小鼠淋巴细胞分离方法
一、实验用品的准备：
1.采血用品：10ml注射器10个；手套20付；15ml离心管10个；20µl枪头、200µl
枪头、1000µl枪头。

摄子、剪刀各2把；加样器；70%酒精；5%碘酒；
2.取脾用品：10ml注射器10个；手术器械10套；手套20付，60mm玻璃培养皿10个；
200 目尼龙网，裁成100mm×100mm正方形10块；10mL 玻璃注射器内活塞10个；
5mL刻度吸管、15mL离心管、1640培养基；鼠淋巴细胞分离液；摄子、剪刀各10
把；70%酒精；5%碘酒；移液器、离心机；刀剪浸泡液（新洁尔灭）；
注：红色必须灭菌；蓝色可以不灭菌；绿色需特殊处理；黑色不用灭菌。

二、相关实验：
（一）实验名称：分离小鼠脾脏淋巴细胞
实验目的：获得小鼠脾脏淋巴细胞，为ELISPOT实验做准备。

实验动物：BABALB/c小鼠；雌性
实验材料：
1．小鼠淋巴细胞分离液,
2．60mm玻璃培养皿
3．10mL 玻璃注射器内活塞，灭菌
4．气管切开包
5．5mL刻度吸管、15mL离心管、移液器、离心机
6．1640培养基
实验方法
1. 断颈处死小鼠，浸入75%的乙醇中浸泡1-2分钟。

2. 在超净台中小心剪开小鼠的腹部外皮，用大头针固定，再剪开小鼠的腹腔，用镊子取出小鼠脾脏。

注意无菌操作。

3. 在培养皿中放入3mL1640基础培养基，将小鼠脾脏放入培养皿中，用1ml注射器吸取小鼠淋巴细胞分离液，注入小鼠脾脏，直至完全分离。

4. 把悬有脾脏细胞的1640培养基缓慢转移到装有6 mL淋巴细胞分离液的15 mL离心管中。

5. 3000转离心15分钟。

（病毒室离心机）
6.吸出淋巴细胞层，加入5mL 1640培养基洗涤一次，1500转离心10 分钟。

7.倾倒上清液，加入3-5mL5ml5%FCS1640培养基重悬，细胞计数。

8.对获得的小鼠脾脏淋巴细胞进行ELSPOT 检测。

实验试剂用量：
1．小鼠淋巴细胞分离液：60 mL 2．1640基础培养基：80 mL 3．5%FCS1640培养基：50Ml。