高效液相色谱的基础知识
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高效液相色谱法的特点 高效液相色谱法仪器工作原理 高效液相色谱仪的维护 高效液相色谱法仪的注意事项
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高效液相色谱法的特点
高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70 年代初发展起来的一种新型分离分析技术。它是 在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论， 在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度 检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、 操作自动化的特点。为了更好地了解高效液相色 谱法优越性，现从两方面进行比较：
• 高压输液系统 • 进样系统 • 分离系统 • 检测系统
高效液相色谱仪工作原理
其工作过程如下：
高效液相色谱仪的维护 泵的使用和维护
1.防止任何固体微粒进入泵体，输液泵的滤器应经常清洗或更换。 2.流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内。泵工 作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或 密封环，最终产生漏液。 3.泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏 液。 4.流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气 泡，泵就无法正常工作
高效液相色谱法的特点
高效液相色谱法与经典液相色谱法
高效液相色谱法 速度 灵敏度 高速 高灵敏度 经典液相色谱法 极慢 低
自动化
进料方式 效率
高自动化
高压输液设备 高效
低
重力加料 低
如对氨基酸分离，用经典色谱法，需用20多小时才能分离出20种氨基酸； 而用高效液相色谱法，只需lh之内即可完成。
高效液相色谱仪工作原理
CAP2000+粘度计使用说明书（下）
• • 样品应完全覆盖锥转子底部表面，并且溢出其边沿 1.0mm。 8. 等待约 1至 3分钟，使锥转子、加热板及样品的温度到达设置温度。
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9. 设置运行时间及保持时间。
10. 若使用打印机，使仪器与打印机连机。
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11. 按下 RUN键开始测量。
12. 读取及打印测量结果。
指示剂
甲基橙 石蕊 酚酞
酸碱指示剂变色范围
< 3.1 红 3.1 — 4.4橙色 色 <5.0红色 5.0—8.0紫色
< 8.0 无 8.0—10.0浅红 色 色
> 4.4黄色
> 8蓝色 > 10红色
PH试纸的使用
用PH试纸测定溶液的PH值,一般先把一小块放在表 面皿或玻璃片上，用沾有待测液的玻璃棒点试纸 的中部，不能把试纸放在待测液中，也不能用水 湿润再测定PH值。
5、 不要高压冲洗柱子；
高效液相色谱仪的维护
流动相的脱气
HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统 内逸出气泡，影响泵的工作。
紫外灯的保养
在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在 分析完成后，马上关闭检测器。
高效液相色谱仪的注意事项
一、流动相
流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水
酸碱液及缓冲液需经过滤后使用。
PH计------电位法
ห้องสมุดไป่ตู้
方法原理 用pH计测定溶液pH时，常用玻璃电极为指示电 极，甘汞电极为参比电极。当pH玻璃电极和甘汞 电极插入溶液时，构成一电池反应，两者之间产 生一个电位差，由于参比电极的电位是固定的， 因而该电位差的大小决定于试液中的氢离子活度， 氢离子活度的负对数即为pH，可在pH 计上直接 读出pH值。
仪器及设备
pHSJ-3F计
操作步骤
1.待测液的制备 2.测量前校正：把电极插入缓冲溶液中，使标准溶 液的pH值与仪器标度上的pH值相一致。然后移出 电极，用水冲洗、滤纸吸干后插入另一标准缓冲 溶液中，检查仪器的读数。最后移出电极、用水 冲洗、滤纸吸干后待用。
操作步骤
• 3.测定：把玻璃电极的球泡浸入待测样品的下部 悬浊液中，并轻微摇动，然后将饱和甘汞电极插 在上部清液中，待读数稳定后，记录待测液 pH值。 • 4.测量中校正：每个样品测完后，立即用水冲洗 电极，并用干滤纸将水吸干再测定下一个样品。 在精确的测定中，每测定5～6个样品后，需要将 饱和甘汞电极的顶端在饱和氯化钾溶液中浸泡一 下，然后用pH标准缓冲溶液重新校正仪器。
二、样品
采用过滤或离心方法处理样品，确保中不含
固体颗粒。
高效液相色谱仪的注意事项 三、操作过程
1、先以所用流动相冲洗系统一定时间。正式进样分析前30min 左右 开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；
2、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护。
3、 实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分
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13. 提起手柄，取下锥转子，并且清洁干净。
14. 清洁加热板。
粘度计使用图解
1未接通电之前
2接通电源
3打开电源开关
4系统初始化
8设置运行参数
7加热完成
6压下转子加热
5初始化完成
粘度计使用图解
9放置样品
10压下转子
11放下护罩
12点击开始 （RUN）键
16清洁加热 板
15提起手柄
14读取数据
高效液相色谱仪的注意事项
柱的使用和维护
1、使用前注意适用范围，如pH值范围、不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
2、使用符合要求的流动相；
3、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％
甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。 4、注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
13运行中
粘度计使用图解
17断开电源
18关机完成
19拔下插销
PH值的测定
PH的测定方法
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测定溶液PH值的方法：
• （1）酸碱指示剂用于粗测溶液PH值范围；
• （2）PH试纸用以精略地测定溶液酸碱性的强弱；
• （3）PH计用以精确地测定溶液的PH值。
PH的测定
酸碱指示剂一般是弱的有机酸或弱的有机碱，它们 的颜色变化是在一定的pH值范围内。我们把指示剂 发生颜色变化的pH值范围叫做指示剂的变色范围。
钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯；
粘度计使用说明书
CAP2000+粘度计使用说明书（上）
1. 打开电源开关，若仪器已关闭电源有一段时间(如一个晚上)，应先预热30分钟 • • • • • • • 2. 装上锥转子。 3. 设置转子编号。 4. 设置温度 5. 设置转速 6. 压下手柄，使锥转子接近加热板，并且使手柄位于最低位置。等待约 10分 钟， 使锥转子与加样板温度接近。 7. 提起手柄，把样品加至加热板上，样品量请参考附录 A。轻轻地压下手柄 ，样品