钌 间接：酶促化学发光剂
（辣根过氧化物酶---鲁米诺及其衍生物， 碱性磷酸酶----AMPPD） 酞箐，二甲基噻吩衍生物等（活性氧）
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425nm
条件： 碱性PH8.6 催化剂： 辣根过氧化物酶，氧化血红素等 氧化剂：过氧化氢，高锰酸钾，碘等 量子产率：0.05----0.15 应用： 检测血迹
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3.过碘酸钠氧化法
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化学发光免疫分析技术 CLIA
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上世纪70年代中期Arakawe首先报道CLIA
是目前发展和推广应用最快的免疫分析方法 也是目前最先进的标记免疫测定技术
优点：灵敏度高、特异性强、试剂价格低廉 、试剂稳定且有效期（6-18个月）、方法稳 定快速、检测范围宽、操作简单自动化程度 高等
特点：1.属酶免疫测定范畴 2.酶标记抗原或抗体结合稳定 3.酶催化鲁米诺，AMPPD等发光剂发出的光稳 定，持续时间长，便于记录和测定
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电化学发光免疫分析（ECL)是指由电化学反应
引起的化学发光过程，反应在电极表面进行，发 光底物为三联吡啶钌[Ru(byp)3+2 ]，三丙胺(TPA)用 来激发光反应。在阳极表面，两种物质同时失去 电子。这一过程在电极表面反复进行，产生高效 、稳定的连续发光.，并不断增强。
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仪器系统组成及工作原理
1、产品结构 化学发光免疫分析仪，由检测系统（光电系统）、 计算机系统和打印机系统组成。 2、 工作原理 化学发光免疫分析仪是将血清样本，通过和试剂进 行化学发应发光，光经过光电系统读出光子数，通 过串口送入计算机，运用计算机软件对血清中得抗 原、抗体定量的检测分析、将图像及数据存储在计 算机中，并将结果打印出来，供临床诊断。
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特点：
1.三联吡啶钌在电场中因不断得到三丙胺提供的 电子，故发光持续时间长，信号强度稳定
2.三联吡啶钌可直接标记抗原或者抗体，不影响 标ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ物的理化性质
3.试剂灵敏度高，稳定性好
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化学发光免疫分析仪包含：免疫反应系统和化
学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学 发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一 个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定 的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测 量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光 物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标 记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发 光分析) 上, 或酶作用于发光底物。
化二铁的聚苯乙烯的小颗粒））首选
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化学发光免疫分析包括： 直接化学发光免疫分析 化学发光酶联免疫分析 电化学发光免疫分析
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直接化学发光免疫分析：用化学发光剂直接标 记抗体或抗原的一类免疫测定方法（吖啶酯类）
样本待 测抗原
抗体
吖啶酯
抗体
发 光
抗体
过氧化氢， 碱性环境
吖啶酯
样本待 测抗原
样本待 测抗原
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470nm
条件：碱性 氧化剂：过氧化氢 应用：标记半抗原和蛋白质 不需要催化剂
优点：背景发光低，干扰因素 少，发光效率高，易于蛋白质 联接，且不影响自身
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三联吡啶钌Ru(byp)3+2
电化学发光剂
可直接标记抗原抗体
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发光剂的常见标记技术 1.碳二亚胺缩合反应（酰胺键） 2.重氮盐偶联法
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化学发光免疫分析(CLIA)是将具有高灵敏度 的化学发光测定技术与高特异性的免疫反 应相结合。 应用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶 、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技 术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫 分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起 来的一项最新免疫测定技术。
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固相分离（板） 过滤分离（膜） 珠式分离（固相分离:材质(聚苯乙烯珠子）） 顺磁性颗粒分离（固相分离：材质（内含三氧