生物 工程
霞品研究与开发
Ｆｏ ｄＲｅｅ ｒ ｈ Ａｎ ｖ ｐ ｎｔ ｏ ｓａ ｃ ｄＤｅ ｄｏ ｍｅ
２１ ０ １年 ６月
第３ 卷 期 １ ２ 第６ １ ９
产脂肪酶菌株的筛选及产酶条件优化
李 鑫玲 ’孙晓菲 ’孟楠 ’ 卜 ， ， ， 美玲 ’刘进 。
（． １河南科 技大学 食 品与生物 工程学 院 ， 河南 洛阳 ４ １０ ； ． 岛啤酒 （ ７０３ ２青 太原 ） 有限公司 ， 山西 太原 ０ ０ ３ ） ３０ ２
４ 结 语
Ｃ ｏｅｅ ［ ． ｕｒｉｎＲ ｓａｃ ， ０ ，６ ５ ６ ５ ０ ｒ ａ ｔｎｓＪ Ｎ ｔ ｔ ｅｅｒｈ ０ ６２ ： ５ — ６ １ ｉｏ ２ 【】 Ｊｎ ａ Ｍ． ｏｄ ＇－ ｕｉ＇ ｅ ｎ ｒ ｏｏｅ ｕ ｕ ｅＣ ｓ ｏ ３ ａｎｔ Ｒ ｌａ Ｇ ｔ ｒ ｚａｄＭａ ａＤ ｌｒｓＬ ｑ ｅｄ ａｔ ． ｎ ｅｒ ｉ ｒ
摘 要 ： 土壤样本 中分 离出一株具有较 高活力 的产脂肪酶 菌株 ， 步确定为假 单胞菌属。对该 脂肪 酶产 酶条件进 从 初
行 优 化 ， 佳 碳 源为 糊精 、 最 氮源 为 硫 酸铵 ， 适发 酵 温度 为 ３ ， 最 ０℃ 最适 起 始 ｐ 为 ７ 。 Ｈ ． ０
关键词 ： 脂肪酶 ； 假单胞菌属 ； 产酶条件
６・ Ｏ
芎。 ０ 墓４ 。 ０
赡 ３０ ．
速搅 拌均匀 ， 高压灭菌倒板前再用磁力搅拌器混匀 ； 种
子培养 基 （ ： 萄糖 ２ ，Ｎ ２ ．， Ｐ ４ ．， ％）葡 ． （ Ｈ ） ０ ０ ＫＨ Ｏ ０１ ０ ｓ ５ 橄榄油 １ ， Ｓ ７ ． ， 白胨 ２５ ｐ ．； 酵 ． ＭｇＯ ・Ｈ ００ ５ 蛋 ０ ０ ．，Ｈ ７ 发 Ｏ 培养基（ ： 白胨 ２ ， ％）蛋 ． 蔗糖 ０ ， ０ ． 橄榄油 １ ，Ｎ ４￣ ４ ５ ． （ Ｈ ） Ｏ ０ Ｓ
ｄ ｔ ｍｉａｉ ［． ｒｎ ｓ ｎＡ ａｙｉ ｌ ｈ ｍ ｓｙ ２ ０ ， ６２：６ 一 ｅｅ ｎｔ ｎＪ Ｔｅ ｄ ｎ ｌｔａ ｅ ｉｔ ， ０ ７ ２ （） ３ ｒ ｏ ］ ｉ ｃ Ｃ ｒ １
ｌＯ ７
［ 成 坚， ４ ］ 曾庆孝． 番茄红素 的性质及生理 功能研 究进展【 ＿ 品发 酵 Ｊ食 １
品工程 ，０ ８ｌｆ） ４— ６ ２ ０ ，２４： １ １
收 稿 臼期 ：０ ０ １－ ７ ２ １— ０ ０
１ ０ ２
－ －＇ － － － ．
李鑫 等： 脂肪酶菌株的筛 玲， 产 选及产酶条 件优化
性 ， 呼吸代谢 ， 步鉴定 为假单 胞菌 属。 有 初
２３ 产酶条件 的优化 ．
２３ 不 同碳 源对产酶的影 响 ．１ ．
产 量 为 ４ ．１ ｍ ／。 ４ ９３ ｇ ９ Ｌ
【 吴疆 ， ５ 】 童应凯 ， 金红， 番茄红素的生 物特性及应用前 景［ ． 津 等． Ｊ天 Ｊ 农学 院学报 ，０ ７１（ ： —５ ２０， ４４ ０ ４ ）７
ｌ］ 张邦建， 峰， ６ 王海 侯成林 ． 发酵法生产 番茄红素工艺 的研 究【． ｊ食 】
ｏ ｏ ｔ ｒ ｄ ｃ ｓ ａ ｄ ｔ ｅ ｒ ｃ ｎ ｒｂ ｔ ｎ ｔ ｉ ｙ ｏ ｎ ｎ ａ ｅ ｏ ｆｔ ｍａ ｏ ｐ ｏ ｕ ｔ ｎ ｈ ｉ ｏ ｔ ｕ ｉ ｏ ｔ ｅ ｌｃ ｐｅ ｅ ｉｔ ｋ ｆ ｉ ｏ ｌ
孢 布 拉 氏霉 菌发 酵生 产番 茄红 素所 得到 的 菌体 干重 在发 酵时间为 １８ ０ ｈ时达到最大 。 合以上试验指标 ， 综 选择 １０ ２ ｈ作为最佳发酵周期 。
一
碳源 ， 结果显示 ， 碳源对产酶 有一定 的影 响 ， 以糊精
桥 下 以及周 山森 林公 园周 围等 油 污丰 富的 土壤 淤
１ 培养基 ． ２
为碳源效果最佳 ， 对应酶活 为 ６ ／Ｌ 见 图 １ ．Ｕ ｍ ， ０ 。 ２３ 不 同氮源对产酶 的影响 ．． ２
７Ｏ ‘
泥 中， 共采集 ４ 份土样 ， ５ 供分离用 。
与工业 ，０ ０２ （）７ — ９ ２ ０ ，６２ ：５ ７
发酵周期对番茄红素产量的影响 ， 得到最适合生产番
茄红素 的培养条件 ： 培养 正菌接种 时间ｌ 一５ｈ 种子 ２ｈ １ ， 负菌接种 时间 ２ 一５ｈ接种 比例 １ 、Ｈ 、 酵温度 ０ ２ 、 ｈ ： ｐ ７发 ５
２ ８℃ 、 发酵周 期 １０ 。 酵条件 优化后 番茄红素平均 ２ 发 ｈ
０１ Ｍｇ Ｏ ・ Ｈ２ ．５ Ｋ ＨＰ ４ ． ，Ｈ 自然 。 ． ， Ｓ ４７ ０００ ， ２ Ｏ ０１ ｐ
避
２． Ｏ ｌＯ ・
Ｏ
麦芽糖 可 性 粉 糊精 葡 萄糖 溶 淀
碳源
蔗糖
１ 产脂肪酶菌株 的筛选 ． ３ 称 取湿土样 ２ｇ 混悬于 ２ Ｌ无菌 水 中 ， ０ｍ 振荡 ； 接 ３ｍ １混悬液 于 ３ Ｌ液体 富集 培养基 中 ，在 ３ 、 ０ｍ ２ｑ Ｃ ２ ０ｒ ｉ 下培 养 ４ｄ后 ，无 菌操作 转接 ３０ Ｌ浑浊 ０ ｒ ｎ ／ ａ ０ 的菌液 到新 鲜的液体 富集培养基 ， 连续富集 ３轮 。 将富
茄红素 的生成量在 发酵进行 １０ｈ时达到最大 。在随 ２
后的 １０ｈ １８ｈ中 ， ２ 一 ６ 番茄 红素 的产量逐渐 减少 ， 而三
参考文献 ：
［ Ｐ ｉａ ， ｕｓｌＲ Ｂ ｔｃｒｔｎ ａ ｄ ｔｅｅｒｔｎ ｉｓ ｓｎｉｘｄｎｓ １ 】 ａｖ Ｓ Ｒ ｓｅ ｌ ｅ ａｏ ｅ ｎ ｏｈｒ ａｏｅｏｄ ａ ａｔ ｉａｔ ａ ｅ ｏ 【． ｍ Ｃ ｌ Ｎ ｔ ｔ ｎＲ ｓａｃ ， ９ １：２ － ３ Ｊ ＪＡ ｏ ， ｕｒｉ ｅｅｒｈ １９ ， ４ ６ ４ ３ 】 ｌ ｉｏ ９ ８ ［］ Ｋ ｅ ｉ ｒｋ ｖ ＭｉａａＨ ｕ＇ａ， ａ ａ ａ ｃｉ Ｌ ｃｐ ｎｃｎｅ ｔ ２ ｓｎ ａＭａ ｏｉ ， ｒ ｎ ｒｓ ｒＮ ｄ ｈ ￣ ． ｙｏｅ ｔｎ ｊ ｅ ｊ ｋ Ｖ ｃ ｏ
（ ． ｏｄａ ｄＢｏ ｎ ｉｅ ｒ ｇＤ ｐ ｒ ｎ， ｎ ｎＵｎｖ ｒｉ ｆ ｃｅ ｃ ｎ ｅ ｈ ｏｏｙ Ｌ ｏ ａ ｇ４ ０ ， ｎ ｎ Ｃ ｉａ １ Ｆ ｏ ｎ ｉｅ ｇｎ ｅｉ ｅ ａｔ ｔＨｅ ａ ｉｅｓ ｙｏ ｉｎ ｅａ ｄＴ ｃ ｎ ｌｇ ， ｕ ｙ ｎ ７ ３ Ｈｅ ａ ， ｈｎ ； ｎ ｍｅ ｔ Ｓ １ ０
生物工程
油污 丰富 的土壤 中筛 选得 到一 株有 较高 产脂 肪酶 活
力的菌株 ， 并研究了它产酶的最适条件 。
１ 材料与方法
１１ 土 样 ．
以可溶 性淀 粉 、 萄糖 、 精等 不 同碳 源 代替 发 葡 糊 酵培养基 中的蔗糖 ， 或不加糖类物质 ， 只以橄榄油为惟
一
从河 南洛 阳 ， 南科 技大 学学 校周 围 、 河 天津 路八
Ｓ ｒ ｅ ｉ ｆＬｉ ａ ｅ Ｐｒ ｄｕ ｉ ｒ ｉ ｓ ａ ｃ ｅ ｎ ｎｇ ｏ ｐ ｓ ｏ ｃｎｇ Ｓｔａ ｎ ｎｄ Ｏｐｔｍｉａ ｉｎ ｆｔ ｅ Ｌｉ ｓ ｏ ｕｃｉ ｎ ｉ ｚ ｔｏ ｏ ｈ ｐａ ｅ Ｐｒ ｄ ｔｏ
Ｌ ｎ ｌ ｇ， Ｕ ａ － ｅ ＭＥ ａ Ｂ ｉ ｌ ｇ ， Ｉ ｎ Ｉ Ｘｉ－ ｉ Ｓ Ｎ Ｘｉｏ ｆ ｉ ｎ ， ＮＧ Ｎ ｎ Ｕ Ｍｅ－ ｉ Ｌ Ｕ Ｊ ｎ ｉ
富 集 培 养 基 （ ：酵母 膏 ０ ２， ａ Ｐ ． ， ％） ． Ｎ ２ Ｏ ０３ ０ Ｈ ５
Ｋ ２Ｏ ０１， ｇＯ ＂ＨＯ０ ５Ｎ Ｃ ０ ５ ＨＰ ． Ｍ Ｓ ４ ２ ． ，ａ １． ，橄榄油 １】 Ｈ ５ ７ ０ ０ －， （ｐ ７０ 平板分离培养基 （ ： ．； ％）酵母膏 ０ ， 肉膏 ０ ， 白 ．牛 ２ ．蛋 ２ 胨 １ ， 榄 油 １ ， 脂 １ ，Ｈ ７ ， ．橄 ０ ．琼 ０ ． ｐ ． 用食 品搅 拌器 高 ５ ０
添加 酵母 浸膏 、 肉膏 、 牛 尿素 、 ２％的蛋 白胨 、 豆 黄 粉、 硫酸铵 等氮源对菌体 发酵有不 同的影 响。结果 表 明， 硫酸铵是最佳 的氮源 ， 对应酶活为 １ ／ Ｌ 见 图２ Байду номын сангаас５ ｍ ， Ｕ 。
集后菌液适 当稀释 ，涂布分离平板 。观察 已生长 的菌 落周 围有 无透 明圈 ， 选择有透 明圈 的菌 落进行划 线纯
图 １ 不 同碳源对产酶的影响
Ｆｉ． Ｅｆｅ ｔｏ ａ ｂ ｎ Ｓ Ｕ＇ｅＯ ｉ ａ ｅ ｒ ｄｕ ｔ ｎ ｇ１ ｆ ｃ ｆｃ ｒ ｏ Ｏ Ｉ ｆ ｌｐ ｓｓ ｐ ｏ ｃｉ Ｃ ｏ
Ｌ ｃ ｐ ｎ ：Ｔｈ ｅ ｄ ｆｒ ｂ ｔｅ ｔ ｏ ｓ ｆｒ ｃ ａａ ｔｒｚ ｔ ｎ ｎ ｙｏ ｅ ｅ ｅ ｎ ｅ ｏ ｅｔｒ ｍｅｈ ｄ ｏ ｈ ｒｃｅｉａｉ ａ ｄ ｏ
通 过对 三孢 布拉 氏霉菌 发酵 生 产番茄 红 素过程 中培 养条件 的研 究 ， 考察 了在相 同发 酵培养 基培养条 件下 ， 同菌种 接种 时间 、 不 接种 比例 、Ｈ、 ｐ 发酵 温度及
脂肪 酶是 能够催 化 长链脂 肪 酸甘 油酯水 解 和合
成的羧酸酯酶ｆ 是 当代酶工业最受瞩 目的酶种之一阁 １ 】 ， 。
作者简介 ： 李鑫玲 （９ ２ ）女（ ）助理实验师 ， １８ 一 ， 汉 ， 硕士 ， 方向 ： 研究 畜
产 品加工及食品质量与安全 。
脂肪酶广 泛存在 于许 多动植物及微 生物 中 ， 已有 多种 微生物脂肪酶实现商业化生产 ， 主要应用于油脂分解 、 食品风味和香味的改进 ， 医疗和皮革脱脂 ， 低等油脂的 改性 ， 洗涤 剂和化妆 品的添加剂等 。本文介 绍 了从
２ Ｔ ｉｇａ ｒｗ ｒ ｏ， ｔ． ａｙ ａ ３ ０ ２ Ｓ ａｘ， ｈｎ ） ． ｓ ｔｏＢ ｅ ｅｙＣ ．Ｌｄ， ｉｕ ｎ０ ０ ３ ， ｈ ｎ ｉＣ ｉａ ｎ Ｔ
Ａｂｓｒ ｃ ： ｈｉ ｔ ｅ ｉ ｅ ｒｓｔ ａ ｉａ ｅ ｐ ｏ ｕｎ ａ ｔｒａ ｔａｎ ｗａ ｓ ｌｔｄ ｆｏ ｔ ｅ ｏｌｓ ｉ ｓ ｍｐ ｅ ｎ ｔａ ｔ Ｔ ｓ ｈ ｓｓｒｐｏ ｈ ｔａ ｌ ｓ － ｒ ｄ ｉｇ ｂ ｃｅｉｌｓｒ ｉ ｓｉｏａｅ ｒ ｍ ｈ ｉ ｏｌ ａ ｌｓａ ｄ ｔ ｐ ｙ ｗａ ｄ ｎ ｉ ｅ ｓ ｐ ｅ ｄ ｍｏ ａ ．Ｔｈ ｉ ａ ｅ ｆｒ ｎ ａｉｎ ｃ ｎ ｔ ｎ ｆｒ ｔｅ ｓｒ ｉ ｓｏ ｔｍｉｅ ｙ ｓｕ ｙｎ ｎ ｓｉ ｅ ｔ ｄ ａ ｓ ｕ ｏ ｎ ｓ ｉ ｆ ｅ ｌ ｓ ｅ ｍｅ ｔｔｏ ｏ ｄｉｏ ｏ ｈ ｔａｎ ｗａ ｐ ｉ ｚ ｄ ｂ ｔ ｄ ｉ ｇ ｏ ｐ ｉ ｅ ｅ ｔｏ ｉ ｏ ｅ ｏ ｒｅ ， ａｂ ｎ ｓ ｕ ｃ ｓａ ｄ ｏｈ ｒｉｆｕ ｎ ｅｆｃｏ ｓ Ｔｈ ｐ ｉ ｍ ａ ｂ ｎ ａ ｄ ｎ ｔｏ ｅ ｏ ｒ ｅ ｆ ｃ ｆｎｔ ｇ ｎ ｓ ｕ ｃ ｓ ｃ ｒ ｏ ｏ ｒ ｅ ｎ ｔ ｅ ｎ ｅ ｃ ａ ｔｒ． ｅ ｏ ｔ ｒ ｌ ｍｕ ｃ ｒ ｏ ｎ ｉ ｇ ｎ ｓ ｕ ｃ ｒ ｗａ ｅ ｔｉ ｎ ｍｍｏ ｉ ｍ ｕｆ ｔ． ｈ ｐ ｉ ｍ Ｈ ｓ７．， ｎ ｈ ｐ ｉ ｍ ｍｐ ｒ ｔｒ ｏ ｅｍｅ ｔｔ ｎ ｗａ ｓｄ ｘｒｎ ａ ｄ ａ ｎ ｕ ｓ ｌａｅ Ｔ ｅ ｏ ｔ ｍｕ ｐ ｗａ ０ ａ ｄ ｔ ｅｏ ｔｍｕ ｔ ｅ ｅ ａｕ ｅｆｒｆｒ ｎａ ｉ ｓ ｏ ３ ０℃ ． Ｋｅ ｒ ｓ ｌ ａ ｅ ｐ ｅ ｄ ｍｏ ａ ； ｐ ｉ ｌｉ ａ ｅ ｐ ｏ ｕ ｉ ｇｃ ｎ ｉ ｏ ｙｗｏ ｄ ：ｉｓ ； ｓ ｕ ｏ ｎ ｏ ｔ ｐ ｓ ｍａ ｐ ｓ － ｒ ｄ ｃｎ ｏ ｄ ｔ ｎ ｌ ｉ