试剂组成：
微孔板1包8* 12T
酶标抗原1瓶14ml
阳性对照1瓶1 ml
阴性对照1瓶1 ml
洗涤液2瓶25 ml
显色剂A 1瓶7 ml
显色剂B 1瓶7 ml
终止液1瓶7 ml
说明书1份
自封袋1个
封板膜3张
样品的采集和保存：
1．采集静脉的血清血浆样本应在无菌条件下保存，并避免样品溶血及反复冻溶。
2．血清和血浆样品收集后如果无法在当天检测，样品须在（2-8℃）保存；如果大于7天则需冷冻保存。
辽宁省丹东市
传染病医院检验科
作业指导书
第十七节人类免疫缺陷病毒标准操作规程
文件编号：SH-SOP-017
版本：2006-07
生效日期：2006-07-01
珠海丽珠试剂（双抗原夹心酶联免疫法）检测HIV抗体
实验原理
本品用钝化基因工程人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗原宝贝的微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2抗原及其它试剂组成，应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中HIV-1/HIV-2抗体，适用于献血员筛查及临床HIV抗体检测。
版本：2006-07
生效日期：2006-07-01
9.显色：每孔加入显色剂A B液各50vl，轻轻震荡混匀。37±1℃避光显色15±1分钟。
10.测定：每孔加终止液50vl，轻轻震荡混匀。设定酶标仪波长于450nm处。测定各孔A值。
结果判定：1.阴性对照的正常范围：正常情况下，阴性对照孔A值≤0.10。
4.加样时必须用加样器加，并经常校对加样器的准确性。
5.洗涤时各空均需加满洗液，防止空口内有游离酶不能洗净。使用洗扳机洗涤应设定30-60秒浸泡时间。
6. HIV抗体检测结果的判定必须以酶标仪读数为准。用双波长检测时，参考波长可用600-650nm。
7.操作应严格按说明书进行。不同批次试剂不得混用。封板膜为一次性用品，不能重复使用。
辽宁省丹东市
传染病医院检验科
作业指导书
第十七节人类免疫缺陷病毒标准操作规程
文件编号：SH-SOP-062
版本：2006-07
生效日期：2006-07-01
5．温育：覆上封板膜，置37℃温育30分钟
6．洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后拍干（每次应保持30-60秒浸泡时间）。
7．加酶：分别在每孔中加入酶标抗原100ul。
7.显色：每孔加入底物缓冲液50ul，再加入底物液50ul，震荡混匀，置37℃温育30分钟。
8.终止：每孔加入终止液50ul，轻拍混匀。
9.读值：用酶标仪读值，在单波长450nm或双波长450nm/630nm下读取各孔A值。
辽宁省丹东市
传染病医院检验科
作业指导书
第十七节人类免疫缺陷病毒标准操作规程
文件编号：SH-SOP-062
原理：本试剂和应用双抗原夹心酶联免疫法原理（ELISA）检测血清或血浆样品中人类免疫缺陷病HIV(1+2型)抗体。与包被高纯度基因重组HIV(1+2型)抗原，可与样品中抗HIV抗体反应，加入HRP标记HIV(1+2型)抗原，然后用TMB地物作显色。通过酶表仪检测吸光度，从而判定样品中HIV抗体的存在与否。
2.阳性对照的正常范围：正常情况下，阳性对照孔A值≥0.80。
3.临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔A均值+0.12
4.阴性判定：样品A值<临界值者为HIV抗体阴性
5.阳性判定：样品A值>临界值者为HIV抗体阳性（注意：初试阳性应重新取样双孔复试。复试阳性者应按《全国艾滋病检测技术规范》送HIV确证实验室进行确证试验。）
试剂盒组成：
1．HIV酶标板12孔×8/8孔×12
2．HIV酶标试剂10ml×1瓶
3．HIV-1型抗体阳性对照1ml×1瓶
4．HIV-2型抗体阳性对照1ml×1瓶
5．HIV抗体阴性对照1ml×1瓶
6．浓缩洗液50ml×1瓶
7．显色剂A液6ml×1瓶
8．显色剂B液6ml×1瓶
9．终止液6ml×1瓶
10.封口袋1个
2.温育：置37℃温育30分钟。
3.洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30-60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍干。
4.加酶：空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物50ul。
5.温育：置37℃温育30分钟。
6.弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30-60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍干。
注意事项：1.本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的HIV处筛实验室。
2.检测必须符合HIV实验室管理规范和生物安全守则的规定，严格防止交叉污染。操作时必须戴手套，穿工作服，严格健全和执行消毒隔离制度。所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。
3.试剂盒从冷藏环境中取出是应置室温平衡15-30分钟后方可使用，未用完的微孔条用自封袋密封2-8℃保存。
5.若20倍浓缩洗液出现结晶，请置于37℃至溶解后在使用。
6.不同批号的试剂组分不可混用。
7.本试剂盒及各种废弃物阴按传染性物品处理。
实验操作
1．试剂使用前应充分摇匀。
2．洗涤时各孔均须加满洗液，以防止孔口有游离酶标记物未被洗净。
3．结果判读请在反应终止后15分钟内完成。
4．测定结果必须以酶标仪读数为准。
11.封板膜3张
12.使用说明书1份
使用仪器：加样器温箱洗板机含波长450nm的酶标仪
实验方法：1.配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。
2.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照３孔，阳性对照１型，２型各２孔，空白对照１孔。
3.加样:分别在相应孔中加入待测样品或阴,阳性对照100vl。
结果判定：
1．阳性对照均值应大于阴性对照均值0.60以上且阴性对照均值小于0.10方可认为本次试验有效。
2．临界值计算：cutoff value=0.10+阴性对照均值（若阴性对照均值小于0.05，以0.05计）
3．样品OD值大于或等于临界值为初筛阳性，小于临界值为阴性。初筛阳性者重新取样双孔复试，复试阳性者应按照“全国HIV监测管理规范”送HIV确认实验室进行确认试验。
样品Ａ值<临界值（C.O.）为ＨＩＶ抗体阴性
4.初次试验阳性者应重新取样进行双孔复试，如果复试中任何一孔为阳性则样品视为HIV抗体阳性，对复试结果为阴性的标本请按《全国艾滋病检测技术规范》处理。
注意事项：
样品的收集及保存
1．待测的血清或血浆样品不可用NaN3防腐。
2．短期内进行检测的血清或血浆样品可存放于2-8℃，如需长期保存，应置于-20℃。避免反复冻融。
4.温育：用封板膜封板后置37℃±1℃温育30±2分钟。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，用洗扳机洗涤５遍，最后一次尽量扣干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂100vl。空白孔除外。
7.温育：操作同步骤４。
8.洗涤：操作同步骤5。
辽宁省丹东市
传染病医院检验科
作业指导书
第十七节人类免疫缺陷病毒标准操作规程
文件编号：SH-SOP-062
辽宁省丹东市
传染病医院检验科
作业指导书
第十七节人类免疫缺陷病毒标准操作规程
文件编号：SH-SOP-062
版本：2006-07
生效日期：2006-07-01
英科新创
检测原理：
本试剂盒采用双抗原夹心两步法检测人血清或血浆样本中的（HIV1/2）型抗体。采用多种HIV-1和HIV-2的特异性抗原制作预包被板及酶结合物。当待检样本中存在HIV抗体时，在反应过程中形成“固相HIV抗原-HIV抗体-酶标记HIV抗原”的免疫复合物，加入底物后形成显色反应。
试剂组成
1．HIV抗原包被板12孔×8/8孔×12
2．HIV酶标记物7ml×1瓶
3．HIV阴性对照1ml×1瓶
4．HIV阳性对照1ml×1瓶
5．20倍浓缩洗液50ml×1瓶
6．底物缓冲液7ml×1瓶
7．底物液7ml×1瓶
8．终止液7ml×1瓶
9．封口袋1个
10封板膜3张
10使用说明书1份
操作步骤
1.加样：将所需数量的板条固定于板架，每次试验设空白对照1孔，阳性对照2孔，阴性对照3孔分别加入阳阴性对照各50ul，其余孔加入50ul待测样品。
版本：2006-07
生效日期：2006-07-01
判定结果：
1．要求：阳性对照A值应≥0.8
阴性对照A值应≤0.12
2.临界值（C.O.）计算：
临界值（C.O.）=0.15+阴性对照平均A值
注：阴性对照平均A值小于0.08按0.08计算，大于0.08按实际值计算。
3．结果判断： 样品Ａ值≥临界值（C.O.）为ＨＩＶ抗体阳性
8．温育：覆上封板膜，置37℃温育30分钟
9．洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后拍干（每次应保持30-60秒浸泡时间）。
10．显色：每孔加底物A B各50ul，轻拍混匀，覆上封板膜，37℃暗置20分钟。
11．终止：每孔加入终止液50ul，混匀。
12．测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时，需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果。
4．封板膜为一次性使用，每次使用后请丢弃，重复使用将导致严重污染。
辽宁省丹东市
传染病医院检验科
作业指导书
第十七节人类免疫缺陷病毒标准操作规程
文件编号：SH-SOP-062
版本：2006-07
生效日期：2006-07-01
操作步骤：
1．平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后按需要取用，余者及时以自封袋封存。
2．配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀，浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1: 19稀释后使用。