快 速 、有 效 的 真 菌 油 脂 提 取 方 法 无 疑 会 事 半 功 倍 。 我 们 在 多 不 饱 和 脂 肪 酸 高 产 菌 株 的
筛 选 工 作 中 ，建 立 了 一 种 新 的 真 菌 油 脂 提 取 方 法 — — 酸 热 法 ，本 文 将 其 与 油 脂 提 取 常 用 的 索 氏提 取 法 、有 机 溶 剂 法 及 超 临 界 ｏ０ 萃 取 法 进 行 了 比较研 究 。 ，
２ ５ ， 维 持 １ ｒｉ。 ２℃ ５ ｎ ａ
２ 结 果
２ １ ４种 方 法 提 取 雅 致 枝 霉 油 脂 的 综 合 情 况 比较 ．
（ ｈ ｄ ｔｒｌ ｕａ ｔ ｃ ） Ｒ ｏ ｏｏ ａ ａ ａ ｒｎｉ ａ ，均 购 自中 国科 学 院微 生 物 研 究 所 国家 菌 种 保 藏 中 心 ｌ ａ １ １ ２ 试剂 及 标 准 品 ：各 种 化 学 试 剂 均 为 国 产 分 析 纯 ； １ ．． ５种 脂 肪 酸 甲酯 标 准 品 购 自 Ｓｇ ｉ－
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自 １８ ９ ５年 日本 首 先 采 用 微 生 物 发 酵 生 产 亚 麻 酸 ，真 菌 已 成 为 生 产 多 不 饱 和脂 肪 酸 的 一 种 重 要 新 资 源 ＿ 。野 生 型 菌 株 油 脂 及 多 不 饱 和 脂 肪 酸 含 量 均 较 低 ，必 须 经 诱 变 ｌ 一
育种 ，才 能筛选 到高产菌株 。由于菌 株筛选 是 一种 大 量而繁 重 的工 作 ，采用一 种 简便 、
１２２索 氏提 取 法 ：发 酵 液 离 心 集 菌 ， 菌 体 沉 淀 于 １０Ｃ烘 干 ， 研 成 粉 末 后 装 人 索 氏 提 ．． ０ｏ
取 器 ，石 油 醚 加 热 回流 提 取 ６ ，旋 转 蒸 发 去 除 石 油 醚 即得 油 脂 ｈ ２。
１２３超 临 界 ｃ 萃 取 法 （Ｅ －Ｏ ．． ｍ Ｓ ＦＣ ２法 ） ：美 国 Ｄ Ｏ Ｅ 公 司 ｓ Ｅ — ７３型 超 临 界 萃 取 ＩＮ Ｘ Ｆ— ２
１ １ 材 料 ． １ １ １菌 株 ：雅 致 枝 霉 （ ｈ ｎ ｄｔｎ ｅ ｇ ｎ 、拉 曼 被 孢 霉 （ ｒｅｅｔ ａ ａｔｉ ｔｅ 、 ．． ７ ａ ｍｉｉ ｔ ａｇ） ｏ ｅ Ｍｏｔ ｒｌ ｒｍ ｒｌｚ ＇） ｉ ａ ｔｔ ｚ ｔ
少 根 根 霉 （Ｒ ｉ ｐ ｓ ｒｈ ｕ 、 畸 雌 腐 霉 ｈｚ ｕ ａ ｒｉ ｓ） ｏ ｚ （Ｐ ｔｉ ｎ ｒｅ ｌ ｒ 、 橙 黄 红 酵 母 ｙｈ ｏ ｉ ｇｄ ｅ） ｔ ｒ ａ
仪 。发 酵 液 离 心 集 菌 ， 菌 体 沉 淀 于 １０Ｃ烘 干 ，研 成 粉 末 后 装 入 萃 取 管 ， 萃 取 压 为 ０ｏ ４ ＮＰ ，选 用 ２ ０ Ｚ ｎ 限 流 管 。 萃 取 室 温 度 ４ ℃ ， 分 离 室 温 度 ５Ｃ。 萃 取 时 问 Ｏ ａ ５ ｍ［ ｍｉ ５ ￣
Ｆ ＮＥ ａ 英 毛 细 管 色 谱 柱 （０×０３ Ａ ｗ ｘ石 ３ ．２×０２ ） 检 测 器 为 氢 火 焰 离 子 检 测 器 （ Ｉ 。 ．５ 。 ＦＤ）
进 样 口温 度 ２ ５Ｃ，检 测 器 温 度 ２ ０ ，分 流 比 １ １ ２￣ ５℃ ０： ，线 速 ３ ｅ ｍ ｎ ０ ｍ／ ｉ ，衰 减 １ 。 程 序 ６ 升温 条 件 为 ： 柱 温 １０Ｃ， 维 持 １ ｌ 以 ０ ３ ｍｉ 升 至 １ １ ９ｏ ｍｉ ， ｌ ℃／ ｎ ９ ｏ 再 以 ４Ｃ／ ｉ Ｃ， ｏ ｍ ｎ升 至
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＊ 军 队九 丘医药卫 生 科研 基金 瓷助 课题 （ １ ６ ％ ３ ９ ０
收 稿 日期 ： ２０ ４９ Ｉ ， 修 回 日期 ：２ ０１）．３ ０ ０ ）－５ ０ ４１２
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２０ ０ １年 ２ （ ） ８ ６
微 生 物 学 通 报
１ 材 料 与 方 法
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Ｌ ｚ Ｆ ｎ Ｚ Ａ Ｇ Ｉｎ Ｓ Ｅ ） ａ －ｉ Ｌ Ｉ ｉｇ Ｓ ｎ Ｓ Ｎ Ｓ ｕＱ ｎ Ｉ — ｅｇ Ｈ Ｎ Ｊｇ Ｈ Ｎ ｆ ｏＪ ｇ ｉ ｎ Ａ Ｂ ｎ － ｅ Ｕ ｈ － ｉ
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１２ ４有 机溶 剂 法 ：发 酵 液 离心 集 菌 ，菌 体 沉 淀 按 每 克 菌 体 ３ ．． ｍＬ的 比例 加 人 氯 仿 ： 甲 醇 （ ： ）提 取 液 ，充 分 振 荡 ２ｍｉ ，再 加 入 ｌ １２ ｎ ｍＬ氯 仿 ，振 荡 混匀 ，加 １５ Ｈ ０，振 荡 混 匀 ．ｍＬ ２ 后 ５ ０ ｒｒｉ 心 ５ｒ ｎ ０ ０ ／ ｎ离 ａ ｉ ，取 氯仿 层 ， 加 等 体 积 ０ １ 氯 化 钠 溶 液 ，混 匀 ，５ ０ ｒ ｒ ｎ离 心 ｎ ．％ ０ ０／ ｉ ａ ５ｍｉ ，取 氯 仿 层 ，挥 发 除 去 氯 仿 即 得 油 脂 Ｊ ｎ １２ ５油 脂 中 脂 肪 酸 的 气 相 色 谱 分 析 ：０．ｇ油 脂 加 入 皂 化 液 （ ．ｍｏ Ｌ Ｋ Ｈ 甲 醇 ） ．． ２ ０５ ｌ Ｏ 一 ／ ２ ，混 匀 ， 于 ６ ℃ 水 浴 皂 化 至 油 珠 消 失 ，冷 却 后 加 人 甲 酯 化 液 （４ 三 氟 化 硼 ． ｍＬ ０ １％ 甲醇 ） ２ ，于 ６ ℃ 水 浴 甲酯 化 ３ ｍ ｎ ｍＬ ０ ０ ｉ ，冷 却 后 加 人 正 己烷 ｌ ，饱 和 氯 化 钠 ｌ ，离 心 后 取 ｍＬ ｍＬ 上清 夜 ， 即 可 用 Ａ ｔｓｓ ｍ Ｌ气 相 色 谱 仪 （ 国 Ｐ ｒｉ－ ｌ ｒ 司 ） 分 析 油 脂 组 成 。 ｕｏｙｔ Ｘ ｅ 美 ｅｋｎＥｍｅ 公
中 国分 类 号 ：Ｑ９ ３ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：０５ —６ ４ （ 【 １ ６０ ７ ４４ ２ ３２ ５ ａｘ ）０ －０２ ） ）
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１ ２ 方 法 ．
１ ２ １酸 热 法 ：发 酵 液 离 心 集 菌 ， 菌 体 沉 淀 按 每 克 菌 ６ ．． ｍＬ 的 比 例 加 人 ４ ｌＬ 盐 酸 ， 振 ｍｏ ／
荡混 匀 ，室 温 放 置 ３ ｒ ｎ后 ，沸 水 浴 ３ ｉ ，一０Ｃ速 冷 ，加 人 ２倍 体 积 氯 仿 ： 甲 醇 （ ： ０ｔ ｉ ｆ ａ ｒｎ ２ ｏ １ １ 提 取 液 ，充 分 振 荡 后 ，５ ０ ｒｍｉ 心 ５ ｒ ｎ ） ０ ０ ／ ｎ离 ｉ ，取 氯 仿 层 ， 加 等 体 积 ０ １ 氯 化 钠 溶 ａ ．％ 液 ，混 匀 ，５ ０ ｒｍｉ 心 ５ｍｉ，取 氯 仿 层 ，挥 发 除 去 氯仿 即 得 油 脂 。 ０ ０／ ｎ离 ｎ
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微 生 物 学 通 报
２０ ０ １年 ２ （ ） ８ ６
四 种 真 菌 油 脂 提 取 方 法 的 比 较 研 究
李植峰 张 玲 沈晓京 赖炳森 孙树秦
北 京 １０ ７ ） ０ ０ １
（ 放 军 北京 军 医学 院生 化教 研 室 解
摘 要 ：采 用索 氏法 、超 临 界 ０ｏ ２萃取 法 、酸热 法 和有 机 溶 剂法 分 别 提 取 雅 致 枝 霉 、拉 曼 被 孢 霉 、少 根根 霉 ，畸雌 商 霉 和橙 黄 红 酵母 的 油 脂 ，从 样 品 要 求 最 小 洋 品 量 、仪 器 要 求 处理 样 品能力 及 油 脂得 率 等 方面 对 ４种 提 取 方 法进 行 综 台 评 价 ，并 对索 氏法 、超 临 界 ｃ０ 革 取法 和酸 热法提 取 的雅 致枝 霉 油脂 的 脂肪 酸 组 成进 行 气 相 色 谱 分 析 。索 氏法 的 油 脂 得 率 最 高 ．但 耗 时较 长 ；超 临界 ０ｏ 莘 取 法 和 酸热 法 的 油脂 得 率相 近 ，较 索 氏 法 略低 ，但 酸 势 ２ 法 更 为 简便 ，单 位 时 间 内样 品处 理 能力 强 ；有 机 溶 剂 法提 取 效 果 最 差 。我 们 建 立 的酸 热 法 是 一种 适台 油脂 及 多 不饱 和脂 肪 酸 高产 菌 株筛 选 的简便 、有 效 的真 菌油 脂提 取 方法 。 关 键词 ：真 菌 ，油 脂 ，提 取方 法