双抗体夹心法原理
以HCG 为例（检测抗原）
此方法较常用，主要用于较大分子量的蛋白（抗原）的检测。

要求两株抗体针对一个抗原的不同位点才可以。

也有个别的检测项目（HIV）是双抗原夹心检测抗体的，原理类似。

HCG 金标记αHCG 金-αHCG-HCG 金-αHCG-HCG -βHCG
金-αHCG -羊抗鼠IgG(Y3)
金-αHCG-HCG
羊抗鼠IgG （Y3）
显示红色显示红色
金标记αHCG
不显色显示红色
金-αHCG -羊抗鼠IgG
阴性反应
阳性反应
βHCG
以吗啡为例（检测抗原）
此方法主要用于小分子抗原（毒品、农药、肽链等）的检测。

由于抗原分子量小不能直接固定于NC 膜上，常常用化学方法把小分子偶联到BSA 等大分子物质上再固定于NC 膜上。

此结果与双抗原夹心法相反，阴性CT 两条都是红线，阳性只有C 线一条红线，T 线不显色。

金-吗啡抗体-吗啡吗啡-BSA 金标记吗啡抗体显示红色不显色金-吗啡抗体-吗啡羊抗鼠尿液(含
吗啡)显示红色
显示红色金标记吗啡抗体金-吗啡抗体-羊抗鼠
阴性尿液
抗体-吗阴性反应
阳性反应金标记吗啡抗体-吗啡-BSA
乙肝E 抗体为例
金标记e 抗体e 抗原e 抗体
金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体-羊抗鼠
不显色显示红色
金标记e 抗体e 抗原金标记e 抗体-e 抗原
金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体显示红色显示红色
金标记e 抗体-e 抗原
羊抗鼠
阳性反应
阴性反应
间接法原理检测抗体
此方法主要用于血清中抗体检测，纯化或者重组的抗原固定于NC 膜上，标记多为蛋白A(ProteinA 或叫SPA，与抗体Fc 端结合而与其它蛋白质不结合)或者鼠抗人（如检测为IgM，则标记为鼠抗人IgM）。

此方法要求胶体金过量（待测样品往往含有大量多种抗体，所检测抗体所占份额很小），一般来说样品再加入前需要稀释或者加极少量后再加样品缓冲液。

一般斑点免疫渗滤法使用也是间接法。

显示红色显示红色
金标记SPA 目的抗体杂抗体阳性反应抗原
杂抗体金标记SPA 抗原不显色显示红色
阴性反应。