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常用10种培养基的配置和质控标准

小结:常用10种培养基的配置和质控标准(1)基础肉汤成分和配制方法:蛋白胨10gNaCl5g牛肉膏5g酵母膏3gDW1LpH~15磅30min高压灭菌,倾注无菌试管备用。

每次新配制时做质控阳性质控:ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种基础肉汤中,35℃温箱24h肉汤混浊。

无菌试验:<100管抽检5%,>100管随机抽取10管未接种的基础肉汤35℃温箱24h培养,无细菌生长。

平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做用途:供培养对营养要求不高的细菌增菌用;作其他选择培养基的基础液。

储存干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基:2-8℃保存一个月(2)普通营养琼脂成分和配制方法:基础肉汤100ml琼脂2g15磅30min高压灭菌,倾注平板备用。

注:可购买国内生产的瓶装营养琼脂粉,按上面的说明配制。

质量控制:质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控:ATCC 25923金黄色葡萄球菌或ATCC25922大肠埃希菌接种营养琼脂上,35℃温箱24h细菌生长良好。

无菌试验:<100块抽检5%,>100块随机抽取10管未接种的营养琼脂35℃温箱24h培养,无细菌生长。

平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做用途:供培养对营养要求不高的细菌。

作无糖基础培养基。

加血成血平板。

加血加热75℃以上,再加上生长添加剂就成巧克力平板。

储存干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基:2-8℃保存半个月(3)葡萄糖肉汤成分和配制方法:蛋白胨10g朊胨10gNaCl5g牛肉膏5g酵母粉3g葡萄糖4g枸橼酸钠3g硫酸镁3gDW1LpH~%酚红5ml15磅30min高压灭菌,备用质量控制:质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控:ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种葡萄糖肉汤中,35℃温箱24h肉汤混浊。

无菌试验:<100管抽检5%,>100管随机抽取10管未接种的葡萄糖肉汤35℃温箱24h培养,无细菌生长。

平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做用途:供培养对营养要求不高的细菌增菌用。

6 储存干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基:2-8℃保存一个月(4)血液琼脂平板成分和配制方法:(法国生物梅里埃成品培养基)4g琼脂基础+100mL蒸馏水高压灭菌(15磅、121℃)20min冷却至50℃加入5%-10%无菌羊(兔)血倾注于无菌平皿内(φ9mm)每一个平皿分装13~15ml。

质量控制:质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控:ATCC 6303肺炎链球菌(或质控菌株)和ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种于血液琼脂,35℃温箱24h细菌生长良好。

ATCC 6303肺炎链球菌为α溶血。

ATCC 25923金黄色葡萄球菌为β溶血。

无菌试验:<100块抽检5%,>100块随机抽取10块未接种的血液琼脂35℃温箱24h培养,无细菌生长。

平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做用途:供分离培养营养要求较高的细菌。

储存干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基:2-8℃保存半个月注意事项:制备血平板时,温度必须适宜,琼脂应冷至50℃左右,如温度过高,可使血液变色不易观察溶血,温度过低,琼脂凝固与血液不易混合。

使用的血液以羊血,兔血为好,不宜使用人血,因人血中有抗体、补体不利细菌生长。

羊血对链球菌、葡萄球菌的溶血比较满意,但可抑制脑膜炎奈瑟氏菌与嗜血杆菌的生长。

(5)血液琼脂平板(国产)普通营养琼脂粉 3.8克+100ml蒸馏水10%葡萄糖血液6~10ml冷却至50℃加入5%-10%无菌羊(兔)血倾注于无菌平皿内(φ9mm)每一个平皿分装13~15ml。

质控方法阳性质控:ATCC 6303肺炎链球菌(或质控菌株)和ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种于血液琼脂,35℃温箱24h细菌生长良好。

ATCC 6303肺炎链球菌为α溶血。

ATCC 25923金黄色葡萄球菌为β溶血。

无菌试验:<100块抽检5%,>100块随机抽取10块未接种的血液琼脂35℃温箱24h培养,无细菌生长。

平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做用途:供分离培养营养要求较高的细菌。

储存干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基:2-8℃保存半个月注意事项:制备血平板时,温度必须适宜,琼脂应冷至50℃左右,如温度过高,可使血液变色不易观察溶血,温度过低,琼脂凝固与血液不易混合。

使用的血液以羊血,兔血为好,不宜使用人血,因人血中有抗体、补体不利细菌生长。

羊血对链球菌、葡萄球菌的溶血比较满意,但可抑制脑膜炎奈瑟氏菌与嗜血杆菌的生长。

(6)巧克力平板成分和配制方法:基础肉汤100ml琼脂粉 1.5g无菌脱纤维兔血10ml方法:高压灭菌后,冷至80—85℃加入兔血,混匀置85℃水浴10—15min,使血液由鲜红色变为巧克力色。

取出,当冷至50℃时倾注平板,经无菌试验后,保存冰箱中备用。

质控方法阳性质控:ATCC10211流感嗜血杆菌或ATCC49619淋病奈瑟菌,35℃,5%CO2温箱24-48h,细菌生长良好。

无菌试验:<100块抽检5%,>100块随机抽取10块未接种的巧克力平板35℃5%CO2温箱24-48h培养,无细菌生长。

平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做用途:分离培养脑膜炎奈瑟氏菌,嗜血杆菌。

淋病奈瑟氏菌的分离培养。

储存干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基:2-8℃保存半个月(7)双糖培养基基础液胰蛋白胨10gNaCl5g牛肉膏5gDW1LpH%酚红液6ml制备:(1)基础液500ml葡萄糖1g琼脂 2.5g(2)基础液500ml乳糖5g琼脂7.5g制法:10磅20min高压灭菌高,先将葡萄糖倒入无菌试管内1/3处凝固后,再将乳糖加入2/3处,置成斜面。

质量控制:质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控:将福氏痢疾杆菌(卫生部临床检验中心质控菌株)接种于双糖培养基中,生长良好,上层为红色/下层为无色。

阴性质控:将ATCC27853接种于双糖培养基中,35℃温箱24-48h培养生长良好,上层下层均为红色。

无菌试验:<100管抽检5%,>100管随机抽取10管未接种的双糖培养基35℃温箱24-48h培养,无细菌生长。

平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做。

用途:用于分离培养肠道致病菌。

储存干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基:2-8℃保存半个月(8)MH培养基成分和配制方法:可使用国产(北京奥博星生物技术有限公司)或法国生物梅里埃成品培养基配制:3.8g M-H琼脂基础+100mL蒸馏水高压灭菌(15磅、121℃)20min冷却至50℃倾倒平皿,厚度4mm质量控制:质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控:ATCC25923、ATCC25922接种于MH培养基上,35℃温箱24-48h培养,细菌生长良好。

无菌试验:<100块抽检5%,>100块随机抽取10块未接种的MH培养基35℃温箱24-48h培养,无细菌生长。

平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做。

用途:用于非苛养菌的KB法药敏试验用。

储存干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基:2-8℃保存半个月(9)沙保弱培养基成分:蛋白胨10克,琼脂20克,麦芽糖40克,水1000毫升。

方法:于1000ml水中加入上述成分,加热煮沸,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,使它溶解,趁热调PH到,定量分装于烧瓶内(每瓶100ml),高压灭菌,倾注于无菌平皿内(φ9mm)每一个平皿分装13—15ml。

待凝固后,于37℃培养18—24h,如无细菌生长,置冰箱中备用。

质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控:ATCC90028接种于沙保罗平板上,35℃温箱24-48h培养生长良好。

无菌试验:<100块抽检5%,>100块随机抽取10块未接种的沙保罗培养基35℃温箱24-48h培养,无细菌生长。

平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做。

用途:真菌的分离培养用。

储存干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基:2-8℃保存半个月(10)念珠菌显色培养基成分:由琼脂、蛋白胨、色素、氯霉素等组成配制方法:准确称取科玛嘉念珠菌显色琼脂粉47.7克,加蒸馏水1000毫升,并在玻璃容器壁上标记液面刻度,边搅拌边加热到完全溶解,不要用蒸锅消毒,冷却到45℃后,用氨水矫正PH至,摇匀,将其倾注入一次性无菌培养皿中制成平板,使平板深度为3mm左右。

质控频度每次新配制时做质控质控方法阳性质控:ATCC90028接种于念珠菌显色培养基上,35℃温箱24-48h培养生长良好,菌落为翠绿色。

无菌试验:<100块抽检5%,>100块随机抽取10块未接种的沙保罗培养基35℃温箱24-48h培养,无细菌生长。

平行试验:质控时,要求新旧批号的培养基同时做。

用途:念珠菌的常规鉴定用。

储存干粉:室温保存,由于容易受潮,所以开瓶后务必将盖拧紧。

培养基:2-8℃保存半个月基础质控标准1分离培养基质控细菌生化实验质控。

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