Ｓｍｉｒｎｏｖ ＩＶ，Ｋｏｔｃｈ阿。Ｐｉｅｋｅｄｎｇ ＩＪ，ｅｔ ｔｄ．Ｐｂ ＥＸＡＦＳ ｓｔｕｄｉｅｓ
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Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２。４１：１２１３３．１２１３９．
（收稿日期：２００８－０７－２８）
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ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｉ８ｐｌａｙｅｄ ｏｎ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ．Ｂｉｅｃｈｉｍｉｅ，２００６，８８：８９７·
９０４．
［８］ｓｔｏｌｔｅＩＩｂｕ瑁Ｒ，Ｒｅｉｎｅｍａｎｎ Ｃ，Ｓｔｍｈｌｉｔｚ Ｂ．ＦｌｕＭａｇ·ｓＥＬＥｘ∞∞
４．Ｂ淀粉样蛋白：脑内淀粉样蛋白斑块的形成和沉积是 老年性痴呆（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病）的病理特点，准确测量生物体液 中的淀粉样蛋白含量对该病的研究有重要意义。Ｓｚｅｋｅｒｅｓ
等¨¨建立的血清Ｂ淀粉样蛋白１加和１－４２ ＬＯＣＩ检测法灵
敏度＜２ ｐｇ／ｍｉ，且较ＥＬＩＳＡ分析方法更灵敏，适用于 Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病的早期诊断。
ｐｅｐｔｉｄｙｌ ｔｌ＇∞ｌｓｆｅｌｔ＇８８ｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｅｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｅｌ．Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ，１９９７，
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二、国内外研究现状和应用 光激化学发光技术应用广泛，涵盖蛋白质、多肽激素、酶 活性、核苷酸等领域，在受体／配体、蛋白质／蛋白质、蛋白质／ ＤＮＡ之间相互作用方面的研究成果对发病机制和新药开发 研究具有重要指导意义。 （一）小分子半抗原 １．地高辛：临床检验急症项目要求准确而快速的结果 回报（ＴＡＴ），这对诊断和治疗地高辛中毒至关重要。目前， 全自动化学发光法的反应时间一般为１８ ｍｉｎ；ＬＯＣＩ法通常 只需要５ ｍｉｎ，甚至可以缩短至ｌ ｍｉｎ，且不明显影响其检测 性能，有效检测范围为Ｏ．５—５雌／Ｌ【…。 ２．环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）：ＣｓＡ是接受器官移植患者通常采 用的免疫抑制剂，其在不同个体的生物利用度和药代动力学 不同，不同个体对其敏感性和耐受性也存在较大差异。因 此，血药浓度检测及药代动力学研究，对器官移植的成败非 常重要。传统方法（高压液相、放免分析等）一般在全血样 本溶解后，需要离心去除细胞碎片；ＬＯＣＩ方法可直接在上述 混合溶液中进行，由此简化了操作步骤，减少了实验误差，其 有效检测范围为０—７５０崂／Ｌ肛１。 ３．其他：其他小分子物质还包括茶碱、雌二醇、游离甲 状腺素、叶酸等，都可以采用Ｉ．ＤＣＩ方法检测。与传统分析方 法比较，具有反应时间短、样本用量少等优点¨刮。 （二）抗原分子 １．促甲状腺素（ＴＳＨ）：在甲状腺功能评价中，ＴＳＨ检测 范围为０．０１—３００ ｍＵ／Ｌ，对于甲状腺机能减低（ＴＳＨ升高） 或甲状腺机能亢进（ＴＳＨ降低）的诊断和疗效评价具有重要 意义。ＬＯＣＩ检测ＴＳＨ的灵敏度达０．００２ ｍＵ／Ｌ，优于化学发 光法的０．０１ ｍＵ／Ｌ，这对于亚临床甲状腺机能亢进的诊断与 治疗更为有利。此外，当反应时间由１４ ｍｉｎ缩短至２ ｍｉｎ以 内时，灵敏度仍然可达０．００７ ｍＵ／Ｌ，完全可以满足临床诊治 需要，并极大地提高检测效率，有效缩短ＴＡＴ时间。通过对 ２０例垂体切除后患者血清ＴＳＨ（期单值为０）检测表明，其平 均浓度与０ ｍＵ／Ｌ差异无统计学意义ＢＪ。为适应高通量和 小型化芯片技术，Ｄａｆｆｏｍ等¨们将样本用量由常规的８０一 （一般免疫分析方法用量为１００－２００一）减少至ｌＯ一，虽然 检测灵敏度出现轻度下降，但仍可满足临床要求。 ２．绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）：孕妇血清或后穹隆穿刺 液ｈＣＧ浓度常常高于目前绝大多数免疫分析方法的检测上 限（１ ０００ Ｕ／Ｌ），需要稀释后重新检测，甚至多次稀释，这既 浪费了时间，又增加了成本。Ｕｌｌｍａｎ等¨１用ＬＯＣＩ技术检测 ｈＣＧ的上限达１００ ０００ Ｕ／Ｌ，使绝大多数样本１次检测即可 获得准确结果；而且，与常规免疫检测方法比较，样本用量更 少（１０一）、检测时间更短（７．５ ｍｉｎ），这对于穿刺液量少和
Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，２００２．１２４：９６７８．９６７９．
［１７］
Ｂａｋｅｒ ＢＲ，城ＲＹ．Ｗｏｏｄ ＭＳ，ｅｔ ａ１．Ａｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ，Ｂｐｔａ２Ｂ＇ｌｅｒ－
ｂａｓｅｄ ｓｍａｌｌ－ｍｏｌｅｃｕｌｅ解ｎｆｌｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ，ｌａｂｅｌ·ｆｌｅｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｃａｉｌ砣ｉｎ ａｄｕｌｔｅｒａｔｅｄ ｓａｍｐｌｅｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｌｌｕｉ，Ｉｓ．Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ
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［１４］Ｂ自ｒｅｎｇ Ｃ，Ｔｈａｉｎ Ａ，ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ Ｂ．Ａ ｔｅｌｍｃｙｃＩｉｎｅ－ｂｉｎｄｉｎｇ ＲＮＡ
ａｐｔａｍｅｒ．Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２００１，９：２５４９－２５５６． Ｉ １５ Ｂｕｒｋｅ ＤＨ，Ｈｏｆｆｍａｎ ＩＸ：。Ｂｒｏｗｎ Ａ。ｅｔ ａ１．ＲＮＡ ａｐｔａｍｅｒｓ ｔｏ ｔｈｅ
ａｄｖａｎｔａｇｅｏｕｓ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ＤＮＡ ａｐｔａｍｅｒ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ．Ａｎａｌ Ｂｉｏａｎａｌ
Ｃｈｅｍ．２００５．３８３：８３－９１． ［９］Ｄｍｂｏｆｖｉｃｈ ＡＰ．Ｂｅｒｅｚｏｖｓｋｉ Ｍ，Ｏｋｈｏｎｉｎ Ｖ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｓｍａｒｔ ａｐｔａｍｅｒｓ ｂｙ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｋｉｎｅｔｉｃ ｃ印ｉＩＩａｒｙ ｅｌｅｃ＇ａｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．
Ｓｅｃ．２００６．１２８：３１３８．３１３９．
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ＥＵｌｎｇｔｏｎ ＡＤ．Ｓｚｅｓｔａｋ．ＩＷ．Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ·ｓｔｒａｎｄｅｄ ＤＮＡ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｈａｔ ｆｏｌｄ ｉｎｔｏ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｌｉｇａｎｄ—ｂｉｎｄｉｎｇ ｓＵ＇ｕｃｔｕ．ｒｅｓ．
一、技术原理和特点 １．ＬＯＣＩ检测原理：ＬＯＣＩ检测原理基于的非竞争法类似 ＥｕＳＡ，而基于的竞争法类似放射免疫分析法。以前者为例， 双抗体夹心结构（抗体包被发光珠．｛亢原一生物素化抗体）与
链霉亲和素包被感光珠连接，其中的感光珠在受到６８０砌
激光照射下，使周围氧分子激发变成单线态氧（１△。０：，带有 １个激发态电子的氧分子），后者扩散至发光珠并传递能量， 发光珠发射５２０。６２０ ｎｍ荧光信号并被单光子计数器探测。 此过程中，单线态氧半衰期只有４炉，在反应体系中只能扩
急诊患者极为有利。 ３．胰岛素：胰岛素既是一种药物，同时也是评价胰岛
Ｂ细胞功能的生物标志物，其浓度检测对于糖尿病的发病机 制研究、分型、疗效检测等具有重要价值。特别在药代动力 学和药效学研究领域．快速、高通量、微量样本检测技术无疑 是非常苇要的，而大批屋小动物实验研究尤其如此。Ｐｏｕｌｓｅｎ 和Ｊｅｎｓｅｎ Ｃ７１应用ＬＯＣＩ检测技术在３８４孔板上测定人血浆胰 岛素，样本用鼍仅５山，分析灵敏度为０．３ ｐｍｏＶＬ，功能灵敏 度为１．０ ｐｍｏＬ／Ｌ，最高浓度可以达到１０ ０００ ｐｍｏＬ／Ｌ。同时具 有较高的批内（１．９％一３．８％）和批间（４．６％一７．３％）精密 度；中度溶血、黄疸、脂血、生物素、维生素Ｃ对检测无明显影 响（严重溶血时，回收率降低到７３％）；与酶免分析方法具有 很好的相关性。
Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ．２００６，７８：３１７１－３１７８．
［１０］Ｂｅｒｅｚｏｖｓｋｌ Ｍ．Ｍｕｓｈｅｅｖ Ｍ，Ｄｒａｂｏｖｉｏｈ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｎ—ｓＥＬＥＸ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ０ｆ ａｐｔａｎｍｍ．Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｅｃ，２００６，１２８：１４１０．１４１１．
［１ｌ】Ｊｅｎｉｓｏｎ ｌｉｄ，Ｇｉｌｌ ｓｃ，Ｐａｒｄｉ Ａ，ｅｔ ａ１．ＨｉｇｌＩ—ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
５．其他：在心肌梗死的早期诊断和疗效评价方面，国内 学者【１２４纠用ＬＯＣＩ检测血清肌钙蛋白Ｉ和肌红蛋白。结果表 明该方法具有很高的灵敏度；对血红蛋白、总胆红素、三酰甘 油等具有较好的抗干扰性，其方法学特性和临床检测性能可 完全满足临床要求。
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ｃｈｉｐ．Ｂｉｏｓｅｎｓ Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ，２００７。２２：２５２５－２３１． Ｂｒｅｃｋｓｔｅｄｔ Ｕ，Ｕｚａｒｏｗｓｋａ Ａ，Ｍｏｎｔｐｅｔｉｔ Ａ，ｅｔ ａＩ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ
ａｍｉ啷． ｏｆ ＢＮＡ ａｐｔａｍｅｒｓ ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃ ａｒｏｍａｔｉｃ