1丙二醛（MDA）含量的测定丙二醛在酸性和高温的条件下，可以和硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川，在532nm处有最大光吸收。

植物组织中可溶性糖与TBA的显色反应产物在450nm和532nm处也有吸收。

测定时要排除可溶性糖的干扰，因此分别测定532nm和450nm处的吸光值，直接求得植物样品提取液中MDA的浓度；MDA含量采用硫代巴比妥酸法测定。

计算公式如下:C(µmol.L-1)=6.45OD532-0.56OD450进一步算出每克样品鲜重中丙二醛的含量（µmolg-1FW）。

试剂：10%三氯乙酸（TCA）：10g三氯乙酸定容于100ml0.6%硫代巴比妥酸：0.6g用10%三氯乙酸TCA定容于100ml试验步骤:（1）取植物材料用液氮迅速研磨成粉，取0.2g左右材料，放入5ml离心管。

（2）加入5ml 10%的三氯乙酸，提取30min后，10000r/min离心15min。

（3）取上清液2ml，加入2ml 0.6%TBA，混匀，在100℃水浴中煮15min，冷却，冷却后再测量。

（4）分别测定532nm和450nm处的吸光值。

以2ml（加TBA,水）水代替提取液作为对照管。

2蛋白质含量测定----考马斯亮蓝G-250法实验原理：考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm，后者在595nm。

在一定蛋白质浓度围，蛋白质一色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。

仪器和试剂：牛血清白蛋白500微克/毫升：10ｍｇ蒸馏水定溶至100ｍｌ考马斯亮蓝G-250：10ｍｇ溶于5ml 90％乙醇中，加入10ml85％的磷酸，用蒸馏水定溶于100ｍｌ操作步骤：1.标准曲线的制作：取4支试管，按下表配制不同浓度的牛血清白蛋白溶液各1毫升,加入5毫升考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀，放置2分钟后用10毫米光径的比色杯在595nm 下比色。

做出标准曲线。

管号 1 2 3 4蛋白质含量(微克) 0 50 100 150500微克/毫升牛血0 0.1 0.2 0.3清白蛋白量（毫升）蒸馏水量(毫升) 1.0 0.9 0.8 0.7考马斯亮蓝-G250 5 5 5 5（毫升）2.样品中可溶性蛋白质的提取测定：称取植物叶片0.2克，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，过滤，取滤液l.0ml(视蛋白质含量适当稀释)于试管中，加入5毫升考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀，放置2分钟后用10毫米光径的比色杯在595nm下比色，以空白管调零，测定吸光度。

根据吸光度查标准曲线，求出样品中的蛋白质含量。

3.结果计算样品中的蛋白质含量(mg/g)=(C·Vt)/(1000Vs·WF)式中：C--查标准曲线值（ug）Vt一提取液总体积(ml)WF一样品鲜重(g):Vs一测定时加样量(ml)。

3脯氨酸（Pro）含量的测定药品：3%的磺基水酸：3g 磺基水酸溶在100ml水中。

2.5%酸性茚三酮显色液：冰乙酸和6mol/l磷酸以3：2混合，作为溶剂进行配制：即2.5g茚三酮溶解在 60ml冰乙酸和40ml磷酸中，磷酸是16.4ml和23.6ml 水中。

脯氨酸标准溶液：称取25mg脯氨酸，用蒸馏水定溶至250ml。

1.标准曲线制作（1）取4支具塞刻度试管按下表加入各试剂。

试管号0 2 4 6脯氨酸标准溶液(ml) 0 0.2 0.6 1.0水（ml） 1.0 0.8 0.4 0冰乙酸（ml） 1 1 1 1茚三酮显色液（ml） 1.5 1.5 1.5 1.5脯氨酸含量（µg）0 2 6 10混匀后在沸水中加热20min。

（2）取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。

静置待分层后吸取甲苯层以0号管为对照在520nm波长下比色。

（3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程。

2.样品提取测定（l）提取：剪碎叶片0.2g，置于大试管中，加入5m1 3%磺基水酸溶液，管口加盖保鲜膜，于沸水浴中浸提l0 min。

（2）取出试管，待冷却至室温后，吸取上清液2ml，加2m1冰乙酸、2m1水和4ml显色液，于沸水浴中加热40min，下步操作按标准曲线制做方法进行甲苯萃取和比色。

以甲苯为对照从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，按下式计算样品中脯氨酸含量脯氨酸含量（µg•g-1）（鲜重）＝（C·V）·（a·W）-1式中：C一提取液中脯氨酸含量，由标准曲线求得；V一提取液总体积（ml）；a一测定时所吸取的体积（ml）：W一样品重（g）4相对电导率的测定1.取已处理的叶片,用打孔器取小圆叶片20片（或称取0.5克）,放入小烧杯中，每个处理三次重复。

2．向烧杯中各加入25ml蒸馏水浸半小时。

3．用电导仪测各个处理松针外渗液的电导率和蒸馏水电导率。

4. 各烧杯用保鲜膜盖上，于水浴锅中沸水浴半小时，冷却补充蒸馏水25ml，测定煮沸电导率。

令测蒸馏水电导率叶绿素含量的测定：丙酮乙醇混合法1 将丙酮、无水乙醇按照1:1=5ml:5ml比例配成混合浸提液。

2.称取0.2克叶片，剪成细丝于盛有混合液的试管中，加保鲜膜盖于暗处，浸提，隔一定时间观察浸提情况，以材料完全变白为准，用混合液作空白调零，测定663nm、645nm处光密度，一般隔夜测定。

1取叶片剪碎0.2克，用少量80%的丙酮研磨至匀浆，过滤，用 80%丙酮定溶至 25ML，测测定663nm、645nm处光密度。

每次测量做3次重复。

4超氧化物岐化酶活性（SOD ）的测定SOD其中:A CK :照光对照管的吸光度 A E :样品管的吸光度V T :提取的酶液总体积 Vt :反应时所用酶液体积 W F :植物材料的鲜重试剂：（1） 磷酸缓冲液pH=7.8：含1%聚乙烯毗咯烷酮PVP 微量取A:Na 2HPO 4溶液91.5ml, 取B ：NaH 2PO 4溶液8.5ml ，稀释至200ml 即为缓冲液。

A:Na 2HPO 4溶液：Na 2HPO 4 12H 2O 71.64g, 用蒸馏水定溶至1000ml.B ：NaH 2PO 4溶液：NaH 2PO 4 2H 2O31.2g, 用蒸馏水定溶至1000ml.（2） 0.013mol/L 甲硫氨酸溶液(Met)：称取1.9399gMet,用磷酸缓冲液溶解并定溶至100ml. 自配（3） 6.3×10-6氮蓝四唑（NBT ）:称取0.06133gNBT ，用磷酸缓冲液溶解并定溶至100ml,避光保存。

自配（4） 6.5×10-6mol L -1核黄素：称取0.0075g 核黄素，定溶至100ml,避光保存，随用随配。

自配（5） 1×10-4molL -1乙二胺四乙酸钠EDTA-Na 2: 0.003721g 用磷酸缓冲液溶解并定溶至100ml.反应液： 0.3ml ----0.013mol/L 甲硫氨酸，0.3ml----63×10-6氮蓝四唑，0.3m l----1×10-4molL -1乙二胺四乙酸钠, 2.4ml ----磷酸缓冲液, 0.5ml ----蒸馏水H 2O ， 总计3.8ml 。

试验步骤:（1）取植物材料0.2g 用磷酸缓冲液迅速研磨成粉，放入5ml 离心管。

（2）加入5ml 磷酸缓冲液，提取30min 后，在4℃下10000r/min 离心15min 。

（3）取上清液0.1ml 放在试管中，加反应液，加0.3ml 核黄素，于30℃、4级光照培养箱反应7-8min 。

（4）立即测定560nm 处的吸光值。

另准备2个管，一个黑暗作为调零，一个作为对照照光。

加入如下试剂（0.1ml 缓冲液，3.8ml 反应液,加0.3ml 核黄素）。

注意： 做之前先做几个，看看酶液浓度，切勿大量做。

过氧化物酶活性（POD）的测定磷酸缓冲液（100mmol/L PH=6）配制: 12.3ml Na2HPO4和87.7ml NaH2PO4混合，稀释至200ml。

Na2HPO4和NaH2PO4配法与SOD一样。

反应混合液: 100mmol/L磷酸缓冲液100ml，加入愈创木酚56微升，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待冷却后加入30% H2O238微升，混合均匀，保存于冰箱中。

酶活性的测定:取2只比色杯，一只中加入反应混合液3ml, 磷酸缓冲液 1ml 作为校零对照，另一只加入反应混和液3ml,上述酶液1ml ,立即开动秒表计时，与分光光度计470nm波长下测量值，每隔1min读数一次，以每分钟OD变化值表示酶活性的大小，POD活性 = OD470·Vt /w·vs·t·0.01OD470 –反应时间吸光度的变化W –叶片鲜重gt---反应时间minVt 提取液总体积Vs 测定时取用酶液体积CAT过氧化氢酶的测定粗酶液 0.2ML 加 PH7.8的缓冲液1.5ML，加蒸馏水1ML ，于25度预热10min，加 0.3ml 0.1mol/l H2O2,立即计时比色，240nm下测定，每隔1min 读数一次，4min.0.1mol/l H2O2配制：取30%的H2O2溶液5.6ml,用蒸馏水稀释至1000ml.4抗坏血酸（维生素c）含量的测定--滴定法维生素c具有很强的还原性，染料2,6-二氯酚靛酚具有较强的氧化性，在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。

因此当用蓝色的碱性2,6-二氯酚靛酚溶液滴定含有抗坏血酸的草酸溶液时，其中的抗坏血酸可以将2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型。

但当溶液中的抗坏血酸完全被氧化之后，则再滴2,6-二氯酚靛酚就会使溶液呈红色。

借此可以指示滴定终点，根据滴定用去的标准2,6-二氯酚靛酚溶液的量，可以计算出被测样品中抗坏血酸的含量。

植物材料：试剂： 2%草酸:2，6-二氯酚靛酚溶液：50mg2，6-二氯酚靛酚溶解于200ml含有52mg的NaHCO3 的热水中，冷却后，稀释至250ml.标准抗坏血酸溶液：50mg抗坏血酸溶解于少量的2%的草酸溶液中，然后用2%草酸定溶至500ml.操作方法：（1）称取样品10g，放在研钵中加入2%草酸溶液研磨，定容100 ml，过滤，滤液备用。

（2）染料的标定：取10 ml标准抗坏血酸溶液至蒸发皿中，以2，6—二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色，并在30s不褪色为终点。

计算l ml染料相当于抗坏血酸的毫克数（重复2次，取平均值）。

（3）样品滴定：取滤液10 ml于蒸发皿中，用已标定过的2，6—二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色，并且在30s不褪色为止，记下染料的用量（重复2次，取平均值）。