咔唑比色法测定果胶含量-标准曲线的制作
1方法原理
方法基于果胶物质水解，生成半乳糖醛酸在强酸中与咔唑的缩合反应。

然后，对其紫红色呈色溶液进行比色定量。

2试剂
(1)乙醇(化学纯)：无水乙醇和950mL·L-1乙醇。

(2)精制乙醇：取无水乙醇(化学纯)或950mL·L-1乙醇1000mL，加入Zn粉4g和硫酸(1∶1)4mL，置恒温水浴中回流10h后，用全玻璃仪器蒸馏。

馏出液每1000mL加入Zn粉和KOH各4g，进行重蒸馏。

(3) 1.5g·L-1咔唑乙醇溶液：称取化学纯咔唑0.150g，溶解于精制乙醇，并定容至100mL。

(4)标准半乳糖醛酸：以医药公司上海化学试剂采购供应站分装的L.Light出品α-D水解半乳糖醛酸作为标准半乳糖醛酸。

(5)浓硫酸(优级纯)(注2)。

(6)0.05mol·L-1HCl溶液。

3 操作步骤
(1)半乳糖醛酸标准曲线的制作：准确称取α-D-水解半乳糖醛酸100mg，溶解于蒸馏水，并定容至100mL，混合后得1mg·mL-1的半乳糖醛酸原液。

移取上述原液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL，分别注入100mL容量瓶中，稀释至刻度，即得一系列浓度为10、20、30、40、50、60、70μg·mL-1的半乳糖醛酸标准溶液。

取30mm×200mm的硬质大试管7支，用吸管注入浓H2SO4各12mL。

置冰水浴中冷却，边冷却边分别沿壁徐徐加入上述不同浓度的半乳糖醛酸标准溶液各2mL，充分混合后，再置冰水浴中冷却。

然后，在沸水浴中加热10min，冷却至室温后，加入1.5g·L-1咔唑溶液各1mL，充分混和。

另以蒸馏水代替半乳糖醛酸标准溶液，依上法同样处理，作为试剂空白。

室温下放置30min后，用721型分光光度计，在波长530nm下，分别测定其吸光度(A)，以测得的吸光度(A)为纵座标，每mL标准溶液中半乳糖醛酸的含量为横座标，制作标准曲线。

2、根据标准曲线计算未知浓度的样品含量。