枯草、白念、黑曲霉接种于计数用培养基 金葡、铜绿、枯草、生孢、白念、黑曲霉接种
于无菌检查用培养基
※依据药典附录1105试验操作后判断是 否合格。
以下是三种培养基适用性检查要求（计数用培 养基、无菌检查用培养基、选择性培养基）
计数用培养基适用性检查要求
计数用培养基
非选择性 固体培养基
药品微生物实验室
类 别
霉
菌
原
细真及病生藻
菌菌酵毒动类
母
物
菌
△微生物概述

特点：
体积小、结构简单、
分布广、种类(10~20 万种)、
特 点
繁殖快、易变异。
体 积 小
结 构 简 单
分 布 广
种 类 多
繁 殖 快
易 变 异
芽孢：
细菌的 休眠体
芽孢（孢子）
蛋白质受热 不易变性 （耐热）
含水 量少
微生物所需的营养物质
△操作方法注意
1.操作SOP中明确的检验方法要经过方法学 验证，而且和验证方案报告、省药检所的 方法学复核意见中的描述一致 2.操作方法应避免损伤供试品中污染的微 生物。 3.对抑菌性较强的供试品，尽可能选用薄 膜过滤法。
△操作方法注意
微生物的数据修约原则
0.5≈1
1X10=10cfu
0.5X10=5cfu 0.5 ： 2个平皿的平均数 10： 稀释倍数
执行标准是否符合要求。 2.2 在每瓶培养基瓶上贴标签、编号（唯一的标识）、批
号、接收日期、接收人、 开瓶日期、开瓶后的有效期。 2.3 培养基接收记录。 3.培养基的储存
按照供应商提供的方法保存，多数是避光，个别厂家要 求阴凉干燥（低于20℃）。
△培养基管理
4.培养基的适用性检查（药典要求） 4.1 如果培养基的配制和灭菌程序经过验证，那
每次
三月 每次
A级
每次实验
三月
每次
每月 每次（洁净服）
B级
每周一次
半年
每周
三月 每周（洁净服）
C级
每季一次
半年
三月
半年 三月
D级
每半年一次 半年
半年
半年 半年
△洁净区灭菌和消毒
※ A/B级洁净区使用无菌的或经无菌处理的消毒 剂或清洁剂。 ※ 化学消毒剂应验证消毒效果（不止一种）。 ※ 清洁剂、消毒剂在规定的效期内使用。 ※ 常用灭菌法
碳源 氮源 微量元素
水分
营养物质
空气
PH值
温度
△药品中微生物的主要污染途径
1. 水系统（饮用水、纯化水、注射用水、 纯蒸汽）：过滤净化后检测微生物、细 菌内毒素。
2. 原辅料：植物性、动物性（风险最大）； 2020版药典中药饮片增加耐热菌、沙门 菌。
3. 包装材料：安瓿、PVC、PTP、塑料瓶。 检测微生物
（低温冷冻干燥）
（不得重新冷冻）
1代：是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基 中培养。
※ 工作菌株不可替代标准菌株
△菌种的管理
涉及菌种管理的记录 标准菌种的申购记录。 从标准菌株到工作菌株的操作SOP及记录。 菌种的传代记录。 菌种的检查记录（确认记录）。 菌种的灭活、销毁记录。
室温下，2小时内使用。 2~8℃，24小时内使用（黑曲霉孢子悬液 2~8℃，贮存期要验证）
△菌种的管理
菌种的使用
------斜面菌种只允许一次使用
菌种的传代 1.将微生物转接到新的培养基，进行培养
获得新鲜菌种的过程。 2.购买的标准菌株必须经过传代后使用
（在5代以内）。
环境的管理
硬件：阳性菌实验室、培养室、贮藏室（区）、 试验结果观察区、培养基及实验用具准备区、灭 菌区、样品接收区、标准菌株贮藏室（区）、污 染物处理区。 ※ 以上区域要有标识（降低交叉污染）。 ※ 无菌检查：B级背景下的A级单向流洁净区域 或隔离系统。 ※ 微生物限度检查：不低于D级背景下的B级单 向流空气区域。
4.
△药品中微生物的主要污染途径
4.生产人员（最不可控因素）：咳嗽、喷嚏、动
作幅度大、皮肤掉屑；测手指、洁净服。 5. 气体：压缩空气、惰性气体；控制微生物或无
菌。 6. 生产环境：洁净区密封、空气过滤、定期消毒；
测沉降菌、浮游菌、悬浮粒子（A、B、C、D 级）。验证和日常监测 7. 设备及配件：清洁、消毒、灭菌；清洁验证
非选择性 液体培养基
a 被检培养基菌落数， 对照培养基菌落数，
在0.5~2之间
b 菌落形态大小与 对照培养基上的
菌落一致
c 倒5块平板，培养 温度与实际操作一致
培养最长时间 应无菌生长
a 被检液体培养基管 与对照培养基管比较 试验菌应生长良好
b 取最小包装的2瓶 放在实际运用查要求
干热灭菌法：火焰法（酒精灯）、烘箱 250℃1h。
湿热灭菌法：121℃30min。
△设备设施管理
1.设备的确认、检定（校准） 每年一次，注 意连续性。 2.设备使用日志（使用即填） 3.设备定期清洁和消毒（水浴锅、培养箱、冰箱、 生物安全柜）。 4.无菌器具要有明确的标识（已灭菌、未灭菌）。 5.温度计的校准。（注意量程、精度） 6.天平、标准砝码的校准；移液管的校准。 7.悬浮粒子计数器、浮游菌采集器的校准。 8.紫外灯消毒效果的定期检测。
无菌检查用培养基
无菌性检查
灵敏度检查
每批取不少于5瓶培养， 应无菌生长
空白对照管 无菌生长
加菌的培养基管 生长良好
选择性培养基适用性检查要求
选择性培养基 （控制菌检查用）
促生长能力测试
抑制生长能力测试
指示特性
固体： 被检培养基与对照 培养基上生长的菌落
大小、形态一致
液体： 规定的温度、最短的 培养时间、与对照培养 基管比较、被检管试验
么同一批脱水培养基适用性检查可只做1次。 4.2 如果培养基的配制和灭菌程序未经过验证，
那么每一批灭菌培养基均要进行适用性检查。 ※培养基的配制和灭菌方法的验证（存储期） 包括：灭菌前后PH值、外观性状；灭菌后的
无菌性检查、灵敏度检查；保存几周后的无菌、 灵敏度检查。
△培养基管理
4.3 适用性检查 ※购买对照培养基 ※购买菌种
△影响药品微生物检验结果的因素
1.样品中的微生物可能分布不均匀。
2. 微生物检验方法误差大。 3. 检验方法未经过验证。 4. 实验室因素：人员、培养基、试剂、
菌种、环境、设备、样品。
△人员要求
1.操作人员具备微生物学或相近专业知识的教育 背景。
2.培训：职责培训、岗位操作规程的培训、设备 操作培训、检验技术的培训（包括无菌操作、 培养基制备、消毒、灭菌、注平板、菌落计数、 菌种传代、菌种保藏、微生物检查方法、微生 物鉴定基本技术）。
菌暴露若干小时,培养后计算菌的回收率大于70﹪。 △暴露多长时间不干裂、促生长能力良好）。
①包装形式：试管、三角瓶（密封） ②贮存房间的条件 ③取样计划：取样时间点、测试项目（PH值、无菌、适
用性） ※加菌液0.1ml，不能加1ml。
△菌种的管理
◇菌种的来源 CMCC中国
复活
TACC美国
标准贮备菌株（0代）解冻转种 工作菌株
3.实验室安全方面的培训（保证自身安全、防止 实验室被污染）。
4.对微生物管理人员的培训：实验室安全、实验 室结果的评估、数据偏差的调查。
△培养基管理
※ 培养基影响微生物试验结果的因素 1.供应商：稳定、资质合格、业内口碑好、供货能力强。 2. 培养基的接收 2.1 查看培养基名称、批号、厂家、生产日期、有效期、
△菌种的管理
菌种的接收 1.检查外观是否完好。 2.核对菌种名称、编号。 3.核对接收时是否在合适的环境中。 4.核对菌种是否在有效期范围内。 5.给每株菌一个独立的编号，不能重复。
△菌种的管理
菌种的保存 1.标准菌株：超低温冷冻（低于-30℃）有效期一
年； （-70℃以下冷冻保藏）有效期三年。 2. 斜面菌种：2~8℃冷藏，有效期3~6个月。 3. 菌液：
菌生长良好
接种的试验菌 不得生长
被检培养基上 试验菌生长的菌落 大小、形态特征、 指示剂反应与对照
培养基一致
用于环境监控的培养基管理
① 市售：双层包装和终端灭菌
② 如果不能采用终端灭菌的培养基，在使用前进行100﹪ 的预培养，防止出现假阳性。
沉降菌碟暴露时间的验证 △选择在换气次数大的需要监控的操作间，培养基加
供试液的制备（包括方法学验证） ※取样量1+9没有代表性 ※建议：10+90
共同努力，发现问题，提升管理水平！

谢谢各位！
知识回顾 Knowledge Review
△环境监测
1.空调验证：高效过滤器完整性、气流组织、空气流速（平均风速）、 换气次数、压差、温度和相对湿度（测试应在模拟正常检测条件下 进行）
※ 依据药典附录9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则
2.日常监测：
监测项
区域
周期
粒子
沉降菌目 浮游菌 表面微生物（含手套）
无菌隔离 系统
每次实验
三月