各菌的生长特点
1)大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气（糖发酵试验） ，是斜面及底层均呈黄色并有气泡。
2) 沙门菌和志贺菌只发酵葡萄糖，不发酵乳糖，分解 葡萄糖产的酸使培养基pH下降，酚红指示剂变黄，但 是培养基中的葡萄糖仅有0.1%，在斜面的酸性物质被 氧化成挥发性酸，且细菌氧化氨基酸物质产生的氨的 中和作用，使斜面变红，而底层则为黄色。
❖ 原理：
当颗粒性抗原与其相应的抗体特异结合时，在电 解质存在下，两者比例合适时，可出现凝集颗粒 ，此现象称凝集反应。
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❖ 试剂与器材
➢ 沙门氏菌属A—E群多价O血清， ➢ SS平板上菌落， ➢ 玻片、消毒缸、酒精灯，记号笔等。
❖ 方法
1.取清洁玻片一张，用记号笔划分成两部分。用移液枪分别在两边加 沙门氏菌属A-E群多价O血清8微升。
泡，用“ ”表示。 4、不发酵糖类，培养基仍为紫色，小管内无气泡，以“-”
表示。
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糖 发 酵 试 验
大肠杆菌 伤寒杆菌 副伤寒杆菌
葡萄糖
+
乳糖
-
-
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硫化氢产生试验
❖ [原理]
某些细菌能分解蛋白质中的含硫氨基酸，如半胱氨酸、 甲硫氨酸，而生成硫化氢。硫化氢遇培养基中的铅盐 或铁盐，形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物。
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[方法]
取糖发酵管培养基，此时培养基应呈澄清、紫色，倒 立小管内无气泡，接种细菌后置37℃温箱培养18－24小 时，观察结果。
[结果]
1、确定细菌是否生长 2、产酸，则培养基指示剂（溴甲酚紫）变为黄色，以“+”
表示。 3、产酸又产气，则培养基除变黄外，在倒置的小管中有气
生 化
碳源和氮源 利用试验
反
IMViC试验
枸橼酸盐利用试验
应 蛋白质和氨基
吲哚试验
酸代谢试验
硫化氢试验
各种酶类试验
抑菌试验
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糖发酵试验
❖ [原理]
根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气 作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基 中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2 以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据 指示剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培养 基中放入倒置杜氏小管观察。
大肠杆菌 痢疾杆菌 伤寒杆菌
SS平板 粉红色大菌落 无色细小 半透明菌落 无色细小 半透明菌落
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（2） 双糖铁培养基接种
双糖铁培养基成分 含有乳糖和葡萄糖：产酸产气
含有硫酸亚铁：如细菌分解含硫氨基酸生成 硫化氢，可形成黑色沉淀
酚红指示剂： 酸：黄 碱：处，请联系改正。
注意！
❖ 本次实验部分涉及生物危险(粪便 中致病微生物)，请谨慎操作(无菌操作 )！
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内容提要
一 肠道杆菌的鉴定（2学时） 革兰染色（1片/人），双糖铁培养
基接种（8支/室），玻片凝集试验 （1片/人） 二 药敏试验（0.5学时）
2.无菌操作下用接种环分别取少许SS平板上菌落（黑色或无色菌落， 以及粉红色大菌落）与血清混合成均匀乳状(注意：取菌量不宜过多 ，使悬液呈轻度乳浊即可)。
3.轻轻摇动玻片，经1-2min后观察结果。
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结果观察
液体变清，并有乳白色凝集块出现者为阳性。 液体仍然混浊，无凝集块出现者为阴性。 如待检菌与沙门氏菌属A-E群多价O血清发生凝 集，则该菌为沙门氏菌属。
征
分析鉴定
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1.细菌的生化反应 ❖ 概念：用生化的方法来检测细菌对各种基质的
代谢作用及代谢产物，借以鉴别细菌种类，这 种生化试验称为细菌的生化反应试验。 ❖ 意义：是鉴别细菌的重要依据。
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糖发酵试验
碳水化合物 代谢试验
甲基红试验 V-P试验
介绍及展示示教平板 三 抗酸染色（2.5学时）
示教，1片/人
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一 肠道杆菌的鉴定（2学时）
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采集标本
增菌培养
分离培养
革兰染色
病
原 革兰染色
接种琼脂斜面纯培养
菌
的 检 验 程 序
观 察 菌 落 特
生 化 试 验
血 清 学 试 验
动 物 试 验
2.肠道杆菌的鉴定
实验目的： 熟悉病原性杆菌的一般鉴定过程
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肠道杆菌的鉴定程序
粪 便→增菌培养（必要时）
↓ SS 培养基
已完成
↓
革兰染色 双糖铁培养基┒
↓
↓
生化反应
血清学鉴定←┛
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（1）观察SS平板上菌落特点
大肠杆菌在SS平板上的菌落特点； 伤寒杆菌在SS平板上的菌落特点；
（3）革兰染色方法与步骤
1、细菌涂片的制备
涂片
干燥
固定
2、染色
初染（结晶紫） 1min 媒染（卢戈氏碘液）1min
冲洗
冲洗
脱色
30s
（95%乙醇）
冲洗
吸干
复染（稀释石碳酸复红） 30s
冲洗
吸水纸
染色完成之后，在涂片区滴上香柏油使用油镜观察实验结果
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（4）伤寒杆菌玻片凝集试验
❖ 注意事项：
注意涂菌时，标明菌落，以免混淆产生错误结 果。
记录结果之后，将玻片放入含消毒液的指定容 器内，切勿任意放置或冲洗。
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（5）结果判断
❖ SS平板：菌落的形态，颜色； ❖ 双糖铁培养基上生化特点； ❖ 革兰染色：形态，排列，染色特点；
❖ [方法]
分别穿刺接种大肠杆菌、伤寒杆菌至两管双糖铁培养 基中。37℃孵育24小时后观察结果。
[结果]
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沿穿刺线部位呈黑褐色，
表明有硫化氢产生，为阳性以
H2S 试验
“+”表示，
不变色者为阴性，以“-”表示。
大肠杆菌：-
伤寒杆菌：+
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双糖铁培养基接种方法
将可疑菌落接种于双糖铁培养基上（穿 刺+斜面 ），37度培养24小时，第二天观察结 果。
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双糖铁培养基上各菌的生长现象
大肠杆菌 伤寒杆菌 福氏痢疾杆菌
黄色有气泡 上红下黄中间有黑色沉淀
上红下黄
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