2.1无乳链球菌对各种抗菌药物的药敏纸片结果 使用药敏纸片法检测无乳链球菌对14种抗菌药物的感受性。结果表明：无乳
链球菌对甲砚霉素、盐酸环丙沙星、氨苯西林钠、强力霉素、交沙霉素、氟苯尼考、
磺胺二甲唏睫，这7种抗菌药物的敏感性最好（几乎都为高敏）,其余7种抗菌药
物部分地区无明显抑菌圈产生。硫氧酸红霉素和盐酸土霉素仅对江门的菌株有抑菌
技术
无乳链球菌 对抗菌类药物的感受性研究
文丨广东省动物疫病预防控制中心林华剑
链球菌是鱼类重要的致病 菌之一，可危害多个品种。罗 非鱼链球菌病的病原主要是海 豚链球菌(Streptococcus iniac ) 和无乳链球菌(Streptococcus agalactiac ),自 2009年始，南 方罗非鱼病原主要为无乳链球 菌。无乳链球菌也叫做B群链球 菌(GBS),是广泛存在于自然 界中的一种革兰氏阳性细菌，可 引起牛乳腺炎、鱼类脑膜炎等疾 病，危害较大。罗非鱼对链球菌 高度敏感，全年均可发病，高温 最易流行。被感染的鱼特征性症 状是异常的螺旋状旋转游泳，在 水面作头向上或者尾向上的转圈 游动。慢性感染的鱼类出现眼睛 异常如眼眶周围和眼球内出血， 眼球混浊，眼球突出等症状。病 鱼皮肤、粘膜、颅内和嘴、吻、 鲍盖和鲍丝呈显著的发红或出 血，体表变黑等。
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图1 4个地区的无乳链球菌对各抗生素的抑菌圈直径柱状图
表2 16株无乳链球菌对7种抗菌药物的感受性
抑菌浓度（mg/L ）和菌株数（株）
M 100 50 25 12.5 6.25 3.13 1.56 0.78 0.39 0.20 0.10 0.05 0.02
首先将供试药物采用适宜的溶酶溶解 后，用灭菌生理盐水分别稀释至lOOO.Omg/ L的浓度。然后在无菌条件下，用灭菌后的 液体培养基将药物稀释10倍，从而使培养 基中药物的浓度达到100.0mg/L的浓度。再 用定量移液枪向每支盛有2.9mL胰蛋白腺液 体培养基的试管中加入2.9mL含有药物的培 养基，将试管在混悬器上混合均匀后，从中 吸取2.9mL含有药物的胰蛋白腺液体培养基 加到下一试管中，以此类推制作成药物浓度 分别为 100.0mg/L、50.0mg/L、25.0mg/L....... 0.025mg/L的2倍稀释药物系列培养基试管。 最后，定量吸取0.1 mL浓度约为1.2 x 106cfu/ mL活菌液(比浊法测定)加入上述每支试 管中，摇匀。置于25七条件下培养72h,经 肉眼观察证实无细菌生长试管中的最低药物 浓度，即为药物的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC ) 0
1.材料与方法
1.1供试菌株 2017年6-8月，从广东省4 个城市的养殖场饲养的罗非鱼体 内，分离出16株无乳链球菌。 菌株具体信息如表1所示。 1.2供试材料 抗生素：为我国现允许使 用的14种水产用抗菌素类药物： 氨茉西林钠、硫酸新霉素、磺胺 二甲喀喘、盐酸土霉素、强力霉 素、甲矶霉素、氟苯尼考、磺胺 咳睫、磺胺甲噁醴、磺胺间甲氧 、恩诺沙星、硫氤酸红霉素、 交沙霉素和盐酸环丙沙星。 药敏纸片：本检测所用药 敏纸片均为自制。自制药敏片方 法如下：取新华1号定性滤纸， 用打孔器将其打成6.0mm直径的 圆形纸片。取50片放入清洁干 燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层 牛皮纸包扎。经高压消毒后，烘 干。接着向上述含有50片滤纸 的青霉素瓶内加入药液0.25mL, 并翻动滤纸,使其充分浸透药液, 标记好药物名称后，放在371 温箱过夜72小时，干燥后密封。 培养基：药敏试验选用的 分离和纯化培养基为BHIA培养 基；药敏试验培养基为MHA培 养基。 1.3供试菌株最小抑菌浓度 的测定
^017.08.23
2017.06.26
罗非鱼
YF39
2017.06.26
YF49
2017.07.07
YF57
2017.07.07
JM06
2017.07.14
JM010 JM026
b /丄|门J -^22001177..0077..1244
JM027
2017.07.24
I 100
技术
2・结果
3.分析与建议
2017年6月至8月期间，我 们采集广东省4个市的人工养殖 罗非鱼，进行内脏器官的接菌培 养，共分离出无乳链球菌16株。 使用常见的水产用抗菌素药物做 了药敏试验。为生产一线在面对 水产用抗菌素药物时，做到科学 选择、正确使用、提高细菌防控 成效、降低药物用量等提供实验 基础。结果表明，盐酸环丙沙星、 强力霉素、交沙霉素、氟苯尼考 和磺胺二甲疇I®对无乳链球菌的 抑菌效果明显。
甲矶霉素
1 15
盐酸环丙沙星 强力霉素
盐酸土霉素 9 3 交沙霉素 氟苯尼考
磺胺二甲U密唳
6
10
78
1
4
22
7~ 8 —厂］
293
表3无乳链球菌对抗生素感受性测定结果
（单仇林）
抗生素
甲碘霉素 盐酸环丙沙星
强力霉素 盐酸土霉素
交沙霉素 氟苯尼考 磺胺二甲喀唳
S敏感株
16 ( 100% ) 16 ( 100% )
4 (^5% ) 16 ( 100% ) 16 ( 100% ) 16 ( 100% )
注：表中括号前为菌株数，括号内数字为百分比
表1无乳链球菌分离菌株信息表
编号
菌种名
采样 地点
采样时间
鱼种|
MM15
2017.08.01
MM18 MM27
2017.08.01
戊占
2017.08.24
MM44
2017.08.24
ZJ41
2017.07.28
ZJ46 ZJ54 ZJ62 YF32
S. agalactiac
2017.07.28 /S/-L 2017.08.23
作用；与此截然不同的是，硫酸新霉素对江门的菌株无抑菌效果，对其它三个地区
的菌株抑菌效果良好。磺胺咳喘、磺胺间甲氧曙睫、恩诺沙星和磺胺甲噁哩均无明
显因抑菌圈产生（见图1 ）。 2.2无乳链球菌对抗菌药物的感受性 综合药敏纸片结果，选取了其中有效的7种抗菌药物，测定了 16株无乳链球
菌的抗菌药物感受性，结果如表2所示。