试剂的正确使用与保存
按说明书操作，不能想当然； 详实记载----批号、有效期、使用情况及更换试剂记 录等； 索要试剂商相关证件并有效保存，特别是批批检报告 书； 试验用试剂 冰箱内？ 使用时？ 多余部分如何处置？ „„
存在的问题:
（1）将试剂盒从冰箱中拿出即用 后果是：温育时间不够，对一些弱阳性标本的检测出现
3）更换试剂及质控品： 应在“旧”批号质控品及记录质控结果：根据质控图的靶值和 控制限绘制Levey---Jennings控制图，将原始质控结果记录在质控 图表上，保留打印的原始质控记录。
5）质控规则的应用：
判断每一分析批是在控还是失控。
（1）每月室内质控数据处理； （2）每月室内质控数据保存； （3）每月上报的室内质控数据图表。
假阴性，尤其是冬天没有空调的环境里。
要求： 试剂盒从冰箱中拿出室温放置20min以上，与室温平衡， 然后再进行测定。 目的： 在后面的温育反应中，能使反应孔内的温度较快地达到 所要求的高度，以满足要求。
（2）商品化ELISA试剂盒中,洗板液由所提供的浓缩液稀 释配置而成，故所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。 （3）OPD底物溶液必须在反应显色前临时配制。
L/O/G/O
临床免疫学检验质量控制
评价情况总结
临床检验科全面质量管理系统
临 床 检 验 科
建立检验报告解释 咨询及建议的机构
通过实践与文献复习进行方法 学研究、临床意义探讨、经济学 评估，不断开展循征医学工作
检验科与临床密切的信息交流 探讨标本采集各环节影响实验 因素并制定相应制度与措施 医护人员能正确进 行标本采集与运送
评价丙肝试剂盒相关指标一览表
试验 有病 （真阳性） （TP） 98份 （FN） 2份 TP + FN= 100份 无病 （真阴性） （FP） 2份 （TN） 96份 FP+TN= 98份 合 并
阳性
TP+FP= 100份 FN+TN= 98份 TP + FP + FN +TN =198份
阴性
总数
经分析： 相对灵敏度 = TP /(TP + FN) =98/100=98% 相对特异性 = TN/(FP + TN) =96/98=97.96% 相对符合率 = (TP + TN)/(TP + FP + FN +TN) =98+96/198=97.98%
2、可靠性：是指在相同条件下重复试验获得相同结果 的稳定程度。如试验结果为均数，可用变异系数表示。 公式为：CV=s / x × 100% S为标准差，x 为平均值。
列举范例（资料参考）
（1）标准品来源：中国药品生物制品检定所。 （2）标准品模式： 抗HCV预期阳性100份,预期阴性98份。 （3）试剂来源于H厂家。 （4）在一次对丙肝试剂评价试验中，通过使用该试剂对 198份标准品进行检测，发现抗HCV预期阳性100份标本中，检 出阳性98份、阴性2份：预期阴性98份标本中，检出阴性96 份，阳性2份。
2、目前免疫学检验所要控制的仪器
（1）移液器 利用称重法校准：吸取刻度指示量的水，万分之一天平 称重后计算吸量是否正确，一般应在±10%以内。 （2）水浴箱、温箱、冰箱 使用标准温度计，经常检查水浴箱温度计所示的温度与 水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有±1℃的误差 。
（3）洗板机 设置洗板后的残留液一般不超过2ul；人工扣板时，垫纸不 湿；定期检查管孔是否堵塞。
2、外源性干扰因素：如标本溶血、细菌污染、储存时间过长、标
本凝固不全、冷冻保存标本反复冻融等。
（1）尽量避免溶血 红细胞破裂释放出具有过氧化物酶活性物质，增加非特异性显色而成 假阳性。 （2）血清标本宜在新鲜时检测 如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性。 （3）尽量不用抗凝血，尤其不能用肝素抗凝血。
（三）分析后质量控制
1、实验结果报告
（1）统一的报告形式，包含必要的信息，应有核对制 度，当天的报告应由主管或主管委托人审核，签字或盖章后 方能发出。 （2）各项目原始数据及测定结果应保存3—10年，便于 查询。 （3）如遇危及生命的“紧急值”，应立即通知临床诊治 医师予以处置。
2、室内质控数据管理
分析前质量控制
内容提要
• 分析前质量控制 • 分析中质量控制 • 分析后质量控制
一、分析前质量控制
• 培训实验室工作人员； • 建立临床实验室质量管理体系； • 实验室规范设置； • 试剂盒的选择、评价、使用与保存
• 仪器的校准、评价、维护和保养；
• 标本采集、运输、核收、登记、处置与保存； • 质控品、校准品的选择、评价和使用。
1、试剂盒的选择、评价、使用与保存
乙肝等试剂盒 生产批准文号； 生产许可证 经营许可证 药品经营许可证 批批检定合格； 贴有防伪标签。
未作规定的试剂，应从如下方面进行评价： 灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、 安全性及经济性等。
试剂盒的评价
真实性和可靠性 1、真实性：指测量值与实际值符合的程度（诊断试验应 能提供哪些人确实有病（真阳性）和哪些人确实无病（真阴性 ）的指标）。 评价指标 相对灵敏度：是试验检出有病（即阳性）的人数占患者总 数的比例，即真阳性率。相对灵敏度是衡量真阳性率的尺度。 相对特异性：是试验检出无病（即阴性）的人数占无病者 总数的比例，即真阴性率。相对特异性是衡量真阴性率的尺度 。
现有的室内质控血清
项目
梅毒螺旋体抗体 抗HIV 抗HCV 抗HAVIgM HBcAbIgM HBcAb HBeAb HBeAg HBsAb HBsAg 质控血清 国家二级标准物质 国家二级标准物质 质控血清 质控血清 质控血清 质控血清 质控血清 质控血清 国家二级标准物质
由国家质量监督检验检疫总局批准， 可在国家标准物质信息平台 上检索到，网址：http：//
以文件形式存在，便于查阅，并确保得到实施。
（二）分析中质量控制
1、如何做好病毒性肝炎酶免检验质控物定值的选择？ 2、质控品的正确使用； 3、ELISA检测方法的注意事项； 4、室内质控的实际操作步骤；
1.如何做好病毒性肝炎酶免检验质控物定值的选择？ 质控物：高值、中值、低值及阴性值； 设置临界于cut-off(CO值)的低值弱阳性质控物是室内质 控的关键； 低值弱阳性临界值质控物 是室内质控精密度观察的最敏感的窗口，是提示试验成 功与否的最重要标志； 不是判断阴阳性的标准。
抗凝不完全的标本因纤维蛋白原的干扰也可产生假阳性。
（4）标本在冰箱中保存不宜过长 易导致血清IgG聚合，使间接法试剂本底加深。
（5）尽量避免污染
4、建立临床实验室质量管理体系
最重要的一点： “实验室质量管理文件”的书写文件 包含：质量手册、程序性文件、作业指导书和相关表格、 报告等质量记录。 程序性文件：包括管理性和技术性文件两种。 作业指导书：包括检测细则、标准操作程序(SOP)
（4）酶标仪 经常维护其光学部分，防止滤光片霉变；定期检查校准， 使其保持良好的工作性能。
3、临床标本的收集与保存
免疫试验标本十分广泛， 体 液：如血清、血浆、各种积液； 分泌物：如唾液、脑脊液； 排泄物：粪便、尿液；
均可用于测定其中的抗原或抗体成分，一般使 用血清。
可能影响测定结果的标本因素
患者标本中有可能会含有干扰酶免疫测定导致假阳性 和假阴性结果的干扰因素，其分为两类： 1、内源性干扰因素：类风湿因子、补体、高浓度的 非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体、因使 用鼠抗体治疗或诱导的抗鼠Ig抗体、交叉反应等。
2、质控品的正确使用
用 途：灵敏度控制、精密度控制 。 稳定性： 1、室温（20-25 ℃，相对湿度20-25%）可稳定两周； 2、高温高湿度（37 ℃，相对湿度60-80% ）条件下， 可稳定3天； 3、在冰箱内冷藏（2-8 ℃）保存，可稳定一年； 4、-20℃保存可稳定一年以上。
室内质控血清的规格
结果判读
卫药发（1995）第32号及（1996）第25号文要求：
凡开展ELISA检测项目的单位，必须使用酶标仪判读结果，不准使 用目测法。
ELISA测定的“灰区”
是指ELISA测定时，吸光度处于Cut—off值周围的一定区域，其结果应 为“可疑”。需重复实验或换试剂重测以确定其阴、阳性，如仍落在灰区范 围内则报告±值。
HBeAg质控血清
定值 1NCU/ml 2NCU/ml 4NCU/ml 适用试剂 进口的试剂 国产试剂 国产试剂
新的4NCU/ml≈原0.25 NCU/ml
HBeAb质控血清
定值 1NCU/ml 2NCU/ml 4NCU/ml 适用试剂 进口的试剂 进口的试剂 国产试剂
3、 检测方法的注意事项
6）失控情况处理：
失控----填写失控报告单----交专业室主管（组长）---- 作出 是否发出检验报告的决定。
7）失控原因分析 操作失误、试剂、校准物、质控品的失效，仪器维护 不良以及采用的质控规则、控制限范围、一次测定的质控 标本数等。 失控信号出现：意味着与测定质控品相关的那批病人 标本报告可能作废。 8）查明失控原因 随机挑选5%或10%的患者标本进行重测，依既定标准判 断先前测定结果是否可接受，对失控做出正确判断。
灰区概念对血站系统的献血员筛查尤为重要 灰区的设置有两种 （1）C.O×（1±CV），CV为该试剂的批内CV（一般在15%--20%间） 。如：HBsAg 1.05 ×（1±18%） （2）C.O±2s，s为实验室做室内质控OCV的s。如：HBsAg 1.05±2 × 0.189
原始记录
（1）分类别、客观、如实、准确、及时登记，项目齐全、书写清晰
评价试剂盒相关指标一览表
试验 有病 （真阳性） TP 无病 （真阴性） FP 合 并
阳性
TP + FP