（关键）

②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质
•（2）常用的技术：
•①DNA分子杂交技术－－DNA与DNA杂交
•②分子杂交技术－－DNA与RNA杂交 •③蛋白质分子（抗原－抗体）间的杂交
课堂巩固
2、利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要的产品。 下列各项中能说明目的基因完成了在受体细胞中表达的是（ D ） A．棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因 B．大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNA C．山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列 D．酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白
转基因试管牛的培育过程
从甲雌牛 卵巢中获 得卵细胞
体外 A 受精
从乙雄牛 精巢中获 得精子
含人血白蛋白基 因的重组DNA
显微
囊胚
原肠胚
D 胚胎 C 胚胎 移植 体外 培养1、2、3为胚胎发育时期；ABCD为生物操作技术 注：
转基 因牛 “滔 滔”
大家来找茬
体外受精
从卵巢中获得 卵母细胞
思考：2 1、在构建含人血白蛋白基因的重组 DNA的过程中是否只有用同一种限制性核酸 的过程中需要借助哪些工具酶？ 内切酶切割的黏性末端才能连接？
G G A T C C C C T A G G
G A T C C T A G
限制酶Ⅰ切割
G G A T C C G
限制酶Ⅱ切割
G A T C
C T A G
转基因试管牛的培育过程
从甲雌牛 卵巢中获 得卵细胞 从乙雄牛 精巢中获 得精子
含人血白蛋白基 因的重组DNA
B
A
受精卵
C
卵裂
1
D
2
3
转基 因牛 “滔 滔”
注：1、2、3为胚胎发育时期；ABCD为生物操作技术
转基因试管牛的培育过程
从甲雌牛 卵巢中获 得卵细胞 从乙雄牛 精巢中获 得精子
含人血白蛋白基 因的重组DNA
青海省玉树县2010年4月14日晨发生两次地震，最高震级7.1级，地震震中位于县 城附近。截至4月20日17时，玉树地震遇难人数为2064人，失踪175人，受伤12135人 ，其中重伤1434人。为表达全国各族人民对青海玉树地震遇难同胞的深切哀悼，2010 年4月20日国务院决定，2010年4月21日举行全国哀悼活动，全国和驻外使领馆下半旗 志哀，停止公共娱乐活动。
C C T A G
动 手 试 一 试
形成相同且互补的黏性末端
G G A T C DNA连接酶 C C T A G
课堂巩固
1、基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒， 便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是 一G↓GATCC一，限制酶II的识别序列和切点是一↓GATC一。 根据图示,判断下列操作正确的是（ A ） A．质粒用限制酶I切割，目的基因用限制酶II切割 B．质粒用限制酶II切割，目的基因用限制酶I切割 C．目的基因和质粒均用限制酶I切割 D．目的基因和质粒均用限制酶II切割
含人血白蛋白基 因的重组DNA
显微 注射
如果想要快速繁殖转 基因牛，还可以辅以 其他什么技术？
受精卵
胚胎 体外 培养
卵裂
桑椹胚
胚胎 移植
囊胚
原肠胚
转基 因牛 “滔 滔”
思考：如何检测转基因试管牛是否含有人血白蛋白 基因和人血白蛋白基因是否表达？

基因表达的途径 （ 1）内容：
转录 翻译
DNA mRNA 蛋白质 ①检测转基因生物的染色体 DNA上是否含有目的基因
人血白蛋白是从健康人的血液中提取的，可直接静脉注 我国人血清白蛋白每年临床需要110-120吨，目前血浆 射到病人体内，主要用于失血创伤、烧伤引起的休克，脑水 供应不足，市场缺口高达 60吨至80吨。我国每年临床和疫苗 肿及损伤引起的颅压升高，肝硬化及肾病引起的水肿或腹水， 辅料需要 150—170吨人血白蛋白，完全从血浆中提取，相当 癌症术后恢复等方面的治疗，是临床急救的一种特殊药品。 于要 2亿人年均献血100毫升。 因其主要用于危重病人及大手术患者的术后康复，素有“救 命药”之称。
B
A
受精卵
C
卵裂
桑椹胚
D
囊胚
原肠胚
转基 因牛 “滔 滔”
注：1、2、3为胚胎发育时期；ABCD为生物操作技术
想一想
获取目的基因的方法有哪些？
①人工化学方法合成目的基因，或用聚合酶链式反 应(PCR)技术扩增目的基因 （目的基因的序列已知） ②从基因中获取目的基因 （目的基因的序列未知）
资料：
卵母细 胞培养
试管
胚胎体外培养
胚胎移植
受体母牛
供体母牛
新鲜或解冻 的精液
……同期发情……
雌性激素 促性腺激素
获能 无需任 何处理 处理
供体公牛
超数排卵 配种 早期胚胎 受精卵
未配种配种 胚胎移植
受精卵
妊娠检查
分娩（胚胎移 植的犊牛）
转基因试管牛的培育过程
从甲雌牛 卵巢中获 得卵细胞
体外 受精
从乙雄牛 精巢中获 得精子
含人血白蛋白基因的重组DNA： 曾溢滔教授的课题组构建了含人血 清白蛋白（hALB）基因的cDNA全序 列、内含子1以及山羊β-酪蛋白基 因启动子和5′端上游调控序列在内 的乳腺表达载体pcDNA3.1-CALBm
思考：1、在构建含人血白蛋白基因的重组 DNA的过程中需要借助哪些工具酶？
大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别 GAATTC序列，并在G和A之间切开（水解 DNA分子骨架的磷酸二酯键）。
5‘ 3‘
3‘
5‘
• 什么叫黏性末端？
当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切 开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切 口，带有几个伸出的核苷酸的单链，他们 之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末 端。
限制性核 酸内切酶
氢键
磷酸二酯键
DNA连接酶 DNA聚合酶
解旋酶
资料：
含人血白蛋白基因的重组DNA： 曾溢滔教授等人构建了含人血清白 蛋白（hALB）基因的cDNA全序列、 内含子1以及山羊β-酪蛋白基因启 动子和5′端上游调控序列在内的乳 腺表达载体pcDNA3.1-CALBm
1999年2月，上海遗传研究所宣布转基因试管牛“滔 滔”诞生，其体内被检测到带有人的血清白蛋白基因，这项 成果被评为当年“中国十大科技进展”之一。
中国工程院院士、课题组 负责人曾溢滔教授 (左)
我国首例转基因试管牛“滔滔”。
转基因试管牛的培育过程
据曾溢滔教授介 绍：将人血清白蛋白 （hALB）基因通过显 微注射将其导入经过 体外受精（IVF）的奶 牛受精卵中，体外培 养到桑椹胚后期，将 整合胚移植于受体母 牛，足月分娩产下1头 含有人血清白蛋白基 因整合的转基因试管 牛“滔滔”。