大肠杆菌感受态细胞的几种制备方法关于感受态细胞(Competent cells)常态的细胞不能摄入外部溶液中的DNA，，所以要转化质粒DNA进入大肠杆菌必须首先制备感受态的大肠杆菌细胞。
受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl，RuCl等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) 。
转化，是将异源DNA分子引入一细胞株系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，是基因工程等研究领域的基本实验技术。
进入细胞的DNA分子通过复制表达，才能实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。
转化过程所用的受体细胞一般是限制－修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株。
α-互补现象：因为许多载体都带有一个LacZ基因的调控序列和头146个氨基酸的编码信息，编码α-互补肽，该肽段能与宿主编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内互补（α-互补）。
当这种载体转入可编码?－半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞中时，在异丙基-?-D 硫代半乳糖苷（IPTG）的诱导下，宿主可同时合成这两种肽段，虽然它们各自都没有酶活性，但它们可以融为一体形成具有酶活性的蛋白质。
所以称这种现象为α-互补现象。
由互补产生的α－半乳糖苷酶(LacZ)能够作用于生色底物5－溴－4－氯－3－吲哚－β－D－半乳糖苷(X-gal)而产生蓝色的菌落，所以利用这个特点，在载体的该基因编码序列之间人工放入一个多克隆位点，当插入一个外源DNA片段时，会造成LacZ(α)基因的失活，破坏α-互补作用，就不能产生具有活性的酶。
所以，有重组质粒的菌落为白色，而没有重组质粒的菌落为蓝色。
大肠杆菌感受态细胞的几种制备方法方法一：细菌转化的方法多以Mendel和Higa（1970）的发现为基础，其基本方法是用冰预冷的CaCl2或多种2价阳离子等处理细菌，使之进入感受态得以转化。
用CaCl2制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞，常用于成批制备感受态细菌。
本法适用于大多数大肠杆菌菌株，且迅速、重复性好。
操作过程简述如下。
1．从37℃培养16～20h的新鲜平板中挑取一个单菌落（如大肠杆菌DH52），或1ml新鲜的16～20h过夜培养物，转到一个含有100mlLB培养基的1L或500ml烧瓶中。
于37℃剧烈振摇培养约2～3h（旋转摇床200～300r/min），每隔20～30min测量OD600值≈0.4。
2．在无菌条件下将细菌转移到一个，用冰预冷的50ml聚丙烯离心管中，在冰上放置10～20min。
3．于4℃用SorvallGS2转头（或与其离心管相配的转头）以4000r/min离心10min，以回收细胞。
4．倒数培养液，将管倒置1min以使最后残留的痕量培养液流尽。
5．以10ml用冰预冷的0.1mMCaCl2重悬每份沉淀，放于冰上。
6．于4℃用SorvallGS3转头（或与其相应的转头）以4000r/min离心10min，以回收细胞。
7．倒出培养液，将管倒置1min以使最后残留的痕量培养液流尽。
8．每50ml初始培养物用2ml冰预冷的0.1M CaCl2重悬每份沉定，此时，可以迅速将细胞分装成小份，液氮中冰冻，-70℃贮存备用。
9．用冷却的无菌吸头从每种感受态细胞悬液中各取200μl转移到无菌的微量离心管中，每管加DNA或连接反应混合物（体积≤10μl，DNA≤50ng），轻轻旋转以混匀内容物，在冰中放置30min。
10．将离心管放到预加温到40℃的循环水浴中的试管架上，放置90s～2min，不要摇动试管。
11．快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却1～2min。
12．每离心管加800μlSOC培养基，用水浴将培养基加温到37℃，然后将管转移到37℃摇床上，温育45min使细菌复苏，并且表达质粒编码的抗生素抗性标记基因。
13．将适当体积（每个90mm平板可达200μl）已转化的感受态细胞转移到含200mmol/l MgSO4和相应抗生素的SOB培养基上。
14．将平板置于室温至液体被吸收。
15．倒置平皿，于37℃培养，12～16h后可出现菌落。
方法二：CASsuper One-Step Competent Cell Preps Kit 采用一种简单便捷的方法处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞，便于质粒DNA的转化，可满足一般实验的要求。
与CaCl2法相比具有多种优点：使用方便，只需一步即可完成感受态细胞的制备；转化效率略高于CaCl2法，一般可达106-108cfu/μg，满足一般实验需要；感受态细胞制成后即可保存于-70℃,无须加入甘油，并且经长期保存活力无明显下降。
准备工作：1．从液氮或低温冰箱中取出的大肠杆菌冻存菌，在LB平板上划线，37度过夜至长出单菌落。
挑形态饱满的单菌落2个，分别接种5ml LB培养基中，37℃，250rpm，过夜培养。
2．次日从5ml LB培养物吸取200μl转入50ml LB培养基中（250ml 锥形瓶），37 ℃，250rpm培养2小时，此时OD600约0.4—0.5。
感受态细胞的制备：3．吸取1ml菌液到1.5ml离心管里，5000rpm离心5分钟，弃去上清。
4．加入100μl预冷的Solution A，悬浮菌体，冰浴30分钟。
5．此时感受态细胞已经制成可立即使用或-70℃保存。
细胞转化：6．在感受态细胞中加入100pg-10ngDNA，混匀，冰浴30分钟，然后42℃ 1分钟热击，再次冰浴2 分钟。
加入0.9ml LB 培养基，20μl Solution B，37℃，振荡培养1小时。
7．取适当菌液（100-200μl）涂布相应抗性的平板。
8．过夜培养约16个小时，数菌落数，计算转化率。
补充说明：1．所用器具一定要清洁；2．操作步骤2 中培养基的装量也是很重要的，建议装量不要高于此值：500ml 锥形瓶装100ml培养基，250ml锥形瓶装50ml培养基；3．在收获菌体前半小时还可以在培养基中加入20mM的MgCl2 ，效果会更好一些；4．为保证细胞处于对数生长期，培养后的菌体的OD值不要高于0.6；5．制备感受态细胞时所有操作尽量保证在冰上操作；6．细胞转化操作步骤6中也可以不必进行热击，冰浴后直接加入新鲜LB，简化操作步骤，但转化效率低于热击方法，适用于对转化率要求不高的实验。
方法三：1、取1%大肠杆菌E.coli接种于含2ml LB培养基的试管中，37℃振荡培养过夜2、取0.1ml过夜培养物转种于含10ml LB培养基的三角瓶中，37℃振荡培养3h至OD600=0.33、然后把培养物倒入1.5ml 离心管中，冰浴10min 。
4、在4℃下以4000rpm 离心5min ，去上清液5、把菌体悬浮于15m1冰冷的0.1M CaCl 2溶液中，置冰上30min6、然后再在4℃下以4000rpm 离心10min ，去上清液7、将菌体悬浮于0.1ml CaCl 2溶液中，冰浴放置4-12hr 备用。
方法四：（1）将1ml 过夜培养的细菌（如DH52、TG1、TM101）接种于100ml2×YT 培养于500ml烧瓶。
于37℃刷烈振荡，通常≥200rpm 培养的细菌密度约OD550=0.2～0.5(5×107cells/ml),需2～4h 。
（2）将培养物放于冰上致冷10min ，于4℃离心细菌培养物，10000rpm 离心10min 。
（3）弃除上清，将细菌悬浮于原始培养体积的一半（约50ml ）的50mMCaCl2和10mm Tris·HCl （pH8.0）无菌冷冻液体中。
（4）将细菌悬浮放在冰上约5min ，然后将悬浮物于4℃10000/rpm 离心10min 。
（5）弃上清，悬浮细菌于原始培养体积的1/15的50mMCaCl 和10mMTris·HCl （pH8.0）无菌冷冻中。
此时的细胞是感受态细胞，即可用于转化。
200μl 分装于无菌的1.5ml 微量离心管中，贮存于-80℃冰箱中。
方法五：TSB 法（也是本人热衷的方法）1.药品制备1M Mg 2+ (1M MgSO 4 和 1M MgCl 2等体积混合)，用0.22um 滤膜超滤除菌。
TSB 液（30mL/ 80mL 菌液）（现配现用）：PEG3350 3gTryptone 0.3g Yeast extract 0.15g NaCl 0.3g2. 步骤：（1）活化菌株（2）挑单菌落培养于5mL 的液笨培养基中（3）取液体培养物50uL 于80mL 的液体培养基中进行扩大培养（4）370C 培养3－4小时，OD 600在0.4－0.6（5）离心，去上清（6）加入20mLTSB ，重悬（7）离心，去上清（8）加入10mLTSB ，再加入15－20%的甘油，分装保存注，整个操作过程均应在冰上进行。
所用药品均需灭菌。
转化程序（1）取出200μl 感受态细胞慢慢使其溶化，并立即放于冰上，加入DNA 或连接反应混合物，DNA 量通常≤50mg。
用手指弹打试管10次，使之混匀，然后放在冰上40～45min 。
（2）将管放于42℃水浴中2min 。
（3）然后每管直接加入1.0ml2×YT 培养基，倒置混匀，并于37℃培养8～12h ，干浴或水浴，不需振摇。
此期间使细菌生长并开始表达抗菌素。
（4）每200μl 转化混合物分别于6个2×YT 琼脂培养板上补充相应抗生素，并含有X-gal （20mg/ml ）、IPTG （200mg/ml ）。
1210C, 15min 灭菌后，加入1MMg 2+600uL , 以及DMSO 3mL（5）铺板使细菌混合物干后，倒转平板放于30～37℃培养箱中18～22h。
克隆在此期间应该出现，否则转化不成功。
常用的大肠杆菌感受态细胞的制备方法除以上几种外，还有很多。
各种方法都各有其优缺点，我们在选择方法的时候应根据自己实验具体情况而定。
以期获得最高的转化效率。