SSI高效液相的标准操作规程适用于所有使用此仪器者1.流动相的处理1.1过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。

本实验室有水溶性和有机性两种过滤膜供选择，过滤水溶性流动相时（如甲醇/水），先用1-2ml甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。

1.2保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。

1.3保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。

1.4 故障及解决方法1.4.1 流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。

可试用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用更有效的脱气方法或两种方法配合使用；改系统内混合为系统外预混合。

1.4.2 流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。

应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。

输液管上装溶剂滤头，既可使输液管沉至瓶底，又可过滤流动相，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。

溶剂滤头阻塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。

溶剂滤头被微粒所阻塞或长霉，去掉溶剂滤头后如果系统运转正常，说明已找出问题，换上新的溶剂滤头则可。

有时候换上新的溶剂滤头仍然不畅，那就需要查查流动相的制备过程，或者换大孔径的溶剂滤头。

不管如何，流动相都需要重新过滤。

流速过高、阻力大，造成空化现象，这是由于溶剂滤头孔径、管道内径、流速和溶剂黏度等引起的。

如果流速大于10ml/min，常会出现这种现象。

使用下列方法解决：（1）使用低流速；（2）换大孔径的溶剂滤头；（3）增加进液管道内径；（4）抬高或加压储液器；（5）不用溶剂滤头，但流动相一定要先过滤；（6）储液器盖子太紧，在储液器内形成真空，打出的流动相不连续。

应松开盖子或留有1mm的缝隙；（7）进液管道阻塞或弯曲使泵抽不到液，注意调整进液管道或更换新的。

其它问题包括渗漏或接头松动、泵部件损坏等，都能引起供液不正常。

1.4.3 流动相和储液器被污染由于污染，噪音越来越大，检测器基线上升。

污染物可能被泵以稳定的浓度打入系统，而再以稳定的浓度流出来，所以在色谱图中不出多余的峰。

用梯度洗脱时弱流动相可以使污染物聚在柱顶，流动相强度增加后污染物可能被洗脱出来一个大的伪峰。

有时基线噪音突然增大或突然提高，都是因为反复加进新的流动相或系统用得太久（通宵）所造成的。

新加进的流动相有污染物或者流动相长霉，繁殖了细菌。

脏的储液器会污染清洁的流动相。

每种流动相备有专用的储液器，或者定期报废储液器。

流动相污染来自这几个方面：试剂质量不高，玻璃器皿不合格；微生物的影响；配制流动相时操作不当等。

因此要求高纯度化学试剂和HPLC级溶剂。

玻璃器皿按规定清洗干净。

为防止微生物生长，每天要用甲醇清洗系统。

怀疑系统内生长了微生物，可用稀硝酸冲洗既可（注意不要损坏柱和管道系统），真空脱气时防止泵油带入流动相。

用清洁的惰性塞子、搅棒、溶剂滤头和玻璃器皿配制流动相。

已经污染的流动相一定要废弃掉。

2. 仪器组成及电源2.1 仪器组成本系统由SeriesⅢ泵，7725i 进样器，Model 500型紫外/可见光检测器，柱温箱（可选件），数据处理系统一套。

2.2 电源仪器使用时按泵、检测器、打印机和计算机的顺序，依次接通电源。

3. SeriesⅢ泵的操作3.1操作环境要求室内应保持环境清净、无尘，并且有恒温和恒湿设备。

一般实验室的温度应保持在20~30℃之间，相对湿度保持在20%~90%之间。

3.2 溶剂使用注意事项除使用PEEK™泵头以外，Series III泵里面跟溶剂接触的所有部件的制造材料为316L不锈钢、蓝宝石、红宝石或聚合物材料。

这里面有一些材质对酸（包括路易斯酸）和卤化酰基非常敏感。

应避免使用以下溶剂：王水、溴、无水氯、氯化铜、氯化铁、氯化亚铁、氟利昂、胍、氢溴酸、盐酸、氢氟酸、过氧化氢、碘、氯化汞等。

注意，三氯甲烷和四氯化碳会缓慢分解，产生游离的氯化氢（盐酸），会腐蚀不锈钢流路系统，应尽量避免使用。

3.3前面板介绍3.3.1 Prime/Purge阀：这是一个高效的空气排放阀，当打开阀时，液体将从此出口排出，而该阀完全关闭时，液体将从Filter/Outlet出口排出，并进入系统。

当泵或者流动相入口管路有气泡时，打开这个阀，用一个大注射器插在阀口抽液，或者按泵前控制面板上的“Prime”键。

一般抽出20~30ml溶液即可。

（注意：当您拧开这个阀的时候，系统压力一定要在100psi以下）3.3.1.1 Filter/Outlet这是泵出口，内置一个高压在线过滤器（0.5um），该接口设计连接管路为1/16’’外径管（分析型泵）。

3.4控制面板介绍3位数字液晶显示器可以显示泵的流速，系统压力或者是用户设置的最高/低压力保护限，显示模式可通过按“MODE“键进行选择。

3.4.1 键盘：启动/停止键：数字增加键（设置时用）：数字减少键Prime（排气键）：按下这个键，泵将在最大流速下运行，按任意键停止。

（注意：在按下这个键时，必须确认“Prime/Purge”阀是完全打开的）Mode（功能键）：按下这个键，可以循环选择四个显示模式：“流速、压力、最高压力限、最低压力限”。

3.4.2 LED状态灯介绍ML/MIN（流速显示）：当这个灯亮时，显示的是当前的流速（ml/min），”进行调整PSI（压力显示）：当这个灯亮时，显示的是当前系统的压力（psi）HI PRESS（高压限）：当这个灯亮时，显示的是最高压力保护限，用户可进行调整LOW PRESS（低压限）：当这个灯亮时，显示的是最低压力保护限，用户可进行调整PUMP RUN（泵启动显示）：当这个灯亮时，泵正在运行中FAULT（错误提示）：当这个灯亮时，说明系统有错误产生，泵将停止运行。

您可以在查清错误原因后，按任意键跳过错误检查并重新启动泵。

3.5运行泵调节好所需的流速后，按“RUN”键启动泵，泵工作时可使用它的自清洗功能，用自清洗液（水）在线清洗泵头。

3.6 实验结束后关闭电源开关。

4. 进样4.1 进样阀采用7725i手动进样器，进样环（loop）体积为20μl，上样量在10~20μl 时，进样体积必须大于loop体积的3-5倍，才能得到好的重现性，上样量小于10μl时，可以用10μl的微量进样器直接进样。

进样后，快速旋转进样器的把柄，直接把样品进到色谱柱的柱头。

4.2 标准曲线在做标准曲线时，进样浓度应由低到高。

5. 信号检测及数据处理本系统用Model 500型紫外/可见光检测器，波长范围在190-800nm。

在分析过程中测定吸收信号由计算机进行处理，显示色谱图，列出数据处理结果。

测量结束时按规定退出程序后关机。

Series III型泵故障快速检查与排除全面板显示正常，泵电机不转电机控制板保险丝熔断1. 电源问题.2. 内部短路1. 更换保险丝2. 联系维修.PEEK接头漏液. PEEK接头不能拧得太紧. 1. 接头表面密封不严2. 接头表面盐结晶.3. 接头表面有划痕1. 清理表面.2.如果有划痕，更换接头.自清洗泵头漏液. 清洗面密封不好.1. 大 (016) O型环不能密封.2. 泵头松动3. 表面划痕4.自清洗密封圈1. 更换大 (016) O型环2. 拧紧泵头.3. 更换划痕部件.500检测器的使用和维护图2.1：检测器前面板12 345678 9 10 11 12 13 14前面板见图2.1：以下控制和指示器位于前面板上：1）显示屏：A3 1/2数字显示器。

吸收值可显示到1.999AU。

当按下开关8（SAMP）时，这个显示屏显示样品相对光密度，当按下开关9（REF）时，这个显示屏显示参照光强度。

2）上升时间选择开关：一个四档旋转开关控制，能控制二级Bessel滤器的过滤强度。

可选择的上升时间有0.1，0.3，1.0和3.0秒四档。

上升时间等于2倍的时间常数。

（以秒为单位）3）灵敏度选择开关：十二档的旋转开关控制仪器背板上的输出口的输出电压范围。

可供选择的有2.0，1.0，0.5，0.2，0.1，0.05，0.02，0.01，0.005，0.002，0.001，和0.0005 AUFS。

这个开关不控制仪器背板上的1V/AU积分仪输出端口的输出。

4）波长选择器：连续波长旋钮，可调范围190-800nm。

顺时针旋转降低波长，逆时针旋转增加波长。

箭头指示波长增加方向。

注意：不要强力旋转旋钮，使波长值低于180nm或高于820nm这会损坏波长控制器。

5）波长指示器：一个三位的机械波长指示器，显示当前工作波长。

6）紫外（UV）灯指示器：绿色发光二极管亮表示氘（D2）灯装于设备内并且发光。

7）可见光（VIS）灯指示器：绿色二极管灯亮表明这个设备内装着一个钨灯并且发光。

8）样品光强度开关：按下这个瞬间开关，显示器显示样品室光敏二极管测到的样品光密度。

9）参照光密度开关：也是瞬间开关，按下此开关，显示器显示参照光敏二极管测到的参照光密度。

10）短路开关：瞬时开关，按下这个按钮，记录仪输出端电压降为零伏。

这个按钮必须持续按压一会才能发挥作用。

这个按钮用于调整记录笔在记录纸上的位置，但不影响积分仪输出。

11）标记开关：瞬时开关按下该开关可产生偏转度达20%的输出信号，该开关不影响积分仪输出。

12）等待状态指示灯：绿色LED指示灯，此灯亮表示记录仪输岀端正在输出一个恒定的零电压。

这种情况见于：a）刚刚开机时。

解决办法，按下自动回零开关--14，则记录仪归零，等待指示灯熄灭，记录仪输出端开始有电压输出。

b) 刚刚按下自动归零开关时。

这种情况到仪器完成信号处理时能自动恢复。

等待指示灯熄灭，记录仪输出端开始输出电压。

13）超限指示灯：绿色LED指示灯。

此灯亮表示样品流通池里的吸光度超过了自动归零电路的最大调整范围。

这时仪器仍可以正常输出记录电压，只是输出的电压存在一个偏差，即新基线和真正零基线之间的偏差。

例如自动归零电路己将0.002AU设置为零基线，那么新测得的所有数值都是在0.002AU的基础上的增加值。

在配备标准流通池的条件下自动归零电路最大可以将1.5AU的输出设为零基线。

14）自动归零开关：瞬时开关可以使高达1.5AU的电压回零，按下这个开关等待指示灯点亮，记录仪输出端电压归零。

大约三秒之内，这个仪器即可完成新零电位的记录并计算新电压相对值，等待指示灯自动熄灭。

当超限指示灯亮时表示样品流通池里的吸光度超过了自动归零电路的最大调整范围。