静置5
Hb(g/L)＝ A × 64458(mg)× 251 = A × 367.7
44
1000
A：540nm处标本吸光度。 44：HiCN在光径1.0cm、540nm条件下的毫摩尔消光系
数（Lmmol-1cm-1）。 64458（mg）：Hb的毫克分子量，即1mmol/LHb溶液
中的Hb毫克数。 1000：将mg转变为g。 251：血液稀释倍数。
参考方法、操作简单、试剂KCN有剧毒、高 反应快、可检测除 WBC/高球蛋白血症标
SHb外的所有Hb、产 本可致混浊、对HbCO 物稳定，便于质控 的反应慢、不能测定
SHb
十二烷基硫酸 钠血红蛋白 （SDS-Hb）测 定法
次选方法、操作简便、SDS质量差异大、消光
呈色稳定，结果准确 系数未定、SDS易破坏
N2、CO2
在含有苯肼和硫化氢的环境中， HbO2 转变为SHb SHb也见于服用阿司匹林或可待因的患者
(一) 检测原理
表 血红蛋白测定方法及基本原理
测定方法
测定原理
全血铁法
Hb分子组成
比重法、折射仪法 血液物理特性
血气分析法 比色法
Hb与O2可逆性结合的特性 Hb与衍生物光谱特点
临床常用
HiCN测定法是WHO和ICSH推荐的参考方法
第二章 血液一般检验
第一节 红细胞检查
一、红细胞计数 二、血红蛋白测定 三、血细胞比容测定 四、红细胞平均指数计算 五、网织红细胞计数 六、红细胞沉降率测定
七、红细胞形态检查
要求
掌握： （1）HiCN、HCT、红细胞平均指数、RET、ESR的检 测原理 熟悉： （1）HiCN 、HCT、红细胞平均指数、RET、ESR的方 法学评价、质量保证、临床意义 （2）HGB结构及SDS-Hb测定 （3）红细胞形态及其临床意义
PLT>700×109/L、HbCO增多(转化）
2.器材及试剂：定期校准分光光度计、比色杯、
微量采血管、刻度吸管、试剂质量（CN-）
3.技术操作：采血、稀释、混匀；HbCO转化
4.废弃物的处理：KCN是剧毒品
(转化液配制、废液处理)
以水1：1稀释废液
1升稀释后的废液 +
35ml 次氯酸钠
严禁在废液中 加入酸性溶液
溴代十六烷基 溶血性强且不破坏WBC，精密度、准确性略低
三甲铵（CTAB）适用于血液分析仪检
测定法
测
各测定法标准应溯源到HiCN量值
表 HiCN转化液成分和评价
转化液 作用
评价
都氏液 文-齐液
① K3Fe(CN)6和KCN ：使Hb形成 反应速度很慢，
稳定的HiCN
15℃时40min才能
②NaHCO3:使高球蛋白血标本 使Hb完全转化为
第一节 红细胞检查
一、红细胞计数 二、血红蛋白测定 三、红细胞形态检查 四、血细胞比容测定 五、红细胞平均指数 六、网织红细胞计数 七、嗜碱性点彩红细胞计数 八、红细胞沉降率测定
二、血红蛋白测定
简介
红细胞的运输蛋白：运输O2和CO2
• １血红蛋白的结构
血红蛋白(hemoglobin,Hb或HGB) 是在人体有核红细胞和网织红细胞内合成的
（2）参考液比色法测定 以参考液Ｈｂ（ｇ／Ｌ）为横坐标，吸光度
为纵坐标，绘出标准曲线
2.十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法
以氰化高铁血红蛋白法测得的Ｈｂ浓度为横坐标， 本法测得吸光度为纵坐标，绘出标准曲线
(三)方法学评价 比色法
表 血红蛋白测定的方法学评价
测定方法
优点
缺点
氰化高铁血红 蛋白（HiCN） 测定法
成人时期 ＨｂA ＨｂA２
α2γ2
α2β2 α2δ2
新生儿﹥７０ ％，１岁后﹤ ２％
９０％以上 ２％～３％
• 2 血红蛋白的种类
生 99% Hb的铁呈Fe2+ ： 还原血红蛋白(deoxyhemoglobin；
理
reduced hemoglobin,HHB,Hbred），可与O2可逆
条
结合形成氧合血红蛋白(oxyhemoglobin，HbO2)
一种含色素辅基的结合蛋白质
有 核 红 细 胞
4个血红素
HGB
4条珠蛋白肽链
原卟啉 铁原子(Fe2+)
α类链(2条) 非α类链(2条)
不同时期血红蛋白的种类和肽链组合
时期
胚胎时期
种类
肽链
Ｈｂ Gｏｗｅｒ－１ ζ2ε2 Ｈｂ Gｏｗｅｒ－２ α2ε2 Ｈｂ Pｏｒｔｌａｎｄ ζ2γ2
比例
胎儿时期 ＨｂF
件
下 1% Hb的铁呈Fe3+：高铁血红蛋白(hemiglobin,Hi；
methemoglobin ,MetHb)
血红蛋白衍生物
血红素第六个配位键被CO等占据
碳氧血红蛋白（carboxyhemoglobin, HbCO,COHb ）
CO与Hb结合力比氧高240倍
硫化血红蛋白（sulfmethemoglobin, SHb）
SDS（十二烷基硫酸钠）亲水端与球蛋白結合 立体结构的改变 氧化 : Fe 2+ --> Fe 3+ SDS 疏水端与 Fe 3+ 键结合 --> SDS-Hb （538nm、不含有毒物、脂溶性）
(二) 操作步骤
1.氰化高铁血红蛋白( HiCN )测定法
（1）直接定量测定法
加转化液5ML 采血(20ul)与转化 分钟 测定 计算
的溶血液不浑浊
HiCN
①K3Fe(CN)6和KCN ：使Hb形成 WHO和我国卫生部
稳定的HiCN
推荐使用
②KH2PO4:维持pH在7.2±0.2， 防止高球蛋白浑浊
③非离子型表面活性剂：溶解
RBC、游离Hb，防止溶血液浑浊；
助溶剂
(四)质量控制
1.标本：高脂血症、高球蛋白、WBC>30×109/L、
重复性好
WBC，不适用于同时进
行WBC计数的血液分析
仪、不能测定SHb
测定方法
优点
缺点
碱羟血红蛋白 试剂简易，不含毒性， 575nm波长比色、不便
（AHD575）测 呈色稳定，准确性与 于自动检测、HbF不能
定法
精确性较高
转化
叠氮高铁血红 准确性与精确性较高
蛋白（HiN3) 测定法
试剂仍有毒性（为 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱiCN的1/7)、HbCO转 化慢（20min）
1.氰化高铁血红蛋白( HiCN )测定法
• 原理
RBC 溶血液 Hb
SHb除外
K3Fe(CN)6
Fe2+→Fe3+
Hi (高铁血红蛋白)
KCN
HiCN (氰化高铁血红蛋白)
最大吸收峰为540nm， 波谷为504nm
2.十二烷基硫酸钠血红蛋白(SDS-Hb）测定法
Fe 2+
SLS
Fe 3+
Fe 3+