中药显微鉴定
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仪器与材料
2.1 仪器 生物光学显微镜(应配有目镜测微尺和载物 台测微尺)、滑走切片机或徒手圆筒生物切 片器、小型粉碎机、镜台测微尺、离心机、 医用超声仪。
2.2 用具
放大镜、刀片、解剖刀、镊子(包括粗镊及眼科弯镊 与直镊)、剪(眼科剪与手术剪)、解剖针。载玻片 、盖玻片、吸湿器(即玻璃干燥器改装蒸馏水加微量 苯酚,潮气润湿药材样品用)、培养皿或小烧杯(放 切片用,切片后的处理均可在其中进行)、酒精灯、 铁三角架、石棉网、滴瓶、试管、试管架、滴管、玻 璃棒(粗与细)、乳钵、量筒、毛笔(从刀上刷取切 片用)、铅笔(HB、4H、6H绘图用)、带盖搪瓷盘( 装切片标本用)、纱布、吸水纸(滤纸)、火柴等。
粉末显微鉴别时,先记录原粉末的色泽、气味。然后边观察、
边记录。注意观察的全面性。观察每张粉末片时,应自上左至 下右,呈“之”字形扫描,逐渐移动装片,全面观察目的物, 描 述其特征,测量其长度,并注意统计最小量值、多见量值、最 大量值。一一记录。
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记录
通常以先多数后少数的顺序描述特征,并标明“多见”、“少 见” 、“偶见”。注意着重描述有鉴别意义的组织、细胞和内含物 ,
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显微鉴别法注意事项
可借助偏光装置寻找和观察,尤其是淀粉粒、结 晶,纤维、石细胞、导管等显微特征。
鉴别成方制剂前,应了解处方组成和制法,分析处方
中各种饮片的主要鉴别特征及用量的多少。进行显微
鉴别时,应观察3~5张装片,使特征不致遗漏
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记录
组织特征的记录,应以从外至内的次序进行,对有鉴别意义的 特征需详细地描述;一般应绘制简图。必要时,应利用显微描绘 器或显微摄影装置绘制详图或提供显微照片,并注明放大倍数, 或加比例尺。
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显微鉴别法注意事项
粉碎用具用完后必须处理干净,干燥后才能使用于另一种药 材。 所用盖玻片和载玻片应绝对干净。新片要用洗液浸泡或用肥皂 水煮半小时取出,先用流水冲洗后,再用蒸馏水冲洗1~2次后, 置于70%~90%乙醇中,备用。
显微鉴别实验时,应先观察淀粉粒、菊糖等,再观察其他显微 特征。所以,一般先以甘油醋酸试液装片观察,然后以水合氯 醛试液装片观察,最后加热透化或滴加其他试液进行观察。每 步骤观察结果均应作记录。
需用水合氯醛试液透化时,应注意掌握操作方法。装片后用手 执其一端,保持水平置小火焰上约1~2cm处加热,并缓缓左右
移动使之微沸,见气泡免同时离开火焰,待气泡停止逸出再放
在小火上,并随时补充蒸发的试液,如此反复操作,直至粉末 呈透明装为止,放凉后滴加甘油镜检 粉末药材制片时,每片取用量宜少不宜多,为使观察全面可多 做些制片。如取量多,显微特征单一轮廓不清,反而费用时, 不易得出准确强论。中成药制剂的粉末检查,因在多味药材粉 末中寻找某一味药的某一显微特征,有时较难查见,可以取粉 末量多些,置试管或小烧杯中,加入水合氯醛试液,加热透化。 透化好后再用吸管吸出,滴在载玻片上,加盖玻片,即可观察。
药材(饮片)显微制片:横切片或纵切片制片、粉 末制片、表面制片、解离组织制片、花粉粒与孢子 制片、磨片制片。 含饮片粉末的制剂显微制片:按粉末制片法制片 细胞壁性质鉴别:木质化细胞壁、木栓化或角质化 细胞壁、纤维素细胞壁。 细胞内含物性质鉴别:淀粉粒、菊糖、草酸钙结晶 2 根据切片方法,分为:徒手切片、冷冻切片、半薄 切片(0.5-2.0微米)、超薄切片( 50-70nm)。
6.1
目镜测微尺注意事项
测量通常是在高倍镜下进行,因目镜量尺的每一小格的长度
值较小,结果较为准确。每次测量记下数据,并分析数据最
小量值、最大量值和多见值(μm)。 测量时,如大小与规定有差异时,允许有少量略高于或低于规 定的数值。每次测量记下数据,并分析数据最小量值、最大量 值和多见值(μm)。
目镜测微尺所代表的长度值随不同目镜与物镜配合而异因此在 实验前,应将专用的目镜测微尺,在所用显微镜不同倍数的目 镜与物镜组合后,进行测量其长度值,全部测定后记载于实验 记录本或将数值表贴在显微镜子座上,备用。
《中国药典》附录Ⅱ 显微鉴别法
显微鉴别法系指用显微镜对药材(饮片) 切片、粉末、解离组织或表面制片及含药材 粉末的制剂中药材的组织、细胞或内含物等 特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择具有 代表性的供试品,根据各种鉴别项的规定制 片。制剂根据不同剂型适当处理后制片。
显微鉴别方法分类
1 根据不同剂型适当处理后制片,分为:
(双氧水)浸渍数分钟,待粉末颜色变浅时,除去
多余液体,加新煮沸的冷蒸馏水,以除去粉末中的 大量气泡即可,然后再行制片观察。
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中成药粉末制片
水泛丸:全球面取样,将丸药从中心剖开,从1/2球 面上刮取。 大蜜丸:将丸药从中心剖开,从1/2或1/4球面上刮 取;也可从内部挑取适量粉末。
散剂、颗粒剂、胶囊:挑取部分粉末; 包衣丸、片:剥除糖衣或包衣,取适量丸或片心磨碎 后,取粉末装片。
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目镜测微尺
观察细胞和后含物时,常需要测量其直径、长短(以µm 计), 作为鉴定依据之一,测量可用目镜测微尺进行。
先将目镜测微尺用载台测微尺标化,计算出每一小格的µm 数,应用时将测得物的小格数,乘以每一小格的µm数,即得 所欲测定物的大小。
目镜测微尺每1小格的长度为30×10um÷77=3.8μm
对于各类药材和饮片均具有的一些基本组织,如叶类药材和饮
片有栅栏细胞、海绵组织、细小导管等可不作重点描述。
应注意标准规定以外的异常显微特征的记录,并根据药材和饮
片的基原、成方制剂的处方和制法综合分析,必要时可采用对 照药材或已经鉴定品种的药材为对照进行判断。
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5 粉末制片注意事项
粉末加液体搅拌及加盖玻片时容易产生气泡。如用水或甘油装 片时,可先加少量乙醇使其润湿,可避免或减少气泡的形成, 或反复将盖玻片沿一侧轻抬,亦可使多数气泡逸出。搅拌时产 生的气泡可随时用针将其移出。
装片用的液体如易挥发,应装片后立即观察。用水装片也较易 蒸发而干涸,通常滴加少许甘油可延长保存时间。
显微鉴别 方法
内容提要
显微鉴定的简介 显微制片方法的分类 显微制片方法
植物显微鉴定的简介(Microscopical Identification)
植物显微鉴定是植物鉴定的重要手段之一。它 通过植物组织、细胞、细胞后含物等特征进行 微观分析,达到鉴别真、伪、优、劣的目的。 植物显微鉴别不但适用于中药材(饮片),也 适用于中成药制品。这一检测方法先后被《中 国药典》、《香港中药材标准》、《日本药局 方》、《印度草药典》、《美国药典》等采用。
分油脂,取少许粉末于小烧杯中,加氯仿少许搅 拌浸渍,过滤,在滤纸上再加少许氯仿洗涤粉末 即可。也可直接将粉末置载玻片进行。
含纤维较多的粉末
细胞彼此不分离,则可以用5%
氢氧化钾溶液浸渍若干小时或在水浴上加热浸渍,
使组织分解后再行制片观察。 颜色很深的药材粉末 进行脱色处理,取粉末少许
置小烧杯中或载玻片上,加少许3%的过氧化氢溶液
淀粉粒、蛋白质、树脂、挥发油和叶绿素等,使细胞组织 变得透明而清晰。
3 粉末特殊处理制片方法
含多量淀粉的药材粉末 大量淀粉粒的存在会
影响观察、描绘及摄影等效果。取一部分粉末于 试管中加水煮沸,使淀粉粒糊化而溶解,放置或 用离心机使所需细胞、组织下沉管底,用长吸管 将沉淀物吸出供制片观察。 含多量油类的药材粉末 进行脱脂以除去大部
粉末制片
1 药材粉碎
选取完整的药材或待鉴定部位,粉碎,过《中国药典》4
号筛备用。
2 粉末特殊处理制片方法
斯氏液装片
斯氏液由醋酸∶甘油∶水(1∶1∶1)组成,主要用于观
察淀粉粒及一些遇水合氯醛试液ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ溶解的成分。如多糖类 成分、树脂类成分等。 水合氯醛液装片
水合氯醛试液能渗透组织,使皱缩的细胞膨胀;并能溶解